發(fā)布時(shí)間：2020-08-27 12:44

【摘要】：目的缺血性腦卒中病理生理過(guò)程的復(fù)雜性和異質(zhì)性,以及存在與其相關(guān)的多種合并癥,使得目前臨床中應(yīng)用的各種神經(jīng)保護(hù)藥物缺乏有效的治療效果。因此,發(fā)展出針對(duì)某一特定缺血性腦卒中患者亞群的靶向治療藥物已經(jīng)成為缺血性腦卒中研究領(lǐng)域里的重要方向。2型糖尿病(type 2 diabetes,T2D)患者表現(xiàn)為一系列代謝異常,包括:高血糖、血脂異常及胰島素抵抗。缺血性腦卒中合并2型糖尿病的患者不僅死亡率成倍提高,并且神經(jīng)功能預(yù)后更差。然而臨床中使用胰島素控制血糖水平并不能夠顯著改善2型糖尿病患者缺血性腦卒中的預(yù)后,提示僅僅通過(guò)調(diào)控代謝穩(wěn)態(tài)不足以有效治療這部分患者。更多新近的研究證據(jù)顯示糖尿病狀態(tài)下各種其他途徑也參與了缺血性腦損傷的加重,包括血腦屏障(blood-brain barrier,BBB)通透性增加、神經(jīng)促炎癥反應(yīng)加重、神經(jīng)退行性變以及認(rèn)知功能損傷等。過(guò)氧化物酶增殖物激活受體γ(peroxisome proliferator-activated receptor gamma,PPARγ)是一種重要的核內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子。它不僅參與調(diào)節(jié)機(jī)體糖脂代謝,在中樞神經(jīng)系統(tǒng)各類細(xì)胞中也有表達(dá),并且對(duì)缺血腦組織炎癥反應(yīng)具有重要調(diào)控作用。成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子21(fibroblast growth factor 21,rFGF21)作為一種重要的內(nèi)分泌因子,可通過(guò)調(diào)節(jié)PPARγ活性發(fā)揮其多種作用,包括強(qiáng)力的代謝調(diào)控、組織保護(hù)及促組織修復(fù)的功能。本研究旨在評(píng)估在小鼠缺血性腦卒中合并2型糖尿病模型中,給予重組人FGF21(recombinant human fibroblast growth factor 21,rFGF21)對(duì)于腦缺血后神經(jīng)促炎反應(yīng)以及預(yù)后的作用。方法本研究使用瘦素受體(Leptin receptor,Lepr)缺陷誘導(dǎo)的雄性2型糖尿病模型小鼠(BKS.Cg-Dock7m+/+Lepr db/J homozygous mice,db/db mice)及其對(duì)應(yīng)的非糖尿病對(duì)照雄性小鼠(BKS.Cg-Dock7m+/+Lepr db/J heterozygous mice,db/+mice)。采用大腦中動(dòng)脈遠(yuǎn)端永久性閉塞加90分鐘同側(cè)頸總動(dòng)脈結(jié)扎法建立局灶性缺血性腦卒中模型(distal middle cerebral artery occlusion,dMCAO)。手術(shù)后6小時(shí)給予首次背部皮下rFGF21或生理鹽水注射,之后每天給予兩次相同劑量背部皮下注射(rFGF或生理鹽水,間隔時(shí)間至少8小時(shí)),直至處死。于腦缺血后相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)處死小鼠進(jìn)行一系列相關(guān)檢測(cè),一共包括兩個(gè)部分:1、糖尿病db/db小鼠共36只隨機(jī)分為三組:假手術(shù)組(n=12)、生理鹽水對(duì)照組(n=12),rFGF21治療組(n=12)。非糖尿病對(duì)照db/+小鼠共24只隨機(jī)分為兩組:假手術(shù)組(n=12)和生理鹽水對(duì)照組(n=12)。于第0(術(shù)前基礎(chǔ)水平)天及術(shù)后第1、3、5、7、10、14天檢測(cè)各組小鼠血糖及體重變化。于術(shù)前及術(shù)后第14天分別檢測(cè)各組小鼠糖化血紅蛋白水平。于手術(shù)后第14天取血清樣品檢測(cè)胰島素水平及脂聯(lián)素水平,取腦組織切片作蘇木精伊紅染色(hematoxylin-eosin staining,HE)測(cè)量梗死體積大小,神經(jīng)髓鞘固藍(lán)染色(Luxol fast blue staining,LFB)測(cè)量神經(jīng)髓鞘含量,免疫熒光(immunofluorescence,IF)檢測(cè)髓鞘堿性蛋白(myelin basic protein,MBP)及非磷酸化神經(jīng)絲重鏈(non-phosphorylated neurofilament H,SMI-32)含量。于第0、1、3、5、7、14天分別使用粘貼物移除測(cè)試、拉力測(cè)試、足錯(cuò)步測(cè)試及Y迷宮檢測(cè)各組小鼠感覺(jué)運(yùn)動(dòng)功能以及認(rèn)知功能。此外,實(shí)驗(yàn)還探究了rFGF21治療對(duì)于非糖尿病db/+小鼠腦缺血后的可能作用,指標(biāo)包括:血糖及體重、感覺(jué)運(yùn)動(dòng)功能及梗死體積。2、糖尿病db/db小鼠共54只隨機(jī)分為三組:假手術(shù)組(n=18)、生理鹽水對(duì)照組(n=18),rFGF21治療組(n=18)。非糖尿病對(duì)照db/+小鼠共36只隨機(jī)分為兩組:假手術(shù)組(n=18)和生理鹽水對(duì)照組(n=18)。手術(shù)后第3天收取梗死周邊腦組織提取核蛋白檢測(cè)轉(zhuǎn)錄因子PPARγ-DNA結(jié)合活性。于第7天收取梗死周邊腦組織,采用實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(quantitative real-time polymerase chain reaction,RT-qPCR)檢測(cè)促炎因子及抗炎因子的信使核糖核酸(messenger ribonucleic acid,mRNA)水平,包括:腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、Toll樣受體4(Toll-like receptor 4,TLR4)、CC類趨化因子配體2(C-C motif chemokine ligand 2,CCL2)、IL-4、IL-10、胰島素樣生長(zhǎng)因子(insulin-like growth factor-1,IGF-1)及轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)。收取全腦采用免疫熒光檢測(cè)梗死周邊M1型小膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量及M2型小膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量。結(jié)果1、相對(duì)于非糖尿病對(duì)照組小鼠,2型糖尿病小鼠腦缺血后表現(xiàn)出更為復(fù)雜的病理特點(diǎn),包括:全身代謝異常,神經(jīng)功能缺損加重,梗死體積擴(kuò)大和白質(zhì)完整性破壞加重。rFGF21治療顯著改善2型糖尿病小鼠腦缺血后代謝異常及神經(jīng)功能缺損,減小梗死體積,減輕梗死周邊白質(zhì)損傷及完整性破壞。rFGF21對(duì)于非糖尿病小鼠腦缺血后的梗死體積及神經(jīng)功能預(yù)后改善不明顯,但也不導(dǎo)致非糖尿病小鼠發(fā)生低血糖及體重下降。2、腦缺血后3天,損傷周邊腦組織細(xì)胞核內(nèi)PPARγ-DNA結(jié)合活性下降。相對(duì)于非糖尿病對(duì)照組小鼠,2型糖尿病小鼠腦缺血后損傷周邊腦組織細(xì)胞核內(nèi)PPARγ-DNA結(jié)合活性下降更為顯著。腦缺血后7天,2型糖尿病小鼠梗死周邊神經(jīng)促炎反應(yīng)更強(qiáng),M1型小膠質(zhì)細(xì)胞極化明顯增加。rFGF21治療顯著提升損傷周邊腦組織細(xì)胞核內(nèi)PPARγ-DNA結(jié)合活性,減輕2型糖尿病小鼠腦梗死周邊神經(jīng)促炎反應(yīng)及M1型小膠質(zhì)細(xì)胞極化,并增加M2型小膠質(zhì)細(xì)胞極化。結(jié)論rFGF21可能是一種新型的,基于疾病調(diào)修等多種作用的,針對(duì)缺血性腦卒中合并2型糖尿病的較為安全的候選治療方案。rFGF21發(fā)揮上述治療作用的機(jī)制可能是部分通過(guò)對(duì)系統(tǒng)性代謝進(jìn)行調(diào)控以及促進(jìn)與PPAR-γ活化相關(guān)的抗炎作用得以實(shí)現(xiàn)的。
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R743.3;R587.2
【圖文】：

