【摘要】：目的:隨著人口老齡化的進(jìn)程,腦小血管病成為神經(jīng)科的研究熱點(diǎn),而腦白質(zhì)疏松是腦小血管病中以影像學(xué)特征命名的一組臨床綜合征。雖然腦白質(zhì)疏松患者早期是無(wú)癥狀的,而病變卻是非良性病變,與臨床的不良結(jié)局有關(guān),如運(yùn)動(dòng)障礙,癡呆,抑郁,腦卒中及總體患病率和死亡率的增加。近幾十年來(lái),學(xué)者們圍繞著腦白質(zhì)疏松的發(fā)病機(jī)理展開(kāi)了大量的研究,探討遺傳因素和腦血流動(dòng)力學(xué)的改變等,但是仍然沒(méi)有定論。目前關(guān)于腦白質(zhì)疏松基因多態(tài)性的諸多研究表明,遺傳因素對(duì)腦白質(zhì)疏松的發(fā)生也是至關(guān)重要的。腎素血管緊張素系統(tǒng)可以調(diào)節(jié)血壓及血管的緊張性,對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化形成起非常重要的作用,因此引發(fā)學(xué)者們的關(guān)注。腎素血管緊張素系統(tǒng)包括血管緊張素轉(zhuǎn)換酶(ACE),血管緊張素原(AGT)及血管緊張素Ⅱ1型受體(AGTR1)。許多研究指出腎素血管緊張素系統(tǒng)的基因多態(tài)性與心腦血管疾病和高血壓病具有相關(guān)性,并且與腦白質(zhì)病變緊密相關(guān)。另外,學(xué)者們經(jīng)過(guò)大量研究認(rèn)為腦白質(zhì)疏松是由于腦血管儲(chǔ)備功能受到損傷,顱內(nèi)低灌注,進(jìn)而出現(xiàn)一系列臨床表現(xiàn)。由于經(jīng)顱多普勒超聲檢查具有簡(jiǎn)便快捷等優(yōu)點(diǎn),許多學(xué)者借助經(jīng)顱多普勒超聲觀(guān)察大腦中動(dòng)脈的血流速度、搏動(dòng)指數(shù)等參數(shù)判斷腦白質(zhì)疏松患者顱內(nèi)大動(dòng)脈的血流改變及動(dòng)態(tài)演變。結(jié)果發(fā)現(xiàn)腦白質(zhì)疏松患者的大腦中動(dòng)脈血流速度下降,搏動(dòng)指數(shù)增高。有學(xué)者們通過(guò)經(jīng)顱多普勒超聲觀(guān)察社區(qū)老年人的腦血流調(diào)節(jié)功能,并且探討腦血流調(diào)節(jié)功能與腎素血管緊張素系統(tǒng)基因多態(tài)性的關(guān)系。因此,為了探討腎素血管緊張素系統(tǒng)基因多態(tài)性與腦白質(zhì)疏松的關(guān)系,本研究檢測(cè)腦白質(zhì)疏松患者腎素血管緊張素系統(tǒng)ACE-rs4311、rs4362、rs4461142、rs8066114、rs4646994,AGT-rs699、rs4762,AGTR1-rs5182、rs5186這9個(gè)位點(diǎn)的單核苷酸多態(tài)性,為缺血性腦白質(zhì)疏松在遺傳方面的發(fā)病機(jī)制研究提供更多的理論依據(jù)。另外,本課題在同一組研究對(duì)象中篩選受試者通過(guò)經(jīng)顱多普勒超聲儀做屏氣試驗(yàn),評(píng)估中國(guó)北方漢族癥狀性腦白質(zhì)疏松患者的血流動(dòng)力學(xué)改變,探討屏氣指數(shù)與腦白質(zhì)疏松患者影像表現(xiàn)之間的關(guān)系。本研究詣在從血流動(dòng)力學(xué)的角度與基因研究結(jié)果相結(jié)合,揭示腦白質(zhì)疏松的發(fā)病機(jī)制。研究方法:本研究為橫斷面研究。選擇2016年11月-2017年10月期間,在中國(guó)北方城市沈陽(yáng)市第五人民醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科住院及門(mén)診就診的漢族患者414例,年齡為43-93歲,其中男性220名,女性194名。按照嚴(yán)格的入選及排除標(biāo)準(zhǔn)選擇患者,參照Fazekas分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)頭磁共振T2 FLAIR的表現(xiàn)對(duì)病變部位和病變程度進(jìn)行輕重程度判斷,將患者分為0級(jí),I級(jí),II級(jí),III級(jí),即0級(jí)為無(wú)腦白質(zhì)疏松,I級(jí)為輕度腦白質(zhì)疏松(腦白質(zhì)點(diǎn)狀病變),II級(jí)為中度腦白質(zhì)疏松(早期融合病變),III級(jí)為重度腦白質(zhì)疏松(片狀融合病變)。然后按照既往已經(jīng)驗(yàn)證的方法,參照Yadav,Traylor等團(tuán)隊(duì)關(guān)于腦白質(zhì)疏松基因研究的分組標(biāo)準(zhǔn),將Fazekas II級(jí)與III級(jí)合并,等同于多發(fā)性腔隙性腦梗死合并融合性腦白質(zhì)病變,作為缺血性腦白質(zhì)疏松病例組,Fazekas 0級(jí)與I級(jí)合并等同于孤立性腔隙性腦梗死(顱內(nèi)點(diǎn)狀病變),作為缺血性腦白質(zhì)疏松對(duì)照組。同時(shí)盡量滿(mǎn)足不同組別患者具備相同的性別、年齡及各種腦血管病易患因素,以減少各種混雜因素的影響。