【摘要】：背景:膠質瘤屬于人類高度惡性腫瘤之一,其侵襲性強,容易復發(fā)。WHO分級Ⅳ級的膠質瘤(即GBM)預后中位生存期只有14個月左右,盡管采取手術全切合并術后放、化療,但其預后仍很差。膠質瘤療效欠佳是因為其對周圍組織的廣泛浸潤及膠質瘤細胞的過度增殖。因此,通過分子層面,對膠質瘤發(fā)生過程中的具體信號通路研究成為目前廣為關注的熱點。MicroRNAs是一類長度約為18-25個核苷酸的非編碼的調控性小RNA分子,其在轉錄后水平通過mRNA剪切或抑制蛋白質翻譯的方式負向調控靶基因。MicroRNAs在多種腫瘤(如乳腺癌、卵巢癌、胃癌、膠質瘤等)的組織中均穩(wěn)定表達,并參與調控這些腫瘤的生理和病理過程。因此,我們設想,MicroRNAs可能會是人類腫瘤潛在的治療靶點。目的:(1)分析MicroRNAs在膠質瘤中的表達情況,篩選出差異表達的miRNA,并分析其與膠質瘤患者的預后關系。(2)探究hsa-miR-206在膠質瘤細胞生長過程中的生物學作用。(3)探究hsa-miR-206在體內影響膠質瘤發(fā)展的具體機制。方法:(1)對NCBI GEO數(shù)據庫內的膠質瘤數(shù)據進行生物信息學分析,篩選出顯著差異表達的miRNA,并通過qRT-PCR檢測目的miRNA在各級別膠質瘤及正常腦組織中的表達量是否存在差異,并用Kaplan-Meier分析目的miRNA與膠質瘤患者預后之間的關系。(2)用hsa-miR-206 mimic轉染人膠質母細胞瘤細胞株U251,并用qRT-PCR檢測轉染后U251細胞中hsa-miR-206的表達量。再通過CCK-8實驗、流式細胞術、Transwell實驗、細胞劃痕實驗來探討hsa-miR-206對U251細胞增殖、侵襲、遷移以及凋亡的影響。(3)通過生物信息學網站預測hsa-miR-206的下游靶基因,并用熒光素酶試驗及Western blot實驗進行驗證。構建裸鼠皮下移植瘤模型及大鼠顱內原位膠質瘤模型,進一步探討hsa-miR-206在體內及腦內環(huán)境下對膠質瘤增殖的影響及其分子機制。結果:(1)對GEO數(shù)據庫進行篩選之后,得到差異表達miRNA,即hsamiR-206,其在膠質瘤組織中的表達量顯著高于正常腦組織,且各級別膠質瘤之間的表達量也存在差異。Kaplan-Meier分析結果顯示,膠質瘤患者組織中hsamiR-206的表達量與生存期顯著相關(p㩳0.01),hsa-miR-206低表達的患者預后較差,而hsa-miR-206高表達的患者預后相對較好,表明hsa-miR-206可能是膠質瘤患者潛在的預后生物學標志物。(2)過表達hsa-miR-206,能夠顯著抑制U251細胞增殖、侵襲及遷移,并促進細胞凋亡。(3)通過生物信息學方法預測到hsa-miR-206所調控的潛在靶基因為PPIB,用熒光素酶實驗及Western blot實驗進行驗證,與預測的靶基因相一致。在裸鼠皮下移植瘤模型以及大鼠顱內原位膠質瘤模型中,過表達hsa-miR-206會顯著抑制腫瘤的增殖。對其機制進一步研究,得出hsa-miR-206可能是通過靶向調控PPIB來發(fā)揮抑瘤作用。結論:綜上所述,本研究得出hsa-miR-206在人膠質瘤組織中下調表達,且與膠質瘤患者的預后密切相關,可能是膠質瘤患者潛在的預后生物標志物。hsamiR-206不僅在體外抑制膠質瘤細胞的增殖、侵襲及遷移,促進其凋亡,在體內也能夠抑制膠質瘤的生長,且hsa-miR-206可能是通過靶向調控PPIB來發(fā)揮抑瘤作用。因此,hsa-miR-206靶向調控PPIB這一信號通路對膠質瘤的靶向治療提供了可能。
【學位授予單位】：蘭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R739.41
【圖文】：

計學分析 Graphpad Prism 7.00 和 SPSS 24 統(tǒng)計軟件進行數(shù)據分析，數(shù)據用平均的方式來表示。兩組間數(shù)據差異用獨立樣本 T 檢驗進行分析，Kaplan-M者總生存期和無進展生存期進行分析。當 p 值<0.05 時認為具有統(tǒng)計學驗結果質瘤中 hsa-miR-206 存在差異表達膠質瘤 GEO 數(shù)據庫進行篩選，從而得出差異表達 miRNA，并對 miR瘤中的表達量進行聚類熱圖（圖 1-1）。其中綠框表示在該組織中的表平均水平，而紅框則表示該組織中的表達量高于平均水平。因此，可以質瘤組織中 hsa-miR-206 存在差異表達。且目前對 hsa-miR-206 與膠質研究很少，故篩選 hsa-miR-206 作為本研究的研究對象。

hsa-miR-206 在膠質瘤以及正常腦組織中的相對表達低表達與預后不良相關 分析結果顯示，膠質瘤患者組織中 hsa-miR-2060.01），hsa-miR-206 低表達的患者往往預后較差預后較好，生存期明顯較長（圖 1-3）。該結果瘤患者預后相關的生物標志物。

圖 1-2 hsa-miR-206 在膠質瘤以及正常腦組織中的相對表達量1.63 hsa-miR-206 低表達與預后不良相關Kaplan-Meier 分析結果顯示，膠質瘤患者組織中 hsa-miR-206 的表達量與生存期顯著相關（p㩳0.01），hsa-miR-206 低表達的患者往往預后較差，而 hsa-miR-206 高表達的患者預后較好，生存期明顯較長（圖 1-3）。該結果表明 hsa-miR-206 可以作為膠質瘤患者預后相關的生物標志物。

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