間點(diǎn)上（術(shù)前基礎(chǔ)水平，術(shù)后第）對(duì)小鼠分別進(jìn)行了血糖（圖.2）測(cè)試。糖尿病 db/db 小鼠的血糖和體重?zé)o論是基礎(chǔ)水平值（O 過(guò)后的測(cè)值均明顯高于非糖尿病對(duì)照 db/+小鼠（p<0.05），存在高血糖。rFGF21 連續(xù)治療能夠顯著降低 db/db 小鼠 dMCAp<0.05），非 dMCAO 狀態(tài)下，db/db 小鼠但是本實(shí)驗(yàn)所用 rF 小鼠體重并無(wú)明顯影響。糖化血紅蛋白的測(cè)定結(jié)果（圖 1.2）也基礎(chǔ)糖化血紅蛋白值就明顯高于 db/+小鼠（p<0.05）。而 dM/db 小鼠糖化血紅蛋白測(cè)值也顯著高于 dMCAO 后的 db/+小鼠（db 小鼠在 dMCAO 后存在持續(xù)的高血糖狀態(tài)。而給予 rFGF21 治 小鼠 dMCAO 后的糖化血紅蛋白水平。肥胖是糖尿病 db/db 小鼠我們觀察到 11 周齡左右的糖尿病 db/db 小鼠體重顯著高于非糖（p<0.05）。dMCAO 后各組小鼠體重?zé)o明顯變化，而長(zhǎng)期接療的 dMCAO 后糖尿病 db/db 小鼠體重?zé)o明顯下降（圖 1.3）。