對(duì)腎素血管緊張素系統(tǒng)ACE-rs4311、rs4362、rs4461142、rs8066114,AGT-rs699、rs4762,AGTR1-rs5182、rs5186這8個(gè)位點(diǎn)采用SNaPshot分型技術(shù)檢測(cè)單核苷酸多態(tài)性,對(duì)ACE-rs4646994位點(diǎn)采用PCR技術(shù)進(jìn)行分型鑒定。然后采用SPSS 24.0(IBM公司)軟件及SHEsis在線(xiàn)分析軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。對(duì)各位點(diǎn)進(jìn)行哈迪-溫伯格平衡檢驗(yàn),統(tǒng)計(jì)分析各位點(diǎn)基因型及等位基因在病例組與對(duì)照組的頻率分布,進(jìn)行連鎖不平衡分析及單倍型分析。應(yīng)用Logistic逐步回歸分析評(píng)估各位點(diǎn)基因型和等位基因與腦白質(zhì)疏松發(fā)病危險(xiǎn)性的關(guān)系。然后,在同一組研究對(duì)象中篩選適合的患者應(yīng)用經(jīng)顱多普勒超聲儀做常規(guī)檢查和屏氣試驗(yàn),觀(guān)察患者兩側(cè)大腦中動(dòng)脈血流速度在屏氣30秒前后的變化,記錄平均血流速度,計(jì)算屏氣指數(shù)。觀(guān)察腦白質(zhì)疏松患者的臨床表現(xiàn)與影像表現(xiàn)之間的關(guān)系,評(píng)估屏氣指數(shù)與頭磁共振輕重程度的關(guān)系。結(jié)果:1.腎素血管緊張素系統(tǒng)的9個(gè)位點(diǎn)中只有ACE-rs4461142基因型CC,CT及TT在病例組與對(duì)照組的P0.05(P=0.048),有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。而其他8個(gè)位點(diǎn)的基因型在病例組與對(duì)照組的P值均0.05,沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。另外,所有9個(gè)位點(diǎn)的等位基因在病例組與對(duì)照組的P值均0.05,沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2.ACE-rs4362的TT基因型(OR=2.674,95%CI:1.267~5.649,P=0.010),在控制各種混雜因素后,對(duì)缺血性腦白質(zhì)疏松的發(fā)病危險(xiǎn)度是CC基因型的2.674倍;T等位基因(OR=1.228,95%CI:1.038~1.454,P=0.017)在控制各種混雜因素后,對(duì)缺血性腦白質(zhì)疏松的發(fā)病危險(xiǎn)度是C等位基因的1.228倍。3.ACE-rs4461142的T等位基因(OR=1.190,95%CI:1.008~1.404,P=0.039)在控制各種混雜因素后,對(duì)缺血性腦白質(zhì)疏松的發(fā)病危險(xiǎn)度是C等位基因的1.190倍。4.AGTR1-rs5182的T等位基因(OR=1.527,95%CI:1.049~2.217,P=0.027)在控制各種混雜因素后,對(duì)缺血性腦白質(zhì)疏松的發(fā)病危險(xiǎn)度是C等位基因的1.547倍。5.rs4311-rs4362為強(qiáng)連鎖不平衡(r~20.6);rs4311-rs4646994,rs4362-rs4646994,rs4362-rs4461142,rs4311-rs4461142及rs5182-rs5186為較強(qiáng)的連鎖不平衡(r~20.1);其他為較低的連鎖不平衡。6.rs5182-rs5186的3種單倍型T-A,C-A,C-C,病例組與對(duì)照組不具備統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。7.腦白質(zhì)疏松的影像嚴(yán)重程度與認(rèn)知功能受損相關(guān),腦白質(zhì)疏松的影像表現(xiàn)越重,認(rèn)知功能受損越明顯。8.隨著腦白質(zhì)疏松的影像表現(xiàn)加重,屏氣指數(shù)下降。9.在控制了年齡、冠心病及腦卒中病史后,屏氣指數(shù)與腦白質(zhì)疏松仍然具有相關(guān)性(P0.05),與腦白質(zhì)疏松獨(dú)立相關(guān)。結(jié)論:1.ACE-rs4362的TT基因型和T等位基因可能增加中國(guó)北方漢族人群缺血性腦白質(zhì)疏松的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。2.ACE-rs4461142的T等位基因可能增加中國(guó)北方漢族人群缺血性腦白質(zhì)疏松的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。3.AGTR1-rs5182的T等位基因可能增加中國(guó)北方漢族人群缺血性腦白質(zhì)疏松的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。4.ACE rs4311-rs4362為強(qiáng)連鎖不平衡。5.屏氣指數(shù)下降可能與中國(guó)北方人群腦白質(zhì)疏松獨(dú)立相關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：R742
【圖文】：

