第一部分:內(nèi)源性Aggf1在大鼠SAH后的表達(dá)目的:探討內(nèi)源性的血管生長(zhǎng)因子Aggf1在大鼠蛛網(wǎng)膜下腔出血(spontaneous subarachnoid hemorrhage,SAH)后的表達(dá)變化。方法:采用動(dòng)脈穿刺法建立Sprague-Dawley(SD)大鼠SAH模型,并分別在SAH后3 h、6 h、12 h、24 h、72 h斷頭收集出血側(cè)大腦皮質(zhì),用免疫印跡蛋白法(Western blot)檢測(cè)內(nèi)源性Aggf1的表達(dá);此外,在SAH后24 h斷頭取出出血側(cè)大腦皮質(zhì),用免疫熒光(immunofluorescence)分別檢測(cè)Aggf1在神經(jīng)元、小膠質(zhì)細(xì)胞、星形膠質(zhì)細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞的表達(dá)。結(jié)果:與對(duì)照組比較,Western blot結(jié)果顯示內(nèi)源性Aggf1在SAH后24 h顯著增加,并且在72 h達(dá)到高峰;免疫熒光結(jié)果顯示內(nèi)源性Aggf1主要與血管內(nèi)皮細(xì)胞、星形膠質(zhì)細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞的標(biāo)志物共染。結(jié)論:SAH引起內(nèi)源性Aggf1表達(dá)增加,此蛋白主要表達(dá)于血管內(nèi)皮細(xì)胞、星形膠質(zhì)細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞。第二部分:外源性rh-Aggf1對(duì)SAH后腦損傷和炎癥的作用目的:探討外源性人重組蛋白Aggf1(rh-Aggf1)對(duì)SAH后神經(jīng)功能、腦水含量、血腦屏障通透性、神經(jīng)炎癥的影響方法:建立SD大鼠SAH模型,模型建立后1 h,經(jīng)尾靜脈注射rh-Aggf1;此外,在SAH模型建立前48 h經(jīng)側(cè)腦室注射Aggf1 si RNA抑制內(nèi)源性Aggf1的表達(dá)。在SAH后24 h采用改良Garcia評(píng)分方法和改良Beam Balance評(píng)分方法評(píng)估大鼠神經(jīng)功能狀況;在SAH后7 d,14 d,21 d,采用步錯(cuò)實(shí)驗(yàn)(Foot Fault Test)評(píng)估大鼠運(yùn)動(dòng)和感覺(jué)功能;在SAH后21-25 d,采用水迷宮實(shí)驗(yàn)(Morris Water Maze,MWM)評(píng)估大鼠長(zhǎng)期的空間記憶功能;評(píng)估SAH模型出血評(píng)分;用干濕法檢測(cè)雙側(cè)大腦半球腦水含量;用伊文思藍(lán)(Evans Blue,EB)滲透量檢測(cè)血腦屏障(Blood Brain Barrier,BBB)的通透性;用Immunofluorescence標(biāo)記髓過(guò)氧化物酶(Myeloperoxidase,MPO)檢測(cè)中性粒細(xì)胞的浸潤(rùn);用Western blot檢測(cè)TNF-α和IL-1β表達(dá)量。結(jié)果:SAH導(dǎo)致改良Garcia和改良Beam Balance分?jǐn)?shù)降低、腦水含量升高、Evans Blue滲透率增加,促進(jìn)中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)浸潤(rùn)和TNF-α、IL-1β表達(dá)。然而,給予rh-Aggf1治療能顯著地降低神經(jīng)功能評(píng)分、腦水含量和Evans Blue滲透量,并能抑制中性粒細(xì)胞的浸潤(rùn)和TNF-α、IL-1β的表達(dá)。相反,抑制內(nèi)源性Aggf1表達(dá),加重了腦損傷和神經(jīng)炎癥。此外,在Foot Fault Test中,SAH后大鼠前肢步錯(cuò)次數(shù)增多,而rh-Aggf1治療能明顯改善大鼠運(yùn)動(dòng)協(xié)調(diào)能力;在Water Maze Test中,SAH后大鼠發(fā)現(xiàn)平臺(tái)的時(shí)間和距離延長(zhǎng),而rh-Aggf1治療后,大鼠的學(xué)習(xí)記憶功能顯著改善。結(jié)論:外源性rh-Aggf1能改善大鼠SAH后神經(jīng)功能障礙和長(zhǎng)期運(yùn)動(dòng)協(xié)調(diào)、記憶功能缺損,降低腦水腫和血腦屏障的通透性,抑制中性粒細(xì)胞的浸潤(rùn),下調(diào)炎癥因子的釋放,從而抑制炎癥反應(yīng)。然而,抑制內(nèi)源性Aggf1加重了腦損傷和神經(jīng)炎癥。第三部分Aggf1通過(guò)PI3K/Akt/NF-κB信號(hào)通路發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用目的:探討外源性rh-Aggf1對(duì)大鼠SAH后腦損傷的保護(hù)機(jī)制是否與PI3K/Akt/NF-κB信號(hào)通路有關(guān)。方法:參照第二部分。在大鼠SAH模型建立前30 min,經(jīng)側(cè)腦室注射PI3K特異性抑制劑LY293002;在SAH模型建立后1 h,經(jīng)尾靜脈注射rh-Aggf1。在模型建立后24h,用改良Garcia評(píng)分方法和改良Beam Balance評(píng)分方法評(píng)估大鼠神經(jīng)功能狀況;用干濕法檢測(cè)雙側(cè)大腦半球腦水含量;用Western blot檢測(cè)Albumin、MPO、PI3K、p-Akt、Akt、VE-cadherin、Occludin、Claudin-5、p-NF-κB p65、NF-κB p65、TNF-α、和IL-1β的表達(dá)。結(jié)果:LY294002預(yù)處理能顯著逆轉(zhuǎn)rh-Aggf1治療在神經(jīng)功能、腦水腫的作用;Western blot結(jié)果顯示LY294002明顯逆轉(zhuǎn)rh-Aggf1治療后Albumin滲透和MPO表達(dá)。與Vehicle組相比,外源性rh-Aggf1能明顯增加PI3K、p-Akt、VE-cadherin、Occludin、Claudin-5的表達(dá),降低p-NF-κB p65、NF-κB p65、TNF-α、和IL-1β的表達(dá);而LY294002能明顯抵消rh-Aggf1治療后的下游分子改變。結(jié)論:在大鼠SAH后,外源性rh-Aggf1治療能減輕BBB破壞、神經(jīng)炎癥的發(fā)生,從而改善神經(jīng)功能缺損,其神經(jīng)保護(hù)功能至少部分與PI3K/Akt/NF-κB信號(hào)通路的激活有關(guān)。
【學(xué)位單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R743.35
【部分圖文】：

