【摘要】：目的:髓母細胞瘤是中樞神經(jīng)系統(tǒng)最常見的惡性胚胎性腫瘤,但放射抗性的存在嚴重制約著放療效果。本研究旨在探索TOP2A對Daoy細胞增殖、遷移、侵襲及放射抗性的影響,并進一步探索其發(fā)生發(fā)展的分子機制。方法:通過檢索GEO全基因組芯片數(shù)據(jù)庫分析得到在目標基因,并利用Realtime-PCR檢測配對組織中的表達情況,應用lipofectamine RNAiMAX reagent將siRNA轉(zhuǎn)染入細胞,Western blot及Realtime-PCR檢測轉(zhuǎn)染效率;CCK-8實驗檢測細胞增殖能力的變化;細胞劃痕實驗及Transwell遷移實驗檢測細胞遷移能力變化;Transwell侵襲實驗檢測細胞侵襲能力變化;通過單機多靶模型處理克隆形成實驗結果得到細胞擬合生存曲線,計算放射敏感性參數(shù)D_0、Dq、SF_2;最后Western blot檢測Wnt通路相關蛋白的表達。結果:1.通過檢索GEO數(shù)據(jù)庫得到GSE35493、GSE39182、GSE50161、GSE74195四個芯片組集,經(jīng)過差異分析選擇BRAD1、TOP2A以及TMSB15A三個目標基因。2.CCK-8實驗結果表明:不論是接受6MV-X線照射的細胞(P(Blank vs si-TOP2A)0.001,P(NC vs si-TOP2A)0.001)還是未接受照射的細胞(P(Blank vs si-TOP2A)0.001,P(NC vs si-TOP2A)0.001),敲低TOP2A后細胞增長速度較對照組明顯降低。3.細胞劃痕實驗發(fā)現(xiàn),敲低TOP2A后細胞傷口愈合率明顯低于對照組(非照射情況下,P(Blank vs si-TOP2A)=0.0071,P(NC vs si-TOP2A)=0.0328;照射情況下,(P(Blank vs si-TOP2A)=0.0028,P(NC vs si-TOP2A)=0.0021);Transwell遷移實驗顯示:敲低TOP2A后細胞遷移率較對照組明顯降低(非照射情況下,P(Blank vs si-TOP2A)=0.0061,P(NC vs si-TOP2A)=0.0387;照射情況下,(P(Blank vs si-TOP2A)=0.0054,P(NC vs si-TOP2A)=0.0015)。3.Transwell侵襲實驗表明,敲低TOP2A后穿過基質(zhì)膠的細胞數(shù)量較對照組明顯降低(非照射情況下,P(Blank vs si-TOP2A)=0.0280,P(NC vs si-TOP2A)=0.0090;照射情況下,(P(Blank vs si-TOP2A)=0.0337,P(NC vs si-TOP2A)=0.0144)。4.平板克隆形成實驗結果發(fā)現(xiàn)敲低TOP2A后細胞形成的克隆數(shù)量明顯低于對照組。5.Western blot結果發(fā)現(xiàn)敲低TOP2A后,β-catenin表達下降。結論:1.TOP2A低表達時,Daoy細胞的增殖、遷移以及侵襲能力明顯下降。2.TOP2A低表達時Daoy細胞放射抗性降低。3.TOP2A對于Daoy增殖、遷移、侵襲以及放射抗性的影響可能是通過Wnt信號通路實現(xiàn)的。
【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R739.4
【圖文】：

estren blot）實驗檢測 TOP2A 蛋白的P2A 的細胞 TOP2A 表達顯著低于空 3 siRNA 敲低效率的驗證l of TOP2A in Daoy cells transfectedgroup, ***P<0.001, **P<0.01, *P<0.0<0.001,###P<0.001,#P<0.05. The mR74 group was decreased significantlyABlank NC si-TOP2A

圖 10 TOP2A 和 β-catenin 蛋白的表達情況Fig.10 The expression of TOP2A and β-catenin討 論髓母細胞瘤起源于小腦顆粒細胞的高度惡性腫瘤，生長迅速、手術切除、易通過腦脊液播散。20 世紀 70 年代的研究發(fā)現(xiàn)即使術后聯(lián)合放療，患者 5 年無進展生存也可達到 45%左右[9]。隨著對 MB 認識的及相關臨床實驗的開展，目前治療方案為依據(jù)不同危險分層進行術后療，雖然全中樞神經(jīng)系統(tǒng)放射治療可帶來一系列近期及遠期反應——腫、顱內(nèi)壓升高、聽力喪失、甲狀腺功能減退、認知功能減退等[10]，其在髓母細胞瘤治療中仍是至關重要的。放射抗性嚴重制約著患者的效果，因此研究其發(fā)生發(fā)展的分子機制至關具有重要意義。

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本文編號：2797221