圖 2.1 SNaPshot 實(shí)驗(yàn)原理圖解本試驗(yàn)技術(shù)流程：ACE- rs4311、rs4362、rs4461142、rs8066114，AGT- rs699、rs4762，AGTR1-rs5182、rs5186：DNA 樣本的質(zhì)量評(píng)估——PCR 引物設(shè)計(jì)——PCR 循環(huán)——PCR產(chǎn) 物 純 化 ——SNaPshot 多 重 單 堿 基 延 伸 反 應(yīng) —— 延 伸 產(chǎn) 物 的 純 化——ABI3730XL 測(cè)序——GeneMapper 4.1 分析ACE-rs4646994 位點(diǎn)：設(shè)計(jì)PCR 引物——PCR擴(kuò)增——瓊脂糖凝膠電泳——測(cè)序驗(yàn)證2.4.2 SNaPshot 技術(shù)實(shí)驗(yàn)過(guò)程DNA樣本取1μl 1% 瓊脂糖電泳對(duì)其樣本進(jìn)行質(zhì)量檢查以及濃度估計(jì)，然后根據(jù)估計(jì)的濃度將樣本稀釋到工作濃度5-10ng/μl。然后進(jìn)行多重PCR反應(yīng)，PCR引物設(shè)計(jì)如表2.1所示：表 2.1 引物序列及 PCR 長(zhǎng)度

