【摘要】：目的:本研究旨在探討烷基化修復(fù)同源蛋白5(a-ketoglutarate-dependent dioxygenase alk B homolog 5,ALKBH5)在人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞侵襲及前神經(jīng)-間質(zhì)轉(zhuǎn)化中的作用及其機(jī)制。方法:(1)檢索中國(guó)人腦膠質(zhì)瘤基因組學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)(Chinese Glioma Genome Altas,CGGA)和人類(lèi)蛋白質(zhì)圖譜數(shù)據(jù)庫(kù)(The Human Protein Atlas),分析腦膠質(zhì)瘤組織ALKBH5的表達(dá)與臨床病理分級(jí)、分子分型和預(yù)后的關(guān)系;(2)利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法和Western blot法檢測(cè)四種常見(jiàn)人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞株中ALKBH5的差異表達(dá);(3)在相對(duì)高表達(dá)的腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞中干擾ALKBH5,在相對(duì)低表達(dá)的腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞中過(guò)表達(dá)ALKBH5,用CCK-8法和成克隆實(shí)驗(yàn)檢測(cè)ALKBH5干擾或者過(guò)表達(dá)對(duì)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖和克隆形成能力的影響;Transwell試驗(yàn)評(píng)價(jià)ALKBH5干擾或者過(guò)表達(dá)前后腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞的遷移和侵襲能力;并用Western blot檢測(cè)相應(yīng)的前神經(jīng)-間質(zhì)轉(zhuǎn)化標(biāo)志物E-cadherin、N-cadherin、OLIG2、YKL-40、Vimentin和Met的表達(dá),以及AMPK/m TOR信號(hào)通路相關(guān)蛋白的表達(dá)。結(jié)果:(1)臨床數(shù)據(jù)庫(kù)分析結(jié)果表明腦膠質(zhì)瘤病理分級(jí)越高,ALKBH5的表達(dá)水平也越高,且其在間質(zhì)型腦膠質(zhì)瘤中表達(dá)高于前神經(jīng)元型,與患者總體生存期呈負(fù)相關(guān);(2)sh-ALKBH5能夠顯著抑制U87MG和U251MG細(xì)胞中ALKBH5的表達(dá),3x Flag-ALKBH5能夠顯著增強(qiáng)LN229和SW1783細(xì)胞中ALKBH5的表達(dá);(3)下調(diào)ALKBH5抑制了U87MG和U251MG細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲能力,前神經(jīng)型標(biāo)志物E-cadherin、OLIG2表達(dá)增加,間質(zhì)表型標(biāo)志物N-cadherin、Met和YKL-40表達(dá)降低,p-m TOR、p-Raptor蛋白表達(dá)降低;而在LN229和SW1783細(xì)胞中過(guò)表達(dá)ALKBH5的作用與之相反,前神經(jīng)型標(biāo)志物E-cadherin、OLIG2表達(dá)降低,間質(zhì)表型標(biāo)志物N-cadherin、Met和YKL-40表達(dá)增加,同時(shí)p-AMPK、p-TSC2蛋白表達(dá)增加。結(jié)論:(1)腦膠質(zhì)瘤組織ALKBH5表達(dá)與病理分級(jí)呈正相關(guān),與患者的生存期呈負(fù)相關(guān);(2)ALKBH5增強(qiáng)了腫瘤增殖、遷移和侵襲的能力,且促進(jìn)了前神經(jīng)-間質(zhì)轉(zhuǎn)化;(3)ALKBH5可能通過(guò)調(diào)控AMPK/m TOR通路影響腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞的前神經(jīng)-間質(zhì)轉(zhuǎn)化。
【學(xué)位授予單位】：江蘇大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類(lèi)號(hào)】：R739.41
【圖文】：

圖 1.1.3 m6A RNA 甲基化在癌癥中的多重功能。m6A RNA 甲基化在癌癥的發(fā)生和發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮多種功能。中間的圓圈代表 m6ARNA 甲基化的可逆過(guò)程，在調(diào)節(jié) CSC 的多能性、腫瘤細(xì)胞增殖，腫瘤轉(zhuǎn)移和腫瘤免疫方面發(fā)揮關(guān)鍵作用。m6ARNA 甲基化通過(guò)不同的機(jī)制在多種癌癥中發(fā)揮這四個(gè)方面的作用[50]。Fig 1.1.3 Multiple functions of m6A RNA methylation in cancer. m6A RNA methylation exertsmμLtiple functions in cancer initiation and progression. The circle in the middle represents thereversible process of m6A RNA methylation, which plays a pivotal role in modμLating CSCpluripotency, cancer proliferation, cancer metastasis, and tumor immunity. Distinct mechanismsthrough which m6A RNA methylation exerts these four aspects of functions in various types ofcancers are shown in a graphical form in this picture.CSCs 可能被證明能夠再生腫瘤，代表了一個(gè)自我更新的細(xì)胞庫(kù)，這些細(xì)胞會(huì)引發(fā)多種類(lèi)型的癌癥[52,53]。造血干細(xì)胞(HSCs)具有明確的發(fā)育軌跡，可以監(jiān)測(cè)和量化其分化，為探索分化狀態(tài)提供了一個(gè)理想的模型系統(tǒng)，分化異�；蚍只�

2技術(shù)路線(xiàn)

圖 2.4.1 腦膠質(zhì)瘤組織 ALKBH5 mRNA 表達(dá)與臨床病理分級(jí)呈正相關(guān)A：不同等級(jí)腦膠質(zhì)瘤中 ALKBH5 mRNA 的表達(dá)；B：各亞型腦膠質(zhì)瘤中 ALKBH5 mRNA的表達(dá)。Fig2.4.1ALKBH5 expression in gliomas was positively correlated with clinical pathologyclassificationA: The mRNA levels of ALKBH5 in different grades of gliomas ; B: The mRNA levels ofALKBH5 in subtypes of glioblastoma.2.4.2 腦膠質(zhì)瘤組織中 ALKBH5 mRNA 表達(dá)與患者生存期呈負(fù)相關(guān)通過(guò)檢索中國(guó)人腦膠質(zhì)瘤基因組圖譜計(jì)劃數(shù)據(jù)庫(kù) (CGGA) 的腦膠質(zhì)瘤患者的臨床相關(guān)數(shù)據(jù)，探索 ALKBH5 表達(dá)與腦膠質(zhì)瘤患者之間的相關(guān)性。結(jié)果表明，ALKBH5 高表達(dá)的腦膠質(zhì)瘤患者的生存期遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于 ALKBH5 低表達(dá)的腦膠質(zhì)瘤

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