【摘要】：背景:膠質(zhì)瘤屬于人類高度惡性腫瘤之一,其侵襲性強(qiáng),容易復(fù)發(fā)。WHO分級Ⅳ級的膠質(zhì)瘤(即GBM)預(yù)后中位生存期只有14個月左右,盡管采取手術(shù)全切合并術(shù)后放、化療,但其預(yù)后仍很差。膠質(zhì)瘤療效欠佳是因為其對周圍組織的廣泛浸潤及膠質(zhì)瘤細(xì)胞的過度增殖。因此,通過分子層面,對膠質(zhì)瘤發(fā)生過程中的具體信號通路研究成為目前廣為關(guān)注的熱點。MicroRNAs是一類長度約為18-25個核苷酸的非編碼的調(diào)控性小RNA分子,其在轉(zhuǎn)錄后水平通過mRNA剪切或抑制蛋白質(zhì)翻譯的方式負(fù)向調(diào)控靶基因。MicroRNAs在多種腫瘤(如乳腺癌、卵巢癌、胃癌、膠質(zhì)瘤等)的組織中均穩(wěn)定表達(dá),并參與調(diào)控這些腫瘤的生理和病理過程。因此,我們設(shè)想,MicroRNAs可能會是人類腫瘤潛在的治療靶點。目的:(1)分析MicroRNAs在膠質(zhì)瘤中的表達(dá)情況,篩選出差異表達(dá)的miRNA,并分析其與膠質(zhì)瘤患者的預(yù)后關(guān)系。(2)探究hsa-miR-206在膠質(zhì)瘤細(xì)胞生長過程中的生物學(xué)作用。(3)探究hsa-miR-206在體內(nèi)影響膠質(zhì)瘤發(fā)展的具體機(jī)制。方法:(1)對NCBI GEO數(shù)據(jù)庫內(nèi)的膠質(zhì)瘤數(shù)據(jù)進(jìn)行生物信息學(xué)分析,篩選出顯著差異表達(dá)的miRNA,并通過qRT-PCR檢測目的miRNA在各級別膠質(zhì)瘤及正常腦組織中的表達(dá)量是否存在差異,并用Kaplan-Meier分析目的miRNA與膠質(zhì)瘤患者預(yù)后之間的關(guān)系。(2)用hsa-miR-206 mimic轉(zhuǎn)染人膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞株U251,并用qRT-PCR檢測轉(zhuǎn)染后U251細(xì)胞中hsa-miR-206的表達(dá)量。再通過CCK-8實驗、流式細(xì)胞術(shù)、Transwell實驗、細(xì)胞劃痕實驗來探討hsa-miR-206對U251細(xì)胞增殖、侵襲、遷移以及凋亡的影響。(3)通過生物信息學(xué)網(wǎng)站預(yù)測hsa-miR-206的下游靶基因,并用熒光素酶試驗及Western blot實驗進(jìn)行驗證。構(gòu)建裸鼠皮下移植瘤模型及大鼠顱內(nèi)原位膠質(zhì)瘤模型,進(jìn)一步探討hsa-miR-206在體內(nèi)及腦內(nèi)環(huán)境下對膠質(zhì)瘤增殖的影響及其分子機(jī)制。結(jié)果:(1)對GEO數(shù)據(jù)庫進(jìn)行篩選之后,得到差異表達(dá)miRNA,即hsamiR-206,其在膠質(zhì)瘤組織中的表達(dá)量顯著高于正常腦組織,且各級別膠質(zhì)瘤之間的表達(dá)量也存在差異。Kaplan-Meier分析結(jié)果顯示,膠質(zhì)瘤患者組織中hsamiR-206的表達(dá)量與生存期顯著相關(guān)(p㩳0.01),hsa-miR-206低表達(dá)的患者預(yù)后較差,而hsa-miR-206高表達(dá)的患者預(yù)后相對較好,表明hsa-miR-206可能是膠質(zhì)瘤患者潛在的預(yù)后生物學(xué)標(biāo)志物。(2)過表達(dá)hsa-miR-206,能夠顯著抑制U251細(xì)胞增殖、侵襲及遷移,并促進(jìn)細(xì)胞凋亡。(3)通過生物信息學(xué)方法預(yù)測到hsa-miR-206所調(diào)控的潛在靶基因為PPIB,用熒光素酶實驗及Western blot實驗進(jìn)行驗證,與預(yù)測的靶基因相一致。在裸鼠皮下移植瘤模型以及大鼠顱內(nèi)原位膠質(zhì)瘤模型中,過表達(dá)hsa-miR-206會顯著抑制腫瘤的增殖。對其機(jī)制進(jìn)一步研究,得出hsa-miR-206可能是通過靶向調(diào)控PPIB來發(fā)揮抑瘤作用。結(jié)論:綜上所述,本研究得出hsa-miR-206在人膠質(zhì)瘤組織中下調(diào)表達(dá),且與膠質(zhì)瘤患者的預(yù)后密切相關(guān),可能是膠質(zhì)瘤患者潛在的預(yù)后生物標(biāo)志物。hsamiR-206不僅在體外抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖、侵襲及遷移,促進(jìn)其凋亡,在體內(nèi)也能夠抑制膠質(zhì)瘤的生長,且hsa-miR-206可能是通過靶向調(diào)控PPIB來發(fā)揮抑瘤作用。因此,hsa-miR-206靶向調(diào)控PPIB這一信號通路對膠質(zhì)瘤的靶向治療提供了可能。
【學(xué)位授予單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R739.41
【圖文】：