延伸反應(yīng)：延伸反應(yīng)體系（10μl）包括5μl SNaPshot Multiplex Kit(ABI), 2μl 化后多重PCR產(chǎn)物，1μl 延伸引物混合物，2μl 超純水。延伸引物混合物中各延伸引物的濃度均為0.8。延伸反應(yīng)程序：96℃變性1min，96℃變性10s，55℃退火5s，60℃延伸30s共28個(gè)循環(huán)；然后4℃保存。延伸產(chǎn)物的純化：在10μl 延伸產(chǎn)物中加入1U SAP酶，37 ℃溫浴1小時(shí), 后75℃滅活15分鐘。2.4.3 ACE-rs4646994 位點(diǎn)的技術(shù)過(guò)程首先設(shè)計(jì)圖2.2中下劃線(xiàn)序列的PCR引物：rs4646994 F:5’CTGGAGACCACTCCCATCCTTTCT3’R:5’GATGTGGCCATCACATTCGTCAGAT3’

中國(guó)醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文號(hào)為 2-16 到 2-30 號(hào)標(biāo)本。Lane17， DL2000 分子量 marker。第三排，每隔一列上樣跑膠 Lane1：2-31； Lane3：2-32； Lane5:2-33；Lane7：2-34；Lane9：2-35； Lane11：2-36， Lane13：2-37， Lane15：2-38。Lane 17： DL-2000 分子量marker。3.2.2 ACE- rs4646994 的凝膠電泳圖（圖 3.2）

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 孫麗偉;劉承浩;周衛(wèi)東;;腎素-血管緊張素系統(tǒng)基因多態(tài)性與腦白質(zhì)疏松的研究進(jìn)展[J];中國(guó)神經(jīng)免疫學(xué)和神經(jīng)病學(xué)雜志;2015年06期

2 趙美萍;;腦白質(zhì)疏松的病因及危險(xiǎn)因素分析研究[J];現(xiàn)代診斷與治療;2016年07期

3 周仕鈞;;發(fā)現(xiàn)“腦白質(zhì)疏松”不必緊張[J];家庭科技;2019年01期

4 蘇增鋒;張穎;;腦白質(zhì)疏松的研究進(jìn)展[J];中華老年心腦血管病雜志;2013年06期

5 吳艷梅;吳丹紅;吳利忠;黃登笑;孫玲;李忠誠(chéng);楊淼;穆懷典;;血脂水平與腦白質(zhì)疏松的關(guān)系研究[J];中華臨床醫(yī)師雜志(電子版);2012年10期

6 劉平;姜樹(shù)軍;汪麗芳;蘇寧;李艷霞;;老年腦白質(zhì)疏松與血清同型半胱氨酸水平關(guān)系的臨床研究[J];臨床軍醫(yī)雜志;2011年03期

7 黃紅莉;王磊;鄭華;;不同程度腦白質(zhì)疏松的臨床和影像特征[J];臨床軍醫(yī)雜志;2010年06期

8 黃維星;王寶軍;;腦白質(zhì)疏松的研究進(jìn)展[J];包頭醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2009年03期

9 王晨;高培毅;;急性腔隙性腦梗死患者腦白質(zhì)疏松磁共振影像分層研究[J];中國(guó)卒中雜志;2009年09期

10 李蔚渤;;腦白質(zhì)疏松的危險(xiǎn)因素分析[J];中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志;2006年05期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 段振鵬;代成波;張玉虎;張雄;王碩;劉新通;馬桂賢;黃飚;唐紅梅;曹裕民;龍隆;王麗娟;;大動(dòng)脈粥樣硬化性腦卒中患者腦白質(zhì)疏松危險(xiǎn)因素分析[A];7th中華醫(yī)學(xué)會(huì)神經(jīng)病學(xué)分會(huì)全國(guó)中青年神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)大會(huì)暨第十屆全國(guó)神經(jīng)系統(tǒng)感染性疾病與腦脊液細(xì)胞學(xué)學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編[C];2014年

2 辛?xí)澡?程琳;張鈺;楊釗;劉建榮;;小卒中與非小卒中患者腦白質(zhì)疏松的比較研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十七次全國(guó)神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編（下）[C];2014年

3 卓識(shí)途;蔡若蔚;;腦白質(zhì)疏松相關(guān)危險(xiǎn)因素分析[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十七次全國(guó)神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編（下）[C];2014年

4 馬順天;;腦白質(zhì)疏松的臨床研究進(jìn)展[A];2008年浙江省神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2008年

5 羅本燕;;腦白質(zhì)疏松的神經(jīng)功能損害和藥物治療[A];華東六省一市第二十三次神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議暨2016年浙江省神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2016年

6 孫東霞;許晶;張大偉;;腦白質(zhì)疏松患者伴隨情緒情感障礙特點(diǎn)的臨床研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十三次全國(guó)神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2010年

7 張遠(yuǎn)錦;樊東升;;短暫性腦缺血發(fā)作后血清VEGF水平與腦白質(zhì)疏松等級(jí)相關(guān)[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十八次全國(guó)神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編（上）[C];2015年

8 魏娜;李越秀;姚婧t

本文編號(hào)：2795342