帕金森病(Parkinson's disease, PD),是一種常見的中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病,主要由于環(huán)境毒素和(或)遺傳因素引起中腦黑質(zhì)多巴胺(dopamine, DA)能神經(jīng)元凋亡、壞死,從而出現(xiàn)一系列的靜止性震顫、肌強(qiáng)直、運(yùn)動遲緩和姿勢不穩(wěn)等癥狀。由于PD病因病機(jī)的復(fù)雜性,目前尚無理想的治療方法。西藥雖然能控制癥狀,但長期服用多出現(xiàn)療效減退或運(yùn)動障礙加劇等副作用。根據(jù)中醫(yī)對PD病理病機(jī)的認(rèn)識,腦為元神之府,為髓海,在臨床上頭針治療PD獲得較好的療效,舞蹈震顫控制區(qū)為治療PD的特效區(qū)域。目前已發(fā)現(xiàn)腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(Brain derived neurotrophic factor, BDNF)對DA能神經(jīng)元具有較強(qiáng)的保護(hù)和促生長作用。故本實(shí)驗(yàn)以1-甲基-4-苯基-1,2,4,6-四氫吡啶(1-methyl-4-phenyl-1,2,4,6-tetrahydropyridine, MPTP)誘導(dǎo)PD模型小鼠為研究對象,從BDNF和其酪氨酸激酶受體(Tyrosine receptor kinaseB, TrkB)及其下游信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路探討針刺舞蹈震顫控制區(qū)對PD的治療作用,揭示針刺治療PD的可能機(jī)制與作用環(huán)節(jié),為中醫(yī)臨床針灸治療PD提供新的思路與實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 本實(shí)驗(yàn)分為兩部分：(1)通過觀察針刺舞蹈震顫控制區(qū)對PD小鼠行為學(xué)、中腦黑質(zhì)病理學(xué)、DA能神經(jīng)元丟失的影響,探究其對PD小鼠的治療作用。(2)運(yùn)用免疫組化和Western blot方法觀察針刺舞蹈震顫控制區(qū)對PD小鼠腦內(nèi)BDNF及其受體TrkB和其下游信號分子的影響,探究針刺治療PD對DA能神經(jīng)元保護(hù)作用的可能機(jī)制及作用環(huán)節(jié)。 實(shí)驗(yàn)選用C57BL/6J小鼠,采用爬桿法進(jìn)行訓(xùn)練篩選,選取四肢并用且順利從桿頂爬下的小鼠隨機(jī)分為5組：正常對照組(簡稱正常組)、模型對照組(簡稱模型組)、美多巴治療組(簡稱美多巴組)、針刺治療組(簡稱針刺組)、針刺結(jié)合美多巴治療組(簡稱針美組)。正常組不進(jìn)行任何處理,其余四組采用腹腔注射生理鹽水配制的0.2%MPTP溶液,劑量為20mg/(kg·d),連續(xù)注射5d,建立PD模型,并進(jìn)行相應(yīng)治療。動物存活期為28d。 主要實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下： 1.針刺舞蹈震顫控制區(qū)對PD模型小鼠行為學(xué)的影響 腹腔注射MPTP后,小鼠出現(xiàn)不同程度的肢體震顫,豎毛豎尾急性反應(yīng)。造模5天后小鼠出現(xiàn)體重減輕、毛色暗淡、行動遲緩等表現(xiàn),爬桿時間延長。對爬桿時間進(jìn)行評分,與正常組相比,模型組計(jì)分比正常組明顯減少(P0.05),三個治療組較模型組均有明顯增加(P0.05)。 2.針刺舞蹈震顫控制區(qū)對PD模型小鼠黑質(zhì)病理學(xué)的影響 模型組黑質(zhì)神經(jīng)元數(shù)目與正常組相比有明顯減少,并可見細(xì)長深染萎縮的神經(jīng)元,三個治療組的黑質(zhì)神經(jīng)元較模型組增多,殘存神經(jīng)元中形態(tài)正常的較多 3.針刺舞蹈震顫控制區(qū)對PD模型小鼠DA能神經(jīng)元的影響 免疫組化結(jié)果顯示,四個造模組酪氨酸羥化酶(Tyrosine hydroxylase, TH)陽性神經(jīng)元的數(shù)目均較正常組明顯減少(P0.05),但針刺組和針美組的數(shù)量較模型組和美多巴組增加,其中針美組的數(shù)量較美多巴組顯著增加(P0.05)。 