Sham SAH圖 1.1 Sham 組與 SAH 組大體標(biāo)本。Figure 1.1 Representative images in sham and SAH groups.2.2 內(nèi)源性 Aggf1 在 SAH 后腦組織的表達(dá)變化Western blot 結(jié)果顯示，相比于 Sham 組，SAH 后 24 h, Aggf1的表達(dá)明顯增加，并且在 72 h 達(dá)到峰值（圖 1.2）。

Sham SAH.1 Sham 組與 SAH 組大體標(biāo)本。re 1.1 Representative images in sham and SAH groups.性 Aggf1 在 SAH 后腦組織的表達(dá)變化tern blot 結(jié)果顯示，相比于 Sham 組，SAH 后 24 h, Ag顯增加，并且在 72 h 達(dá)到峰值（圖 1.2）。

圖1.3 SAH后Aggf1的細(xì)胞定位。上圖顯示免疫熒光所選區(qū)域；下圖顯示Ag要表達(dá)于星形膠質(zhì)細(xì)胞（GFAP）、血管內(nèi)皮細(xì)胞（vWF）和小膠質(zhì)細(xì)胞（Iba-=3, Scale bar=50μm。Figure 1.3 The expression of Aggf1 in neuron, Astrocyte, Endothelium icroglia. Upper panel indicates the location of staining in the brain (small black boolocalization of Aggf1 with Astrocyte (GFAP), Endothelium (vWF, green) icroglia (Iba-1) at 24 h after SAH. Nuclei are stained with DAPI (blue). n=3 per grcale bar=50μm.3 討論本實(shí)驗(yàn)首先在動(dòng)物呼吸機(jī)輔助通氣下，經(jīng)頸內(nèi)動(dòng)脈穿刺建立 SAH 模型，實(shí)果顯示本實(shí)驗(yàn)穿刺模型大鼠出血量相對(duì)而言比較穩(wěn)定，血凝塊主要集聚在顳底皮層（Willis 動(dòng)脈環(huán)區(qū)，與臨床 SAH 具有很大的相似性，具有一定的研究

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 白娟;�，�;董英;;苦瓜粉緩解大鼠肥胖相關(guān)炎癥的作用途徑[J];中國(guó)食品學(xué)報(bào);2018年08期

2 畢振宇;武斌;劉陽(yáng);丁自海;楊宇超;歐陽(yáng)鈞;;Wistar大鼠舌部毛細(xì)血管鑄型結(jié)構(gòu)[J];解剖學(xué)雜志;2016年05期

