發(fā)布時(shí)間：2020-08-02 15:39

【摘要】：背景:膠質(zhì)瘤(glioma)是成人神經(jīng)系統(tǒng)中最常見的惡性腫瘤。膠質(zhì)瘤按腫瘤的細(xì)胞形態(tài)分為星型細(xì)胞瘤、少枝突細(xì)胞瘤、室管膜瘤以及混合細(xì)胞瘤;按惡性程度分為I-IV級(jí)。膠質(zhì)瘤侵襲性強(qiáng)并且生長(zhǎng)又極其迅速,且對(duì)化療藥物具有耐藥性,所以目前雖然臨床上手術(shù)后應(yīng)用放化療等治療,但效果仍不明顯�，F(xiàn)在從分子角度對(duì)膠質(zhì)瘤進(jìn)行診斷和治療已經(jīng)越來越迫切。長(zhǎng)鏈非編碼RNA(long non-coding RNAs,lncRNAs)是由超過200個(gè)核苷酸組成,由DNA轉(zhuǎn)錄非編碼蛋白質(zhì)。雖然人類基因組中存在著成千上萬(wàn)的此類分子,只有很少一部分得以確定其生物作用。lncRNAs具有廣泛的生物學(xué)作用,包括影響細(xì)胞凋亡、侵襲,組蛋白的修飾等。ANRIL是一段位于INK4位點(diǎn)的反義非編碼RNA,其長(zhǎng)度為3.8kb,是從位于9p21上反向轉(zhuǎn)錄INK4B-ARF-INK4A基因叢而來,主要定位于細(xì)胞核。該位置的突變與人類一些癌癥相關(guān),如神經(jīng)膠質(zhì)瘤、白血病、黑色素細(xì)胞瘤、基底細(xì)胞癌、鼻咽癌和乳腺癌等。miRNA是一類長(zhǎng)約19-24個(gè)核糖核苷酸的非編碼小RNA分子,其與腫瘤的生長(zhǎng)、侵襲、新血管生成和凋亡等密切相關(guān)。mi R-34a為其中之一,具有抑癌基因的作用。miR-34a可與靶基因Sirt1的3′UTR上的保守位點(diǎn)特異性結(jié)合抑制基因的表達(dá)。Sirt1是哺乳動(dòng)物去乙�；讣易逯械囊粏T,具有細(xì)胞生存及轉(zhuǎn)錄沉默等作用。目的:目前ANRIL的潛在臨床意義還不明確,并且其與膠質(zhì)瘤的相關(guān)研究并不多。所以本實(shí)驗(yàn)?zāi)康臑?探究ANRIL、miR-34a及Sirt1在膠質(zhì)瘤中的作用以及潛在關(guān)聯(lián),以及對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖、侵襲、遷移及凋亡等的影響機(jī)制。方法:在本實(shí)驗(yàn)中,我們使用膠質(zhì)瘤細(xì)胞系,膠質(zhì)瘤組織,正常腦組織以及膠質(zhì)瘤種植裸鼠作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象,主要應(yīng)用的實(shí)驗(yàn)方法有:CCK-8法,細(xì)胞克隆實(shí)驗(yàn),流式細(xì)胞術(shù),Transwell小室侵襲實(shí)驗(yàn)及westernblot,siRNA基因沉默,Real time-RT-PCR,細(xì)胞轉(zhuǎn)染及報(bào)告載體的構(gòu)建與熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)等技術(shù)。首先我們測(cè)定了在患者膠質(zhì)瘤細(xì)胞以及五種細(xì)胞系中ANRIL的表達(dá)。然后評(píng)估了抑制ANRIL后對(duì)miR-34a表達(dá)的影響,以及對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251的增殖、凋亡、侵襲、遷移的影響。最后探討了相關(guān)的信號(hào)通路機(jī)制。本論文的主要實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:(1)ANRIL在膠質(zhì)瘤組織及膠質(zhì)瘤細(xì)胞中是上調(diào)的,對(duì)其進(jìn)行敲除后可以抑制膠質(zhì)瘤的增殖、遷移、侵襲,并且促進(jìn)凋亡。敲除ANRIL體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中顯著減小了裸鼠種植腫瘤的體積。(2)ANRIL對(duì)miR-34a具有分子海綿作用,抑制ANRIL后miR-34a明顯上調(diào),ANRIL抑制后對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的其中一個(gè)作用機(jī)制是通過上調(diào)miR-34a進(jìn)行的。(3)Sirt1是miR-34a的靶基因之一。miR-34a過表達(dá)可通過下調(diào)Sirt1,抑制細(xì)胞活性、遷移和侵襲能力,促進(jìn)細(xì)胞凋亡。(4)Sirt1是通過PI3K/AKT/mTOR通路發(fā)揮作用。miR-34a過表達(dá)介導(dǎo)的下調(diào)Sirt1表達(dá)從而抑制了PI3K/AKT和m TOR通路,抑制了膠質(zhì)瘤的活性、遷移和侵襲能力,促進(jìn)細(xì)胞凋亡。結(jié)論:綜上所述,ANRIL在膠質(zhì)瘤中上調(diào),我們的研究證實(shí)ANRIL抑制后抑制了膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖、遷移及侵襲的其中一個(gè)機(jī)制是上調(diào)miR-34a介導(dǎo)的。而且,miR-34a過表達(dá)介導(dǎo)的下調(diào)Sirt1表達(dá),隨后抑制PI3K/AKT和mTOR雙通路產(chǎn)生。因此本實(shí)驗(yàn)研究揭示抑制ANRIL并且上調(diào)miR-34a可作為治療膠質(zhì)瘤的策略。
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R739.4
【圖文】：