4.針刺舞蹈震顫控制區(qū)對PD模型小鼠腦BDNF的影響 Western blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,模型組腦BDNF的表達(dá)比正常組明顯降低(P0.05)；而針美組表達(dá)比模型組明顯增加(P0.05)。 5.針刺舞蹈震顫控制區(qū)對PD模型小鼠TrkB的影響 免疫組化結(jié)果顯示,在黑質(zhì)致密部：模型組和美多巴組TrkB表達(dá)與正常組相比有明顯降低(P0.05)；針刺組、針美組表達(dá)比模型組明顯升高(P0.05)；針刺組表達(dá)比美多巴組表達(dá)明顯升高(P0.05)；針美組表達(dá)比針刺組明顯降低(P0.05)。 在海馬,模型組CA3區(qū)TrkB的表達(dá)較正常組明顯減少(P0.05),針刺組CA1-CA4區(qū)比正常組、模型組和美多巴組的表達(dá)有明顯升高(P0.05)；針美組的CA1和CA2區(qū)的表達(dá)較模型組明顯升高(P0.05)。 6.針刺舞蹈震顫控制區(qū)對PD模型小鼠PSD-95的影響 Western blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,模型組、美多巴組和針美組PSD-95表達(dá)比正常組明顯降低(P0.05),其中美多巴組的表達(dá)最低,但針刺組的表達(dá)與正常組無明顯差別；針刺組及針美組與美多巴組比較,表達(dá)量明顯上升(P0.05)。 7.針刺舞蹈震顫控制區(qū)對PD模型小鼠Akt的影響 免疫組化結(jié)果顯示,在黑質(zhì)致密部,針美組Akt與其余各組相比,表達(dá)明顯升高(P0.05)。其余各組之間無明顯差異。 在海馬CA1區(qū),模型組、美多巴組和針刺組Akt表達(dá)均較正常組有明顯下降(P0.05)；針美組在CA1、CA3和CA4區(qū)的表達(dá)比模型組和美多巴組明顯升高(P0.05)；針美組在CA1和CA4的表達(dá)比針刺組有明顯上升(P0.05)。 結(jié)論：(1)采用C57BL/6J小鼠腹腔注射MPTP,從行為學(xué)和病理學(xué)方面均出現(xiàn)與PD患者發(fā)病較相近的變化,表明模型復(fù)制成功。腦內(nèi)BDNF和受體及其突觸相關(guān)蛋白的減少可能與PD的發(fā)病及多巴胺神經(jīng)元丟失有關(guān)。但沒有充分證據(jù)表明BDNF-TrkB信號轉(zhuǎn)導(dǎo)與磷酯�；�3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)通路有關(guān)。(2)單獨(dú)針刺舞蹈震顫控制區(qū)和針刺結(jié)合美多巴有一定保護(hù)DA神經(jīng)元的作用,其中針?biāo)幒嫌帽Ｗo(hù)效果優(yōu)于針刺單獨(dú)使用,而單獨(dú)應(yīng)用美多巴無明顯的保護(hù)作用。(3)單獨(dú)針刺舞蹈震顫控制區(qū)可能通過增加Trk B受體和突觸信號整合發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用,但與PI3K/Akt通路關(guān)系不大。(4)針刺舞蹈震顫控制區(qū)合并美多巴治療可以在一定程度上通過影響通過調(diào)節(jié)BDNF-TrkB及PI3K/Akt通路發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用。(5)美多巴單獨(dú)應(yīng)用并不能通過TrkB受體和突觸信號整合以及PI3K/Akt通路發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用。
【學(xué)位單位】：北京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2014
【中圖分類】：R742.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2816116