研究目的:腦梗死是一個(gè)常見的神經(jīng)系統(tǒng)疾病,目前對于該病的治療,臨床常用的方法有溶栓、抗凝和抗血小板等內(nèi)科治療。而溶栓治療會引發(fā)腦梗死后出血性轉(zhuǎn)化(Hemorrhagic transformation,HT)。ERK5途徑被認(rèn)為絲裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinase,MAPK)信號通路重要組成部分,可以在哺乳動物的多種組織中普遍表達(dá),而ERK5可能與炎癥和許多疾病的發(fā)生、發(fā)展有著密切的聯(lián)系。本研究通過構(gòu)建大鼠持續(xù)性腦缺血及出血性轉(zhuǎn)化模型,觀察大鼠腦組織ERK5在腦出血轉(zhuǎn)化過程中的激活表達(dá)情況,探討ERK5在腦出血轉(zhuǎn)化過程可能發(fā)揮的作用及其臨床指導(dǎo)意義。研究方法:健康成栓線繼續(xù)栓塞24h。假手術(shù)組與出血性轉(zhuǎn)化組相同,但栓線插入2cm左右后隨即拔出,不造成大腦中動年雄性Sprague-Dawley大鼠180只(體質(zhì)量250-300g)隨機(jī)分為假手術(shù)(Sham)組,持續(xù)性缺血(Ischemia)組和腦出血性轉(zhuǎn)化(HT)組,每個(gè)組隨機(jī)分為4h,8h,16h,24h四個(gè)不同時(shí)間點(diǎn)。采用Z-Longa線栓法及謝惠芳等的改良方法制作大鼠右側(cè)大腦中動脈閉塞(middle cerebral occlusion,MCAO)模型,出血性轉(zhuǎn)化組分別在大腦中動脈栓塞4h,8h,16h,24h后拔出栓線,再灌注24h。持續(xù)性缺血組在4h,8h,16h,24h后不拔出脈的栓塞。采用Berderson評分法在大鼠術(shù)后2h進(jìn)行評分。利用TTC染色法進(jìn)行染色,觀察大鼠腦組織梗死及出血情況。采用western blotting檢測ERK5的蛋白激活表達(dá)水平,采用real-time PCR檢測mRNA的表達(dá)。結(jié)果:1.神經(jīng)功能評分:假手術(shù)組大鼠均未見明顯神經(jīng)功能損害,持續(xù)性缺血組和出血性轉(zhuǎn)化組都有不同水平的神經(jīng)功能缺失。2.TTC染色:假手術(shù)組未顯示梗死及出血區(qū),持續(xù)性缺血組各亞組腦組織呈現(xiàn)白色梗死區(qū),但是未見明顯出血點(diǎn)或紅色血腫,而在腦出血轉(zhuǎn)化組8h時(shí)即可在白色梗死區(qū)發(fā)現(xiàn)不同程度的血腫形成,且16h和24h亞組的血腫發(fā)生率較高。3.western blotting檢測結(jié)果:與假手術(shù)組相比,腦出血性轉(zhuǎn)化組和持續(xù)性缺血組各時(shí)間點(diǎn)p-ERK5的蛋白表達(dá)顯著增高(P0.05)。與持續(xù)性缺血組各亞組相比,腦出血性轉(zhuǎn)化組各亞組p-ERK5蛋白表達(dá)量也明顯增高(P0.05)。腦出血轉(zhuǎn)化組各亞組之間隨時(shí)間的延長p-ERK5蛋白表達(dá)量逐漸升高,至16h時(shí)達(dá)到高峰,至24h時(shí)表達(dá)量仍維持在較高的水平(P0.05)。持續(xù)性缺血組各亞組之間隨時(shí)間的延長p-ERK5蛋白表達(dá)量也稍有升高,但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。各大組及各個(gè)亞組之間總ERK5蛋白表達(dá)量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。4.real-time PCR結(jié)果顯示,三個(gè)大組及各亞組之間ERK5 mRNA的表達(dá)量差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:大鼠腦缺血及腦出血轉(zhuǎn)化可以誘導(dǎo)ERK5的激活,使ERK5參與腦缺血與出血轉(zhuǎn)化過程并在此過程中發(fā)揮重要作用。
【學(xué)位單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R743.3
【部分圖文】：

功能評分為 3 分的大鼠進(jìn)行 TTC 染色觀察后發(fā)現(xiàn)，在 8 小時(shí)亞組內(nèi)即可在白色梗死區(qū)發(fā)現(xiàn)有不同程度的血腫及出血點(diǎn)形成，且 16h 和 24h 亞組的血腫發(fā)生率更高，所選的16只大鼠中有12只大鼠都可見到不同程度的血腫出現(xiàn)，發(fā)生率可達(dá)75%[圖1]，結(jié)果說明該出血轉(zhuǎn)化模型較為成功，出血率較高。

青島大學(xué)碩士學(xué)位論文4]。假手術(shù)組四個(gè)亞組之間的 p-ERK5 蛋白表達(dá)量基本無顯著差異（P>0.05) [圖 4]。隨后，我們檢測了各組大鼠 ERK5 的蛋白表達(dá)的情況，在整個(gè)實(shí)驗(yàn)觀察中發(fā)現(xiàn)，假手術(shù)組、持續(xù)性缺血組及出血性轉(zhuǎn)化組之間和各個(gè)亞組之間的總 ERK5 蛋白表達(dá)量差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05)[圖 3，圖 5]。

圖 3.各組大鼠在同一時(shí)間點(diǎn) ERK5 蛋白表達(dá)量的比較Fig.3 Expression of ERK5in each group at the same time注：(A) Western blot analysis of ERK5 with β-actin as the reference. (B) Quantified protein levelof ERK5 at 4h, (C) Quantified protein level of ERK5 at 8h, (D) Quantified protein level of ERK5 at16h, (E) Quantified protein level of ERK5 at 24h. *P<0.05 vs sham group, #p<0.05 vs ischemia group.

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2826492