圖 1.1 lncRNA 對(duì) miRNA 的作用[45]1.2.4 長(zhǎng)鏈非編碼 RNA ANRIL 與腫瘤1.2.4.1 ANRIL 與肺癌研究發(fā)現(xiàn)，在非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）組織中ANRIL表達(dá)上調(diào)，并且在預(yù)后不良的患者肺癌組織中表達(dá)增高更加明顯，ANRIL可以作為預(yù)后判斷的獨(dú)立診斷指標(biāo)。敲除ANRIL后在體內(nèi)及體外實(shí)驗(yàn)中NSCLC細(xì)胞增殖受到抑制，且促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡[46]。本文也是通過閱讀此文獻(xiàn)時(shí)收到啟發(fā)，對(duì)ANRIL與膠質(zhì)瘤之間關(guān)系進(jìn)行檢索。此項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)ANRIL的過表達(dá)不能抑制p15在PC9細(xì)胞的表達(dá)，可以抑制P21及KLF2的轉(zhuǎn)錄。有報(bào)道ANRIL具有NSCLC原癌基因的作用[47]。另一項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)在肺癌細(xì)胞中抑制磷脂酶D（PLD）后ANRIL表達(dá)明顯上調(diào)[48]。抑制PLD可以誘導(dǎo)肺癌細(xì)胞凋亡，抑制ANRIL

吉 林 大 學(xué) 博 士 學(xué) 位 論 文因 Ct 值-內(nèi)參基因 Ct 值，△△Ct=待測(cè)基因△Ct-照組樣本△Ct，然后數(shù)行分析，此數(shù)值表示待測(cè)樣本基因表達(dá)量相對(duì)于對(duì)照樣本基因表達(dá)量實(shí)驗(yàn)中我們將膠質(zhì)瘤細(xì)胞與正常膠質(zhì)細(xì)胞相比，得到如下結(jié)果。實(shí)驗(yàn)結(jié)量 RT-PCR 結(jié)果顯示 ANRIL 在膠質(zhì)瘤細(xì)胞中明顯比正常膠質(zhì)細(xì)胞表達(dá)87、U251、SHG-44 膠質(zhì)瘤細(xì)胞系中 ANRIL 表達(dá)較 BT325、A172 細(xì)胞

結(jié)果表明膠質(zhì)瘤組織中 ANRIL 表達(dá)較瘤旁組織（PT）表達(dá)明顯升高。（圖2.2）（P<0.01）。膠質(zhì)瘤Ⅰ級(jí)和Ⅱ級(jí) ANRIL 表達(dá)差別不大，Ⅲ級(jí)和Ⅳ級(jí) ANRIL 表達(dá)差別不大，但是Ⅲ/Ⅳ級(jí)明顯比Ⅰ/Ⅱ級(jí) ANRIL 表達(dá)升高（圖 2.2）（P<0.01），Ⅲ

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 Ya-Kai Huang;Jian-Chun Yu;;Circulating micro RNAs and long non-coding RNAs in gastric cancer diagnosis:An update and review[J];World Journal of Gastroenterology;2015年34期

本文編號(hào)：2778719