圖 1.2 rFGF21 降低糖尿病小鼠腦缺血后糖化血紅蛋白水平e 1.2 rFGF21 lowered the HbA1c level in diabetic db/db mice after d.$p<0.05 db/+ sham vs db/db sham,*p < 0.05 stroke vs sham,#p<0.05vs db/+ stroke,&p<0.05 db/db stroke+rFGF21 vs db/db stroke)圖 1.3 rFGF21 對(duì)糖尿病小鼠腦缺血后體重?zé)o明顯影響

重慶醫(yī)科大學(xué)博士研究生學(xué)位論文圖 1.2 rFGF21 降低糖尿病小鼠腦缺血后糖化血紅蛋白水平re 1.2 rFGF21 lowered the HbA1c level in diabetic db/db mice after dp.$p<0.05 db/+ sham vs db/db sham,*p < 0.05 stroke vs sham,#p<0.05vs db/+ stroke,&p<0.05 db/db stroke+rFGF21 vs db/db stroke)

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4 房紹寬;吳江;周春奎;;喹硫平對(duì)小鼠腦缺血后膠質(zhì)細(xì)胞增生及炎癥反應(yīng)的作用[J];中國(guó)老年學(xué)雜志;2011年03期

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7 譚艷,于龍順,劉忠武,王星文,任世蘭,趙國(guó)舉;賽庚啶對(duì)小鼠腦缺血再灌后學(xué)習(xí)記憶行為的影響[J];鄖陽(yáng)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2000年01期

8 張曉雙;張恩戶;高國(guó)鍇;任永奇;;薯蕷皂苷與冰片配伍對(duì)小鼠腦缺血再灌注損傷的影響[J];西部中醫(yī)藥;2011年12期

9 迪麗努爾·沙比托夫;朱毅忠;買爾旦·米吉提;陳希元;;紅花黃色素對(duì)小鼠腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用[J];中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志;2006年02期

10 白海波,萬(wàn)海同,鄭筱祥;養(yǎng)陰益氣活血沖劑拮抗小鼠腦缺血時(shí)血中腎上腺素水平增高的作用[J];中國(guó)中醫(yī)急癥;2001年06期

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9 梁賢凱;王秀杰;;小鼠腦缺血組織中自然殺傷細(xì)胞的浸潤(rùn)[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)急診醫(yī)學(xué)分會(huì)第十六次全國(guó)急診醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2013年

10 陳翰博;;水通道蛋白-4在小鼠腦缺血再灌注損傷早期表達(dá)的研究[A];《中華急診醫(yī)學(xué)雜志》第八屆組稿會(huì)暨急診醫(yī)學(xué)首屆青年論壇論文匯編[C];2009年

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5 唐穎馨;縫隙連接通訊對(duì)腦缺血邊緣區(qū)及遠(yuǎn)隔區(qū)神經(jīng)元損傷的影響及機(jī)制研究[D];華中科技大學(xué);2009年

6 薛婧;鞘磷脂合成酶2缺乏對(duì)小鼠腦缺血再灌注損傷后炎癥反應(yīng)的影響及其機(jī)制研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2017年

7 房紹寬;喹硫平對(duì)小鼠腦缺血保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究[D];吉林大學(xué);2009年

8 宋文英;球狀脂聯(lián)素對(duì)糖尿病小鼠腦缺血損傷的保護(hù)作用及其抗凋亡機(jī)制研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2013年

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4 楊繼峰;西洛他唑?qū)π∈竽X缺血再灌注損傷的保護(hù)作用及對(duì)bcl-2蛋白表達(dá)的影響[D];華中科技大學(xué);2010年

5 董文鵬;白藜蘆醇對(duì)小鼠腦缺血再灌注損傷不同階段的保護(hù)機(jī)制研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2008年

6 張快;氧化槐定堿對(duì)小鼠腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用[D];寧夏醫(yī)科大學(xué);2012年

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10 張濼;甘露醇對(duì)小鼠腦缺血再灌注損傷后細(xì)胞凋亡的影響[D];山西醫(yī)科大學(xué);2011年

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