目的:使用NMO-IgG和補(bǔ)體誘導(dǎo)體外乳鼠脊髓切片制作視神經(jīng)脊髓炎(NMO)體外模型并探索載脂蛋白E(ApoE)缺乏對NMO體外模型膽固醇代謝和損傷的影響。方法:將7日齡的正�；蛐�(WT)及ApoE基因敲除(ApoE-/-)的C57BL/6J小鼠脊髓切片在transell中培養(yǎng)7天后,將脊髓片隨機(jī)分為造模組及對照組。造模組加入從視神經(jīng)脊髓炎患者體內(nèi)提取出的NMO-IgG及正常人補(bǔ)體血清(HC);對照組除不加入NMO-IgG外余同實(shí)驗(yàn)組,分別繼續(xù)培養(yǎng)12、24、36小時。用改良的厚組織片免疫熒光法檢測脊髓組織切片水通道蛋白4(AQP4)、膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)的表達(dá),計算脊髓片AQP4和GFAP缺失面積比例;用蛋白質(zhì)印記(WB)檢測脊髓片ApoE的蛋白量;用熒光定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶連反應(yīng)(RT-PCR)檢測ApoE mRNA的表達(dá);用ELISA檢測各時期培養(yǎng)液的ApoE濃度;用高效液相色譜法(HPLC)測定培養(yǎng)液總膽固醇濃度。結(jié)果:免疫熒光結(jié)果顯示,ApoE-/-NMO-IgG+HC組和WT-NMO-IgG+HC組各時期(12小時、24小時、36小時)AQP4及GFAP染色缺失比例均高于0小時(P0.05);RT-PCR結(jié)果顯示,WT-NMO-IgG+HC組脊髓組織片中ApoE mRNA的表達(dá)水平較WT組(對照組)明顯下調(diào)(P0.05);WB結(jié)果顯示,WT-NMO-IgG+HC組脊髓組織片中ApoE蛋白水平較WT組明顯下調(diào)(P0.05);ELISA結(jié)果顯示,WT組和WT-NMO-IgG+HC組不同時培養(yǎng)液中ApoE的濃度均存在差異(P0.05),其中在12小時時期WT組ApoE的濃度低于WT-NMO-IgG+HC組(P0.05),而在24小時、36小時時期WT組ApoE的濃度顯著低于WT-NMO-IgG+HC組(P0.05);HPLC結(jié)果顯示,WT組、ApoE-/-組、WT-NMO-IgG+HC組和ApoE-/-NMO-IgG+HC組在造模高峰期(24小時)時,培養(yǎng)液中總膽固醇的濃度均存在差異(P0.05),培養(yǎng)液中總膽固醇變化趨勢圖示1、WT組和ApoE-/-組相比,ApoE缺失組在各個時期代謝到培養(yǎng)液中的膽固醇均更高(P0.05);2、WT組和WT-NMO-IgG+HC組相比,WT-NMO-IgG+HC組在12小時膽固醇改變量為負(fù)值,24小時和36小時該變量為正值,而WT組在各個時期膽固醇該變量均為正值。3、ApoE-/-組和ApoE-/-NMO-IgG+HC組相比,各個時期ApoE-/-NMO-IgG+HC組均較ApoE-/-組總膽固醇濃度改變量高(P0.05)。結(jié)論:1、使用從NMO患者血清提取出的NMO-IgG和HC,可以誘導(dǎo)NMO體外模型,并在ApoE缺失的情況下在造模組的各時期損傷均會加重。2、在NMO體外脊髓切片模型中,ApoE蛋白表達(dá)量和mRNA表達(dá)量均減少。3、ApoE缺失會使NMO體外脊髓切片模型膽固醇代謝紊亂,進(jìn)而加重NMO的嚴(yán)重程度。
【學(xué)位單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R744.52
【部分圖文】：

圖1-1.各組不同時期GFAP、AQP4免疫組織化學(xué)熒光染色Figure 1-1. Immunohistochemical staining of GFAP and AQP4 in different groups at different stages： A、WT NMO-IgG+HC組各個時期脊髓GFAP熒光染色（4×）；B:WT-NMO-IgG+HC組各個時脊髓AQP4熒光染色（4×）；C、ApoE-/-NMO-IgG+HC組各個時期脊髓GFAP熒光染色（4×）；、ApoE-/-NMO-IgG+HC組各個時期脊髓AQP4熒光染色（4×）。

圖 2-1.WT 組與 WT-NMO-IgG+HC 組脊髓片中 ApoE mRNA 表達(dá)水平（每組 n=8；*P＜0.05）Figure2-1.ApoE mRNA expression in spinal cord tissue of WT group and WT-NMO-IgG+HC group (n=8per group; *P<0.05)3.2 WT組（Control組）與WT-NMO-IgG+HC組脊髓組織片中ApoE蛋白水平

WT組與WT-NMO-IgG+HC組脊髓片

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本文編號：2810059