【摘要】：目的:研究不同濃度的雄激素受體抑制劑(flutamide)對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖、侵襲的影響。通過(guò)建立雄激素受體(Androgen receptor,AR)基因干擾沉默的膠質(zhì)瘤細(xì)胞株,更加深入的探討AR基因沉默對(duì)體內(nèi)外膠質(zhì)瘤細(xì)胞生物學(xué)活性的影響,并為研究雄激素受體信號(hào)通路對(duì)膠質(zhì)瘤的診療奠定基礎(chǔ)。方法:(1)采用不同濃度的flutamide(低濃度1.0×10~(-8)、中濃度1.0×10~(-7)、高濃度1.0×10~-66 mol/L)作用于膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U251,Real Time-PCR和Western Blot檢測(cè)AR mRNA及AR蛋白的表達(dá)情況;(2)通過(guò)CCK8、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)不同濃度的flutamide對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖、侵襲等生物學(xué)活性的影響;(3)采用慢病毒轉(zhuǎn)染U251膠質(zhì)瘤細(xì)胞,并用嘌呤霉素進(jìn)行不斷篩選,建立穩(wěn)定干擾沉默AR基因的膠質(zhì)瘤細(xì)胞株,并通過(guò)Real Time-PCR和Western Blot檢測(cè)AR mRNA及AR蛋白的表達(dá)情況;(4)采用CCK8、細(xì)胞凋亡、Transwell侵襲、裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)探究AR基因沉默對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖、侵襲、體外成瘤能力等生物學(xué)活性的影響;(5)進(jìn)一步通過(guò)Real Time-PCR、Western Blot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)AR沉默的膠質(zhì)瘤細(xì)胞Bax/Bcl2凋亡相關(guān)基因mRNA及蛋白表達(dá)情況。結(jié)果:(1)在體外膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖、侵襲能力能被AR抑制劑(flutamide)顯著抑制且凋亡增加,與藥物濃度正相關(guān)(P0.05)。(2)通過(guò)嘌呤霉素進(jìn)行不斷篩選一周,得到表達(dá)GFP(green fluorescent protein)熒光的穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株。行Real Time-PCR檢測(cè)顯示,與空白對(duì)照組和空質(zhì)粒組相比,U251-AR組AR mRNA表達(dá)顯著降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),空白對(duì)照組和空質(zhì)粒組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。表明已成功建立穩(wěn)定干擾沉默AR的U251-AR和空質(zhì)粒膠質(zhì)瘤細(xì)胞株。(3)AR基因干擾沉默的U251-AR組膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖、侵襲能力顯著抑制且凋亡增加;U251-AR組異位移植瘤體積、重量均明顯小于空白對(duì)照和空質(zhì)粒組。提示膠質(zhì)瘤細(xì)胞的AR干擾沉默后其成瘤能力明顯降低(P0.05)。(4)與空白對(duì)照組和空質(zhì)粒組相比,U251-AR細(xì)胞促凋亡基因Bax表達(dá)增加,且抑制凋亡基因Bcl2表達(dá)減少,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),空白對(duì)照組和空質(zhì)粒組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:(1)AR抑制劑(flutamide)能明顯降低膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖與侵襲能力,并且誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,AR可能是引起膠質(zhì)瘤發(fā)生發(fā)展的危險(xiǎn)因素。(2)成功建立的AR干擾沉默的膠質(zhì)瘤細(xì)胞株U251-AR,為下一步深入探討AR基因?qū)w內(nèi)外膠質(zhì)瘤細(xì)胞生物學(xué)活性的影響奠定基礎(chǔ)。(3)通過(guò)沉默膠質(zhì)瘤細(xì)胞中的AR基因,膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖侵襲能力降低,細(xì)胞凋亡增加,體外成瘤能力明顯降低。表明AR在調(diào)節(jié)體內(nèi)外膠質(zhì)瘤細(xì)胞生物學(xué)活性方面起到關(guān)鍵作用。(4)U251-AR組促凋亡基因Bax表達(dá)增加,且抑制凋亡基因Bcl2表達(dá)減少,AR可能通過(guò)凋亡基因Bax/Bcl2信號(hào)通路影響膠質(zhì)瘤細(xì)胞的生物學(xué)活性。
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R739.41

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本文編號(hào)：2775459