背景急性一氧化碳中毒后遲發(fā)性腦病(delayed encephalopathy after acute carbon monoxide poisoning,DEACMP)是指經(jīng)搶救完全恢復的急性一氧化碳中毒(acute carbon monoxide poisoning,ACMP)患者,通過約2-60天“假愈期”(完全正常或基本正常),再次出現(xiàn)急性癡呆、精神異常等為主要癥狀的一種疾病,是一種嚴重的器質性精神病,在ACMP患者中發(fā)病率約10%~30%,具有恢復慢、并發(fā)癥多、預后差等特點,且缺乏明確有效的預測和治療手段,嚴重影響的患者及其家庭的生活質量。既往眾多關于DEACMP患者腦脊液和外周血分子生物學水平變化的研究提示本病具有遺傳易感性。根據(jù)全基因組關聯(lián)分析(Genome-wide association study,GWAS),本課題篩組選出DEACMP相關的單核苷酸多態(tài)性(single nucleotide polymorphisms,SNPs)基因位點,對潛在關聯(lián)的候選基因SNP位點進一步驗證,揭示DEACMP發(fā)病可能的機制,為預防、診斷和治療提供新的思路和分子靶點。目的通過富含亮氨酸重復序列及鈣調蛋白同源結構域的蛋白1(Leucine-rich repeat and calponin homology domain-containing protein 1,LRCH1)基因單核苷酸多態(tài)性位點(rs1539177,rs17068697,rs9534475,rs2236592)和急性一氧化碳中毒后遲發(fā)性腦病的關聯(lián)研究,發(fā)現(xiàn)新的參與DEACMP發(fā)病的遺傳易感基因。方法1.DEACMP患者在住院次日清晨6-8點空腹采血,ACMP患者在清醒后1日內(nèi)空腹采血。用EDTA抗凝真空采血管自肘靜脈采集研究對象外周血標本3ml,并保存于-70℃冰箱中。2.提取及鑒定樣本DNA。3.運用Sequenom分型檢測技術進一步分析驗證LRCH1基因多態(tài)性與DEACMP遺傳易感性。結果1.LRCH1基因rs1539177位點:等位基因關聯(lián)分析結果顯示DEACMP組與ACMP組患者rs1539177位點等位基因頻率分布比較差異無統(tǒng)計學意義(Pobs=0.050346)。三種遺傳模式(共顯性遺傳、顯性遺傳、隱性遺傳)下rs1539177基因型與DEACMP發(fā)病的相關性分析結果顯示,對于共顯性模型,Pobs=0.043729,OR=1.279(1.007-1.624);對于顯性遺傳模型,Pobs=0.018579,OR=1.511(1.070-2.133);對于隱性遺傳模型,Pobs=0.50527,OR=1.165(0.743-1.828)。2.LRCH1基因rs17068697位點:等位基因關聯(lián)分析結果顯示DEACMP組與ACMP組患者rs17068697位點等位基因頻率分布比較差異無統(tǒng)計學意義(Pobs=0.056602)。三種遺傳模式(共顯性遺傳、顯性遺傳、隱性遺傳)下rs17068697基因型與DEACMP發(fā)病的相關性分析結果顯示:對于共顯性模型,Pobs=0.043125,OR=1.285(1.008-1.6381);對于顯性遺傳模型,Pobs=0.009228,OR=1.770(1.147-2.729);對于隱性遺傳模型,Pobs=0.466963,OR=1.146(0.794-1.653)。3.LRCH1基因rs9534475位點:等位基因關聯(lián)分析結果顯示DEACMP組與ACMP組患者rs9534475位點等位基因頻率分布比較存在顯著性差別[Pobs=0.038445,OR=1.273(1.013-1.601)]。三種遺傳模式(共顯性遺傳、顯性遺傳、隱性遺傳)下rs9534475基因型與DEACMP發(fā)病的相關性分析結果顯示:對于共顯性模型,Pobs=0.035878,OR=1.285(1.017-1.623);對于顯性遺傳模型,Pobs=0.005935,OR=1.617(1.147-2.280);對于隱性遺傳模型,Pobs=0.742672,OR=1.077(0.693-1.674)。4.LRCH1基因rs2236592位點:等位基因關聯(lián)分析結果顯示DEACMP組與ACMP組患者rs2236592位點等位基因頻率分布比較無顯著性差異(Pobs=0.080373)。三種遺傳模式(共顯性遺傳、顯性遺傳、隱性遺傳)下rs2236592基因型與DEACMP發(fā)病的相關性分析結果依次為:對于共顯性模型,Pobs=0.064827,OR=1.254(0.986-1.597);對于顯性遺傳模型,Pobs=0.015784,OR=1.616(1.092-2.390);對于隱性遺傳模型,Pobs=0.61508,OR=1.105(0.748-1.634)。結論1.按照常染色體共顯性遺傳、顯性遺傳模式,rs1539177位點、rs17068697位點、rs9534475位點與DEACMP易感性相關;2.按照常染色體顯性遺傳模式,rs2236592位點與DEACMP易感性相關;3.rs9534475位點等位基因A可能是DEACMP發(fā)病的風險因素;4.DEACMP的發(fā)病可能與LRCH1基因多態(tài)性相關。
【學位單位】：新鄉(xiāng)醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R595.1;R747.9
【部分圖文】：

15圖 1 Sequenom MassARRAY SNP 分型檢測技術流程圖與合成CBI 的 dbSNP 數(shù)據(jù)庫(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/projects/ LRCH1（rs1539177, rs17068697, rs9534475, rs2236592）所計。引物序列詳見表 1。

圖 2 樣本 DNA 瓊脂糖凝膠電泳圖1 泳道條帶為 DNA 分子量標準，2～11 泳道條帶均亮度較高且整齊，提示為較完整的樣本 DNA2.2 LRCH1（rs1539177、rs17068697、rs9534475、rs2236592）在基因的區(qū)間及物理位置表 2 LRCH1 四個 SNP 在基因的區(qū)間及物理位置Variant Chrom Position Annotation MAFrs1539177 G/A 13 46725920 intron 0.38 (A)rs17068697 A/G 13 46719680 intron 0.26 (G)rs9534475 A/C 13 46718476 intron 0.40 (C)rs2236592 T/C 13 46721781 intron 0.44 (C)1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11

其中，LRCH2（通常也命名為 DA204F4.4、KIAA1495）屬于富含亮氨酸重復序列及鈣黏蛋白同源結構域蛋白家族。這些蛋白在動物物種中高度保守，在果蠅中的一種相似蛋白的研究提示可能發(fā)揮細胞骨架蛋白作用。LRCH4 在晚期結直腸癌中高表達，發(fā)揮配體結合作用[45]。Nagase 等人[46]1999 年從人大腦中提取到 LRCH1 cDNA克隆體的完整序列。因 LRCH1 發(fā)現(xiàn)最早，因此研究相對更加深入。

【參考文獻】

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1 王

本文編號：2815313