【摘要】：背景紅核(Red necleus,RN)是錐體外系中很重要的部分,在運(yùn)動(dòng)控制中起關(guān)鍵性作用,通常認(rèn)為,紅核主要調(diào)節(jié)肌緊張和屈肌反射,然而近年來(lái)有研究表明,紅核對(duì)軀體疼痛有調(diào)節(jié)作用,免疫系統(tǒng)中的分子、細(xì)胞在疼痛機(jī)制里起關(guān)鍵作用。因此說(shuō),紅核參與疼痛的調(diào)節(jié),并且通過(guò)不同的神經(jīng)遞質(zhì)和細(xì)胞因子起到促進(jìn)或抑制作用。目的通過(guò)神經(jīng)選擇性損傷(Spared nerve injury,SNI)大鼠模型研究IL-21和IL-21R在選擇性損傷誘導(dǎo)的神經(jīng)性疼痛中的作用機(jī)制。方法實(shí)驗(yàn)用48只200-230g重的SD大鼠(Sprague-Dawley)被分為三組:對(duì)照組,假手術(shù)組和SNI模型組,每組16只大鼠,以上每組再分為非用藥組和用藥組,每組為8只大鼠。成功建立SNI(Spared nerve injury)大鼠模型后一周,處死對(duì)照組、假手術(shù)組和SNI模型組中非用藥實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,提取紅核組織總RNA和總蛋白,分別檢測(cè)紅核中IL-21和IL-21R的mRNA和蛋白水平表達(dá),以及紅核中核因子(nuclear factor-kappa-B,NF-κB),促分裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK),細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶(extracellular-signal regulated kinase,ERK)和c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminnal kinase,JNK)蛋白的表達(dá)。同時(shí)于SNI后一周,將不銹鋼引導(dǎo)套管立體定向植入用藥各組大鼠左側(cè)RN,并將不銹鋼塞插入導(dǎo)向插管并保持在適當(dāng)位置,在導(dǎo)管插入后一周(即在SNI后2周),使用尖端延伸超過(guò)導(dǎo)管末端2.0mm的微量注射器來(lái)使用IL-21的抗體(500ng)。在實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí),將甲苯胺藍(lán)染料注入RN中,對(duì)顯微注射位點(diǎn)進(jìn)行組織學(xué)驗(yàn)證。驗(yàn)證成功后,分別檢測(cè)各組紅核中NF-κB、MAPK、ERK和JNK蛋白的表達(dá)。結(jié)果本研究成功地建立了具有單側(cè)機(jī)械性異常性疼痛的神經(jīng)性疼痛模型。通過(guò)RT-PCR和Western blot檢測(cè)到IL-21和IL-21R以及相關(guān)信號(hào)通路蛋白NF-κB,MAPK,ERK和JNK的表達(dá),與對(duì)照組和假手術(shù)組相比,都顯著升高。向大鼠紅核中注射IL-21的抗體,將IL-21信號(hào)途徑進(jìn)行阻斷后,大鼠紅核中NF-κB,MAPK,ERK和JNK蛋白的表達(dá)均有顯著降低。結(jié)論在SNI神經(jīng)性疼痛模型中,IL-21和IL-21R共同在神經(jīng)性疼痛中起作用;IL-21和IL-21R是通過(guò)NF-κB,MAPK,ERK和JNK信號(hào)途徑對(duì)神經(jīng)性疼痛做出免疫反應(yīng)。
【學(xué)位授予單位】：新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R741
【圖文】：

2.4 SNI 模型大鼠紅核中 IL-21 和 IL-21R 同時(shí)表達(dá)SNI 神經(jīng)性損傷模型建立后，提取各非用藥組大鼠紅核組織總蛋白，用 IL-21 的抗體進(jìn)行免疫共沉淀，將沉淀下來(lái)的蛋白質(zhì)進(jìn)行 IL-21R 的 Western blot 檢測(cè)。如圖 3所示，IL-21 表達(dá)相同的情況下，SNI 組 IL-21R 表達(dá)量最高，而對(duì)照組和假手術(shù)組并沒(méi)有顯示很強(qiáng)的 IL-21R 表達(dá)。結(jié)果表明，在 SNI 神經(jīng)性損傷模型中，IL-21 和 IL-21R相互作用參與了神經(jīng)性疼痛的免疫反應(yīng)（圖 3）。

新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文我們檢測(cè)了紅核中 NF-κB，MAPK，ERK 和 JNK 蛋白的表達(dá)，發(fā)現(xiàn) NF-κB，MAPK，ERK 和 JNK 蛋白均有表達(dá)，且高表達(dá)（如圖 5）。實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明，在 SNI 神經(jīng)性疼痛模型中，IL-21 和 IL-21R 通過(guò) NF-κB，MAPK，ERK 和 JNK 信號(hào)途徑對(duì)神經(jīng)性疼痛做出免疫反應(yīng)。

3 討論3.1 SNI 誘導(dǎo)的機(jī)械性異常性疼痛大鼠模型的應(yīng)用神經(jīng)性疼痛的模型的首次使用是 1994 年開發(fā)的三叉神經(jīng)性疼痛的嚙齒動(dòng)物模[53-54]，同時(shí)用于量化自發(fā)性疼痛的大鼠鬼臉量表（RGS）是一種監(jiān)測(cè)大鼠的神經(jīng)性痛的方法[55]。Li X 等，Zeng XY 等，Wang J 等，Zhang Q 等，Wang ZH 等以及 Ding等的研究均使用 SNI 大鼠模型進(jìn)行了相關(guān)細(xì)胞因子對(duì)神經(jīng)性疼痛免疫反應(yīng)的應(yīng)答制[25, 28-30, 52, 56-57]。Wang HS 等則利用 SNI 模型研究 VGLUT2 在神經(jīng)性疼痛中的作機(jī)制[58]。Sideris A 等利用 SNI 模型來(lái)研究 CB1R 在持續(xù)機(jī)械超敏反應(yīng)中的作用[59Gattlen C 等利用 Sprague Dawley 成年雄性大鼠神經(jīng)性疼痛選擇性損傷模型來(lái)評(píng)估膠質(zhì)細(xì)胞（Iba1），T 淋巴細(xì)胞（CD2）和細(xì)胞毒性 T 淋巴細(xì)胞（CD8）的增殖或蛋白質(zhì)/基因表達(dá)水平[60]。Zhao J 等通過(guò) SNI 模型證明了葛根素可以通過(guò)激活 ER

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 朱其秀;王利華;陳燕;田強(qiáng);張美增;;神經(jīng)調(diào)節(jié)素對(duì)實(shí)驗(yàn)性癡呆大鼠的腦組織IL-21β表達(dá)的影響[J];臨床醫(yī)學(xué)工程;2011年04期

2 王琳 ,韓杰 ,張昱;Alzheimer病病人血清與腦脊液白細(xì)胞介素-1及腫瘤壞死因子水平檢測(cè)的研究[J];哈爾濱醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2003年02期

本文編號(hào)：2775826