【摘要】：目的篩選并驗證與帕金森病相關的差異microRNA(miRNAs),初步探討miR-1976在帕金森病發(fā)展中的作用機制。方法隨機選取28例帕金森患者及對照組35例為研究對象。采用μParaflo溲微流體芯片技術篩選與帕金森病相關的差異miRNAs,針對組間差異表達3倍以上、且組內差異小的8個miRNAs,進行實時PCR驗證芯片重復性,并進一步構建miR-1976過表達慢病毒,通過電子顯微鏡及流式細胞儀檢測miR-1976過表達組多巴胺能神經元細胞凋亡情況。結果微流體芯片技術篩選出18個PD相關的差異表達miRNAs基因,表達差異3倍以上的8個基因是miR-1976、miR-153、miR-103a、miR-29a、miR-210、miR-375、miR-146a、miR-101a,miR-1976的表達差異最大,結果與miRNA芯片檢測結果一致。miR-1976過表達組中發(fā)現(xiàn)凋亡小體形成,細胞凋亡率顯著增加。結論 miR-1976是一個高差別表達的miRNA,具有促進多巴胺能神經元凋亡的功能,可能為帕金森病患者新的生物標志物。
【圖文】：

29a、miＲ-210、miＲ-375、miＲ-146a、miＲ-101a。2．2實時熒光定量PCＲ采用實時熒光定量PCＲ技術，驗證芯片檢測結果驗證部分差異miＲNAs在PD組及NC組血清中的表達(圖1)，結果發(fā)現(xiàn)miＲ-1976的表達差異最大，在PD組中其表達量為NC組的5．64倍，具有顯著的統(tǒng)計學差異(P＜0.01)，結果與miＲNA芯片檢測結果一致。2．3miＲ-1976過表達對多巴胺能神經元細胞凋亡的影響構建miＲ-1976過表達慢病毒，感染體外培養(yǎng)的MES23．5多巴胺能神經元細胞株，電子顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)，感染miＲ-1976過表達慢病毒載體12h后，多巴胺能神經元細胞明顯有凋亡小體形成(圖2);流式細胞儀技術檢測發(fā)現(xiàn)，miＲ-1976過表達組多巴胺能神經元細胞凋亡顯著增加(圖3)。圖1驗證miＲNAs在PD組和NC組受試者血清中的表達(與NC組比較，＊＊P＜0.01，＊＊＊P＜0.001)圖2電鏡下多巴胺能神經元細胞的凋亡情況(×3700)圖3多巴胺能神經元細胞的凋亡情況臨床神經病學雜志2017年第30卷第3期·173·

29a、miＲ-210、miＲ-375、miＲ-146a、miＲ-101a。2．2實時熒光定量PCＲ采用實時熒光定量PCＲ技術，驗證芯片檢測結果驗證部分差異miＲNAs在PD組及NC組血清中的表達(圖1)，結果發(fā)現(xiàn)miＲ-1976的表達差異最大，在PD組中其表達量為NC組的5．64倍，具有顯著的統(tǒng)計學差異(P＜0.01)，結果與miＲNA芯片檢測結果一致。2．3miＲ-1976過表達對多巴胺能神經元細胞凋亡的影響構建miＲ-1976過表達慢病毒，感染體外培養(yǎng)的MES23．5多巴胺能神經元細胞株，電子顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)，感染miＲ-1976過表達慢病毒載體12h后，多巴胺能神經元細胞明顯有凋亡小體形成(圖2);流式細胞儀技術檢測發(fā)現(xiàn)，miＲ-1976過表達組多巴胺能神經元細胞凋亡顯著增加(圖3)。圖1驗證miＲNAs在PD組和NC組受試者血清中的表達(與NC組比較，＊＊P＜0.01，＊＊＊P＜0.001)圖2電鏡下多巴胺能神經元細胞的凋亡情況(×3700)圖3多巴胺能神經元細胞的凋亡情況臨床神經病學雜志2017年第30卷第3期·173·

29a、miＲ-210、miＲ-375、miＲ-146a、miＲ-101a。2．2實時熒光定量PCＲ采用實時熒光定量PCＲ技術，驗證芯片檢測結果驗證部分差異miＲNAs在PD組及NC組血清中的表達(圖1)，結果發(fā)現(xiàn)miＲ-1976的表達差異最大，在PD組中其表達量為NC組的5．64倍，具有顯著的統(tǒng)計學差異(P＜0.01)，結果與miＲNA芯片檢測結果一致。2．3miＲ-1976過表達對多巴胺能神經元細胞凋亡的影響構建miＲ-1976過表達慢病毒，感染體外培養(yǎng)的MES23．5多巴胺能神經元細胞株，電子顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)，感染miＲ-1976過表達慢病毒載體12h后，多巴胺能神經元細胞明顯有凋亡小體形成(圖2);流式細胞儀技術檢測發(fā)現(xiàn)，miＲ-1976過表達組多巴胺能神經元細胞凋亡顯著增加(圖3)。圖1驗證miＲNAs在PD組和NC組受試者血清中的表達(與NC組比較，＊＊P＜0.01，＊＊＊P＜0.001)圖2電鏡下多巴胺能神經元細胞的凋亡情況(×3700)圖3多巴胺能神經元細胞的凋亡情況臨床神經病學雜志2017年第30卷第3期·173·

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