計學(xué)分析 Graphpad Prism 7.00 和 SPSS 24 統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，數(shù)據(jù)用平均的方式來表示。兩組間數(shù)據(jù)差異用獨立樣本 T 檢驗進(jìn)行分析，Kaplan-M者總生存期和無進(jìn)展生存期進(jìn)行分析。當(dāng) p 值<0.05 時認(rèn)為具有統(tǒng)計學(xué)驗結(jié)果質(zhì)瘤中 hsa-miR-206 存在差異表達(dá)膠質(zhì)瘤 GEO 數(shù)據(jù)庫進(jìn)行篩選，從而得出差異表達(dá) miRNA，并對 miR瘤中的表達(dá)量進(jìn)行聚類熱圖（圖 1-1）。其中綠框表示在該組織中的表平均水平，而紅框則表示該組織中的表達(dá)量高于平均水平。因此，可以質(zhì)瘤組織中 hsa-miR-206 存在差異表達(dá)。且目前對 hsa-miR-206 與膠質(zhì)研究很少，故篩選 hsa-miR-206 作為本研究的研究對象。

hsa-miR-206 在膠質(zhì)瘤以及正常腦組織中的相對表達(dá)低表達(dá)與預(yù)后不良相關(guān) 分析結(jié)果顯示，膠質(zhì)瘤患者組織中 hsa-miR-2060.01），hsa-miR-206 低表達(dá)的患者往往預(yù)后較差預(yù)后較好，生存期明顯較長（圖 1-3）。該結(jié)果瘤患者預(yù)后相關(guān)的生物標(biāo)志物。

圖 1-2 hsa-miR-206 在膠質(zhì)瘤以及正常腦組織中的相對表達(dá)量1.63 hsa-miR-206 低表達(dá)與預(yù)后不良相關(guān)Kaplan-Meier 分析結(jié)果顯示，膠質(zhì)瘤患者組織中 hsa-miR-206 的表達(dá)量與生存期顯著相關(guān)（p㩳0.01），hsa-miR-206 低表達(dá)的患者往往預(yù)后較差，而 hsa-miR-206 高表達(dá)的患者預(yù)后較好，生存期明顯較長（圖 1-3）。該結(jié)果表明 hsa-miR-206 可以作為膠質(zhì)瘤患者預(yù)后相關(guān)的生物標(biāo)志物。

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本文編號：2792488