目的:1.探究人巨細(xì)胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)感染人膠質(zhì)瘤細(xì)胞(U251/U87)后腫瘤細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲能力。2.不同滴度HCMV感染人膠質(zhì)瘤細(xì)胞(U251/U87)后即刻早期蛋白IE1表達(dá)變化及骨髓基質(zhì)細(xì)胞抗原2(Bone Marrow Stromal cell antigen 2,BST-2)的表達(dá)情況。3.通過對(duì)BST-2進(jìn)行干擾抑制后降低BST-2蛋白表達(dá)水平來檢測(cè)HCMV感染人膠質(zhì)瘤細(xì)胞AKT蛋白磷酸化水平及膠質(zhì)瘤細(xì)胞(U251/U87)的增殖和遷移能力,以此探討B(tài)ST-2在HCMV感染膠質(zhì)瘤細(xì)胞的過程中發(fā)揮的作用。進(jìn)一步研究BST-2的表達(dá)水平對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲能力的作用。方法:1.不同滴度HCMV(MOI=1/MOI=0.1)感染人膠質(zhì)瘤細(xì)胞(U251/U87)建立病毒感染細(xì)胞模型。2.通過細(xì)胞劃痕愈合實(shí)驗(yàn)和Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)不同滴度HCMV(MOI=1/MOI=0.1)感染對(duì)人膠質(zhì)瘤細(xì)胞(U251/U87)遷移能力的影響。3.通過Cell Counting Kit-8(CCK-8試劑盒)檢測(cè)HCMV感染人膠質(zhì)瘤細(xì)胞(U251/U87)后細(xì)胞增殖情況。4.使用小干擾RNA(sh RNA)抑制BST-2蛋白的表達(dá)水平,通過Western blot方法篩選出有效沉默靶點(diǎn)。5.通過Western blot方法檢測(cè)HCMV感染對(duì)IE1蛋白、BST-2、P-AKT等蛋白表達(dá)的影響。6.免疫熒光技術(shù)標(biāo)記BST-2檢測(cè)BST-2干擾后熒光蛋白表達(dá)水平。7.流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)BST-2干擾后對(duì)細(xì)胞凋亡的影響。8.免疫組織化學(xué)技術(shù)染色檢測(cè)不同分級(jí)膠質(zhì)瘤切片的IE和BST-2蛋白表達(dá)水平。結(jié)果:1.HCMV感染人膠質(zhì)瘤細(xì)胞(U251/U87)后細(xì)胞增殖和遷移能力增強(qiáng),且高滴度HCMV(MOI=1)比低滴度HCMV(MOI=0.1)的促進(jìn)作用更加明顯。2.HCMV感染人膠質(zhì)瘤細(xì)胞(U251/U87)后,病毒表達(dá)即刻早期蛋白IE1與BST-2表達(dá)明顯,且與病毒感染滴度、感染時(shí)間呈正相關(guān)。3.HCMV(MOI=1)感染U87細(xì)胞后si BST-2-171與si BST-2-256兩種靶序列對(duì)BST-2的沉默具有顯著效果。4.將人膠質(zhì)瘤細(xì)胞(U251/U87)感染或模擬感染HCMV(MOI=1)48 h,分別轉(zhuǎn)染sh BST-2-171、sh BST-2-256對(duì)BST-2進(jìn)行干擾抑制后,標(biāo)記熒光蛋白BST-2及Western blot蛋白表達(dá)量檢測(cè)。BST-2蛋白表達(dá)量顯著下降,并明顯抑制了Akt蛋白的磷酸化,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)干擾BST-2對(duì)細(xì)胞凋亡并無明顯影響。5.將人膠質(zhì)瘤細(xì)胞(U251/U87)感染或模擬感染HCMV(MOI=1)48 h,分別轉(zhuǎn)染sh BST-2-171、sh BST-2-256對(duì)BST-2進(jìn)行干擾抑制,人膠質(zhì)瘤細(xì)胞(U251/U87)增殖和遷移能力明顯減弱。結(jié)論:1.HCMV感染人膠質(zhì)瘤細(xì)胞(U251/U87)可使其增殖遷移能力增強(qiáng),且與病毒感染滴度、感染時(shí)間呈正相關(guān)。2.BST-2參與了HCMV感染導(dǎo)致的惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞(U251/U87)增殖和遷移,抑制BST-2可使其增殖和遷移能力減弱。3.BST-2抑制后可明顯降低膠質(zhì)瘤細(xì)胞(U251/U87)增殖遷移,可作為今后膠質(zhì)瘤治療的靶點(diǎn)。
【學(xué)位單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R739.4
【部分圖文】：

圖 1 病毒擴(kuò)增細(xì)胞形態(tài)及病毒滴度檢測(cè)ELF 細(xì)胞正常生長(zhǎng)狀態(tài)（100×）ELF 細(xì)胞感染病毒后 3d，可見明顯病變巢，病變細(xì)胞變圓（100×）毒滴度檢測(cè)報(bào)告，TCID50/ml: 1.31×106

圖 2 HCMV 感染促進(jìn)膠質(zhì)瘤細(xì)胞（U251/U87）遷移MV（MOI=1,MOI=0.1）感染 U251/U87 細(xì)胞 24h 后的細(xì)胞遷移能力明51/U87 細(xì)胞遷移率柱狀圖 **：相對(duì)于對(duì)照組，p <0.012.1 HCMV 251/U87）增殖

HCMV感染促進(jìn)膠質(zhì)瘤細(xì)胞（U251/U87）增殖AHCMV（MOI=1,MOI=0.1）感染U251細(xì)胞增強(qiáng)細(xì)胞增殖能力

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 湯智勇;陳華;李倩;鄧樂方;陳立華;;人類巨細(xì)胞病毒感染與結(jié)腸癌相關(guān)關(guān)系的初步研究[J];實(shí)用預(yù)防醫(yī)學(xué);2007年03期

2 趙秀榮;米術(shù)斌;段一娜;;巨細(xì)胞病毒檢測(cè)方法的研究進(jìn)展[J];承德醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2006年01期

本文編號(hào)：2813536