【摘要】：目的:本研究旨在探討烷基化修復(fù)同源蛋白5(a-ketoglutarate-dependent dioxygenase alk B homolog 5,ALKBH5)在人腦膠質(zhì)瘤細胞侵襲及前神經(jīng)-間質(zhì)轉(zhuǎn)化中的作用及其機制。方法:(1)檢索中國人腦膠質(zhì)瘤基因組學數(shù)據(jù)庫(Chinese Glioma Genome Altas,CGGA)和人類蛋白質(zhì)圖譜數(shù)據(jù)庫(The Human Protein Atlas),分析腦膠質(zhì)瘤組織ALKBH5的表達與臨床病理分級、分子分型和預(yù)后的關(guān)系;(2)利用實時熒光定量PCR法和Western blot法檢測四種常見人腦膠質(zhì)瘤細胞株中ALKBH5的差異表達;(3)在相對高表達的腦膠質(zhì)瘤細胞中干擾ALKBH5,在相對低表達的腦膠質(zhì)瘤細胞中過表達ALKBH5,用CCK-8法和成克隆實驗檢測ALKBH5干擾或者過表達對腦膠質(zhì)瘤細胞增殖和克隆形成能力的影響;Transwell試驗評價ALKBH5干擾或者過表達前后腦膠質(zhì)瘤細胞的遷移和侵襲能力;并用Western blot檢測相應(yīng)的前神經(jīng)-間質(zhì)轉(zhuǎn)化標志物E-cadherin、N-cadherin、OLIG2、YKL-40、Vimentin和Met的表達,以及AMPK/m TOR信號通路相關(guān)蛋白的表達。結(jié)果:(1)臨床數(shù)據(jù)庫分析結(jié)果表明腦膠質(zhì)瘤病理分級越高,ALKBH5的表達水平也越高,且其在間質(zhì)型腦膠質(zhì)瘤中表達高于前神經(jīng)元型,與患者總體生存期呈負相關(guān);(2)sh-ALKBH5能夠顯著抑制U87MG和U251MG細胞中ALKBH5的表達,3x Flag-ALKBH5能夠顯著增強LN229和SW1783細胞中ALKBH5的表達;(3)下調(diào)ALKBH5抑制了U87MG和U251MG細胞的增殖、遷移和侵襲能力,前神經(jīng)型標志物E-cadherin、OLIG2表達增加,間質(zhì)表型標志物N-cadherin、Met和YKL-40表達降低,p-m TOR、p-Raptor蛋白表達降低;而在LN229和SW1783細胞中過表達ALKBH5的作用與之相反,前神經(jīng)型標志物E-cadherin、OLIG2表達降低,間質(zhì)表型標志物N-cadherin、Met和YKL-40表達增加,同時p-AMPK、p-TSC2蛋白表達增加。結(jié)論:(1)腦膠質(zhì)瘤組織ALKBH5表達與病理分級呈正相關(guān),與患者的生存期呈負相關(guān);(2)ALKBH5增強了腫瘤增殖、遷移和侵襲的能力,且促進了前神經(jīng)-間質(zhì)轉(zhuǎn)化;(3)ALKBH5可能通過調(diào)控AMPK/m TOR通路影響腦膠質(zhì)瘤細胞的前神經(jīng)-間質(zhì)轉(zhuǎn)化。
【學位授予單位】：江蘇大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R739.41
【圖文】：

圖 1.1.3 m6A RNA 甲基化在癌癥中的多重功能。m6A RNA 甲基化在癌癥的發(fā)生和發(fā)展過程中發(fā)揮多種功能。中間的圓圈代表 m6ARNA 甲基化的可逆過程，在調(diào)節(jié) CSC 的多能性、腫瘤細胞增殖，腫瘤轉(zhuǎn)移和腫瘤免疫方面發(fā)揮關(guān)鍵作用。m6ARNA 甲基化通過不同的機制在多種癌癥中發(fā)揮這四個方面的作用[50]。Fig 1.1.3 Multiple functions of m6A RNA methylation in cancer. m6A RNA methylation exertsmμLtiple functions in cancer initiation and progression. The circle in the middle represents thereversible process of m6A RNA methylation, which plays a pivotal role in modμLating CSCpluripotency, cancer proliferation, cancer metastasis, and tumor immunity. Distinct mechanismsthrough which m6A RNA methylation exerts these four aspects of functions in various types ofcancers are shown in a graphical form in this picture.CSCs 可能被證明能夠再生腫瘤，代表了一個自我更新的細胞庫，這些細胞會引發(fā)多種類型的癌癥[52,53]。造血干細胞(HSCs)具有明確的發(fā)育軌跡，可以監(jiān)測和量化其分化，為探索分化狀態(tài)提供了一個理想的模型系統(tǒng)，分化異�；蚍只�

2技術(shù)路線

圖 2.4.1 腦膠質(zhì)瘤組織 ALKBH5 mRNA 表達與臨床病理分級呈正相關(guān)A：不同等級腦膠質(zhì)瘤中 ALKBH5 mRNA 的表達；B：各亞型腦膠質(zhì)瘤中 ALKBH5 mRNA的表達。Fig2.4.1ALKBH5 expression in gliomas was positively correlated with clinical pathologyclassificationA: The mRNA levels of ALKBH5 in different grades of gliomas ; B: The mRNA levels ofALKBH5 in subtypes of glioblastoma.2.4.2 腦膠質(zhì)瘤組織中 ALKBH5 mRNA 表達與患者生存期呈負相關(guān)通過檢索中國人腦膠質(zhì)瘤基因組圖譜計劃數(shù)據(jù)庫 (CGGA) 的腦膠質(zhì)瘤患者的臨床相關(guān)數(shù)據(jù)，探索 ALKBH5 表達與腦膠質(zhì)瘤患者之間的相關(guān)性。結(jié)果表明，ALKBH5 高表達的腦膠質(zhì)瘤患者的生存期遠遠低于 ALKBH5 低表達的腦膠質(zhì)瘤

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4 李U

本文編號：2787132