膠質(zhì)母細胞瘤(glioblastoma multiforme,GBM)發(fā)生于中樞神經(jīng)系統(tǒng),有著生存率低、惡性程度高、復發(fā)率高、侵襲性高的特點。由于GBM呈浸潤性生長,手術(shù)難以完全切除,目前在臨床上最有效的治療方法是手術(shù)切除腫瘤并聯(lián)合放療。然而由于放療抵抗的存在,大多數(shù)患者的腫瘤仍然會復發(fā)。GBM的放療抵抗與DNA雙鏈斷裂(DNA double strand breaks,DSBs)修復激活有著十分密切的關(guān)系。我們在前期研究中發(fā)現(xiàn),糖原合成酶激酶3β(Glycogen synthase kinase 3β,GSK3β)可在電離輻射的作用下由胞漿轉(zhuǎn)移至胞核,結(jié)合p53結(jié)合蛋白1(p53 binding protein,53BP1)并誘導其磷酸化,繼而促進U87細胞DSBs修復過程,增加腫瘤的放療抗性,使細胞凋亡減少且細胞增值率增加。由于前期實驗都是體外細胞實驗,因此需要通過構(gòu)建荷瘤鼠模型進一步研究特異性化學抑制GSK3β的表達可否體內(nèi)消除GSK3β的核易位,并抑制GSK3β參與53BP1介導的DSBs修復,從組織和動物水平來評估GSK3β作為靶點的放療增敏劑開發(fā)的科學依據(jù)。研究方法為接種U87細胞懸液于裸鼠皮下,建立荷瘤鼠摸型,并將其隨機分為4組:1)對照組:荷瘤鼠模型建立成功后,不給于任何治療;2)IR組:荷瘤鼠模型建立成功后,給予25Gy電離輻射處理;3)SB216763組:荷瘤鼠模型建立成功后,給予腹腔注射5mg/kg SB216763;4)SB216763+IR組:荷瘤鼠模型建立成功后,先給予腹腔注射5mg/kg SB216763,再給予25Gy電離輻射處理。觀察并記錄20天內(nèi)各組荷瘤鼠體內(nèi)腫瘤的體積變化、體重變化和100天內(nèi)荷瘤鼠的生存曲線,并將荷瘤鼠皮下腫瘤剝離、稱重并固定以進行TUNEL原位染色。研究結(jié)果表明SB216763+IR處理組與IR處理組、SB216763處理組和對照組相比腫瘤體積與腫瘤重量顯著減少(n=10,P0.05 by ANOVA with Bonferroni post-hoc test),小鼠體重恢復明顯(n=10,P0.05 by ANOVA with Bonferroni post-hoc test);從生存曲線判斷,SB216763+IR處理組與其它組相比荷瘤鼠的生存時間顯著延長(n=10,P0.05 by Kaplan-Meier)。此外,TUNEL標記處理的SB216763+IR組腫瘤組織中可觀察到更多的U87凋亡細胞。因此基于上述定性和定量分析的結(jié)果,表明GSK3β抑制劑SB216763能增加膠質(zhì)母細胞瘤的體內(nèi)放射敏感性。
【學位單位】：電子科技大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R739.41
【文章目錄】：
摘要
abstract
第一章 緒論
    1.1 研究工作的背景與意義
    1.2 國內(nèi)外研究現(xiàn)狀
        1.2.1 GBM治療策略研究現(xiàn)狀
        1.2.2 GSK3與腫瘤的國內(nèi)外研究歷史與現(xiàn)狀
    1.3 本文的主要貢獻與創(chuàng)新
    1.4 本論文的結(jié)構(gòu)安排
第二章 實驗材料及方法
    2.1 試劑
    2.2 儀器設備
    2.3 實驗動物與細胞株
    2.4 主要試劑的配制
        2.4.1 DMEM完全培養(yǎng)基的配制
        2.4.2 細胞凍存液的配制
        2.4.3 PBS緩沖液配制
        2.4.5 10 %中性福爾馬林固定液
        2.4.6 乙醇梯度溶液的配制
        2.4.7 PROTEINASEK工作液的配制
    2.5 實驗方法
        2.5.1 U87細胞培養(yǎng)
        2.5.2 荷瘤鼠模型的建立
        2.5.3 實驗動物分組
        2.5.4 實驗動物處置
        2.5.5 腫瘤體積與重量觀察
        2.5.6 TUNEL原位染色觀察荷瘤鼠體內(nèi)U87細胞凋亡
        2.5.7 荷瘤鼠體重與生存曲線觀察
        2.5.8 統(tǒng)計方法
第三章 實驗結(jié)果
    3.1 荷瘤鼠成瘤性結(jié)果
    3.2 各組荷瘤鼠腫瘤體積比較
    3.3 各組荷瘤鼠腫瘤重量比較
    3.4 各組腫瘤直徑比較
    3.5 TUNEL染色結(jié)果
        3.5.1 對照組的TUNEL染色結(jié)果
        3.5.2 SB216763+IR組的TUNEL染色結(jié)果
    3.6 各組荷瘤鼠體重比較
    3.7 各組荷瘤鼠生存時間比較
        3.7.1 對照組生存時間
        3.7.2 IR組生存時間
        3.7.3 SB216763組生存時間
        3.7.4 SB216763+IR組生存時間
        3.7.5 各組荷瘤鼠生存曲線
    3.8 本章小結(jié)
第四章 討論
    4.1 實驗方法的討論
        4.1.1 輻射方式與射線劑量的確定
        4.1.2 SB216763抑制劑的選擇
        4.1.3 裸小鼠異位移植瘤模型的建立
        4.1.4 裸小鼠治療時間的選擇
        4.1.5 細胞凋亡檢測：TUNEL和DAPI染色
        4.1.6 生存分析
    4.2 實驗結(jié)果的討論
第五章 全文總結(jié)及展望
    5.1 全文總結(jié)
    5.2 后續(xù)工作展望
綜述
致謝
參考文獻

【參考文獻】

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本文編號：2848812