膠質(zhì)母細(xì)胞瘤(glioblastoma multiforme,GBM)發(fā)生于中樞神經(jīng)系統(tǒng),有著生存率低、惡性程度高、復(fù)發(fā)率高、侵襲性高的特點(diǎn)。由于GBM呈浸潤(rùn)性生長(zhǎng),手術(shù)難以完全切除,目前在臨床上最有效的治療方法是手術(shù)切除腫瘤并聯(lián)合放療。然而由于放療抵抗的存在,大多數(shù)患者的腫瘤仍然會(huì)復(fù)發(fā)。GBM的放療抵抗與DNA雙鏈斷裂(DNA double strand breaks,DSBs)修復(fù)激活有著十分密切的關(guān)系。我們?cè)谇捌谘芯恐邪l(fā)現(xiàn),糖原合成酶激酶3β(Glycogen synthase kinase 3β,GSK3β)可在電離輻射的作用下由胞漿轉(zhuǎn)移至胞核,結(jié)合p53結(jié)合蛋白1(p53 binding protein,53BP1)并誘導(dǎo)其磷酸化,繼而促進(jìn)U87細(xì)胞DSBs修復(fù)過(guò)程,增加腫瘤的放療抗性,使細(xì)胞凋亡減少且細(xì)胞增值率增加。由于前期實(shí)驗(yàn)都是體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn),因此需要通過(guò)構(gòu)建荷瘤鼠模型進(jìn)一步研究特異性化學(xué)抑制GSK3β的表達(dá)可否體內(nèi)消除GSK3β的核易位,并抑制GSK3β參與53BP1介導(dǎo)的DSBs修復(fù),從組織和動(dòng)物水平來(lái)評(píng)估GSK3β作為靶點(diǎn)的放療增敏劑開(kāi)發(fā)的科學(xué)依據(jù)。研究方法為接種U87細(xì)胞懸液于裸鼠皮下,建立荷瘤鼠摸型,并將其隨機(jī)分為4組:1)對(duì)照組:荷瘤鼠模型建立成功后,不給于任何治療;2)IR組:荷瘤鼠模型建立成功后,給予25Gy電離輻射處理;3)SB216763組:荷瘤鼠模型建立成功后,給予腹腔注射5mg/kg SB216763;4)SB216763+IR組:荷瘤鼠模型建立成功后,先給予腹腔注射5mg/kg SB216763,再給予25Gy電離輻射處理。觀察并記錄20天內(nèi)各組荷瘤鼠體內(nèi)腫瘤的體積變化、體重變化和100天內(nèi)荷瘤鼠的生存曲線(xiàn),并將荷瘤鼠皮下腫瘤剝離、稱(chēng)重并固定以進(jìn)行TUNEL原位染色。研究結(jié)果表明SB216763+IR處理組與IR處理組、SB216763處理組和對(duì)照組相比腫瘤體積與腫瘤重量顯著減少(n=10,P0.05 by ANOVA with Bonferroni post-hoc test),小鼠體重恢復(fù)明顯(n=10,P0.05 by ANOVA with Bonferroni post-hoc test);從生存曲線(xiàn)判斷,SB216763+IR處理組與其它組相比荷瘤鼠的生存時(shí)間顯著延長(zhǎng)(n=10,P0.05 by Kaplan-Meier)。此外,TUNEL標(biāo)記處理的SB216763+IR組腫瘤組織中可觀察到更多的U87凋亡細(xì)胞。因此基于上述定性和定量分析的結(jié)果,表明GSK3β抑制劑SB216763能增加膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的體內(nèi)放射敏感性。
【學(xué)位單位】：電子科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類(lèi)】：R739.41
【文章目錄】：
摘要
abstract
第一章 緒論
    1.1 研究工作的背景與意義
    1.2 國(guó)內(nèi)外研究現(xiàn)狀
        1.2.1 GBM治療策略研究現(xiàn)狀
        1.2.2 GSK3與腫瘤的國(guó)內(nèi)外研究歷史與現(xiàn)狀
    1.3 本文的主要貢獻(xiàn)與創(chuàng)新
    1.4 本論文的結(jié)構(gòu)安排
第二章 實(shí)驗(yàn)材料及方法
    2.1 試劑
    2.2 儀器設(shè)備
    2.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與細(xì)胞株
    2.4 主要試劑的配制
        2.4.1 DMEM完全培養(yǎng)基的配制
        2.4.2 細(xì)胞凍存液的配制
        2.4.3 PBS緩沖液配制
        2.4.5 10 %中性福爾馬林固定液
        2.4.6 乙醇梯度溶液的配制
        2.4.7 PROTEINASEK工作液的配制
    2.5 實(shí)驗(yàn)方法
        2.5.1 U87細(xì)胞培養(yǎng)
        2.5.2 荷瘤鼠模型的建立
        2.5.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組
        2.5.4 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物處置
        2.5.5 腫瘤體積與重量觀察
        2.5.6 TUNEL原位染色觀察荷瘤鼠體內(nèi)U87細(xì)胞凋亡
        2.5.7 荷瘤鼠體重與生存曲線(xiàn)觀察
        2.5.8 統(tǒng)計(jì)方法
第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.1 荷瘤鼠成瘤性結(jié)果
    3.2 各組荷瘤鼠腫瘤體積比較
    3.3 各組荷瘤鼠腫瘤重量比較
    3.4 各組腫瘤直徑比較
    3.5 TUNEL染色結(jié)果
        3.5.1 對(duì)照組的TUNEL染色結(jié)果
        3.5.2 SB216763+IR組的TUNEL染色結(jié)果
    3.6 各組荷瘤鼠體重比較
    3.7 各組荷瘤鼠生存時(shí)間比較
        3.7.1 對(duì)照組生存時(shí)間
        3.7.2 IR組生存時(shí)間
        3.7.3 SB216763組生存時(shí)間
        3.7.4 SB216763+IR組生存時(shí)間
        3.7.5 各組荷瘤鼠生存曲線(xiàn)
    3.8 本章小結(jié)
第四章 討論
    4.1 實(shí)驗(yàn)方法的討論
        4.1.1 輻射方式與射線(xiàn)劑量的確定
        4.1.2 SB216763抑制劑的選擇
        4.1.3 裸小鼠異位移植瘤模型的建立
        4.1.4 裸小鼠治療時(shí)間的選擇
        4.1.5 細(xì)胞凋亡檢測(cè)：TUNEL和DAPI染色
        4.1.6 生存分析
    4.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果的討論
第五章 全文總結(jié)及展望
    5.1 全文總結(jié)
    5.2 后續(xù)工作展望
綜述
致謝
參考文獻(xiàn)

【參考文獻(xiàn)】

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