目的:利用RNA測序分析技術(shù),鑒定低溫下脂肪細胞免疫相關(guān)基因的表達譜,探討其與貝爾麻痹發(fā)病機制的關(guān)聯(lián)性。方法:從雄性Sprague-Dawley大鼠的白色脂肪組織中分離前脂肪細胞,使用分化誘導液(Dulbecco改良的低糖Eagle培養(yǎng)基含10%胎牛血清,1%青霉素/鏈霉素/兩性霉素B無菌溶液,1μmol/L地塞米松,200μmol/L吲哚美辛,0.5mmol/L IBMX和10μmol/L胰島素)成脂誘導后在30℃,20℃和10℃的不同急性冷暴露條件下培養(yǎng),提取RNA進行測序分析。使用包括R語言包(DEGseq)和KOBAS3.0軟件進行差異表達基因分析,差異基因的基因本體論術(shù)語和京都基因和基因組百科全書通路富集分析。并利用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應驗證差異表達基因。結(jié)果:在30℃,20℃和10℃下,分別鑒定出55個(35個上調(diào)和20個下調(diào)),121個(76個上調(diào)和45個下調(diào))和92個(64個上調(diào)和28個下調(diào))差異表達的基因�；虮倔w論術(shù)語和京都基因和基因組百科全書通路富集分析顯示差異表達基因在免疫相關(guān)途徑中顯著富集,包括白細胞跨內(nèi)皮遷移,補體和凝血級聯(lián),趨化因子信號通路,NOD樣受體信號通路和血小板活化,以及感染相關(guān)通路如單純皰疹病毒感染,細菌侵入上皮細胞和沙門氏菌感染。關(guān)鍵的免疫相關(guān)差異表達的基因包括炎性細胞因子或趨化因子(CSF1,CXCL1,CCL2和CCL7),轉(zhuǎn)錄因子或信號分子(Vcl,Fos,Actg1)。這表明急性冷暴露對脂肪細胞有強烈的促炎作用,導致了大量的細胞因子產(chǎn)生。結(jié)論:急性冷刺激可使脂肪細胞產(chǎn)生強烈的炎性反應。冷刺激下脂肪細胞相關(guān)免疫基因的差異表達以及相關(guān)免疫信號通路的富集,有可能對包纏軸突的雪旺細胞產(chǎn)生影響并參與髓鞘變性,從而導致脫髓鞘的發(fā)生。
【學位單位】：山西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2019
【中圖分類】：R745.12
【部分圖文】：

圖 1.脂肪細胞分化和油紅 O 染色的代表性實例。（a）分化前脂肪細胞的形態(tài)學。（b）分化后脂肪細胞的形態(tài)學。（c）油紅 O 染色檢測的脂滴積累（紅色）。 比例尺：A：100μm; B 和 C：50μm。

圖 2.差異表達基因（DEGs）的主成分分析和火山圖。（a）在 37℃（對照組），30℃，20℃和 10℃（實驗組）下培養(yǎng) 8 小時的脂肪細胞主成分分析。PC1 顯示冷暴露組之間的差異; PC2 表明對照和冷暴露的脂肪細胞之間的差異。（b-d）相對于對照組（37℃）在較低溫度下培養(yǎng)的脂肪細胞中 DEGs 的火山圖。 將 log10 的負 q值（y 軸）相對于 log2 倍數(shù)變化（log2FC）（x 軸）作圖。 DEGsq 鑒定 DEG。 顯著性閾值是| log2FC | > 1，調(diào)整后的 p 值<0.05。 紅色，上調(diào)的 DEGs; 綠色，下調(diào)的 DEGs。

35 3.低溫條件下培養(yǎng)的脂肪細胞基因本體（GO）術(shù)語的分布。a）30℃，（b）20℃，（c）10℃。 顯示前 30 個 GO 術(shù)語。 GO 富集分析將這些差異表基因分組為功能組。

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本文編號：2808384