3 王帥;賈琦珍;陳根元;程勇;張玲;馬春暉;;小花棘豆中毒對(duì)大鼠下丘腦—垂體—卵巢軸α-甘露糖苷酶的影響[J];福建農(nóng)林大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2016年01期

4 周挺;夏菁;李增攀;徐麗艷;韓文文;方建江;;法舒地爾對(duì)百草枯致大鼠肺纖維化的干預(yù)作用[J];浙江實(shí)用醫(yī)學(xué);2016年01期

5 王亞?wèn)|;李東朋;郭德偉;宋及時(shí);李紅偉;錢偉強(qiáng);楊波;;富血小板血漿對(duì)創(chuàng)傷性顱腦損傷大鼠神經(jīng)功能的保護(hù)作用[J];吉林大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2016年05期

6 鄭國(guó)祥;于強(qiáng);;白虎湯對(duì)全身炎癥反應(yīng)綜合征大鼠炎癥因子的影響[J];四川中醫(yī);2015年01期

7 段鏈;魏嵐;張少平;孔建;治洪;張明;張宏偉;路凱;;長(zhǎng)期飲用淡化海水對(duì)大鼠血脂影響[J];中國(guó)公共衛(wèi)生;2015年07期

8 符暉;王橋生;方志雄;劉雁;周斌;彭忠田;梁咸章;;辛伐他汀預(yù)處理對(duì)大鼠神經(jīng)源性肺水腫的作用及其機(jī)制[J];中國(guó)動(dòng)脈硬化雜志;2015年10期

9 商明紅;何龍其;;西維來(lái)司鈉對(duì)大鼠腦出血保護(hù)作用機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究[J];現(xiàn)代養(yǎng)生;2017年10期

10 李娟;羅歡;顧菲菲;高家榮;;藥對(duì)藿香-陳皮配伍前后對(duì)功能性消化不良大鼠的初步藥效學(xué)研究[J];健康之路;2017年07期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 禹玉洪;張國(guó)偉;楊曉寧;李燕舞;王汝俊;巫燕莉;;丁桂兒臍貼聯(lián)合用藥對(duì)幼齡大鼠厭食模型的影響[A];“好醫(yī)生杯”中藥制劑創(chuàng)新與發(fā)展論壇論文集（下）[C];2013年

2 唐洪梅;席萍;吳敏;蔡慶群;;石菖蒲不同部位對(duì)大鼠腦電圖的影響[A];中華中醫(yī)藥學(xué)會(huì)制劑分會(huì)學(xué)術(shù)交流會(huì)論文匯編[C];2003年

3 李曉宇;劉皋林;Hyvernat Laure;曾妮;周佳純;高君偉;郭彥坤;孫搏;;荷葉堿大鼠體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)研究[A];第九屆全國(guó)藥物和化學(xué)異物代謝學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2009年

4 廖沙;段毅濤;孟繁華;郭繼芬;張振清;阮金秀;;芒果苷在大鼠體內(nèi)的口服吸收與轉(zhuǎn)化初探[A];第九屆全國(guó)藥物和化學(xué)異物代謝學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2009年

5 崔榮軍;;足部反射療法對(duì)Ⅱ型糖尿病大鼠肝臟氧化應(yīng)激的影響[A];經(jīng)典薈萃——紀(jì)念建國(guó)六十周年中華反射療法優(yōu)秀論文選編[C];2009年

6 尹音;孫振宇;胡敏;李冬霞;;持續(xù)性高正加速度對(duì)大鼠顳頜關(guān)節(jié)損傷的作用[A];第八屆全國(guó)顳下頜關(guān)節(jié)病學(xué)及（牙合）學(xué)大會(huì)論文匯編[C];2011年

7 文文;賴國(guó)祥;鄭和平;張亞彬;姚麗青;;反復(fù)銅綠假單胞菌感染誘導(dǎo)大鼠慢性阻塞性肺疾病模型的研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)呼吸病學(xué)年會(huì)——2011（第十二次全國(guó)呼吸病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議）論文匯編[C];2011年

8 王瑋娜;李奕;彭吉云;李葆明;;大鼠眶額皮層在“付出越多,得到越多”行為任務(wù)中的作用[A];Proceedings of the 8th Biennial Conference of the Chinese Society for Neuroscience[C];2009年

9 何小舟;許賢林;徐仁芳;范敏;;ACTH對(duì)大鼠腎缺血再灌注損傷的影響[A];2013中國(guó)器官移植大會(huì)論文匯編[C];2013年

10 祝~=驤;iJ梊霞;洃克琴;崔素英;文允摪;

本文編號(hào)：2810198