【摘要】：研究目的目前腦卒中已成為高致死率和致殘率的疾病之一,因此對于人類的生活及生活質(zhì)量造成嚴(yán)重影響,但目前最有效的治療方式還是前期的溶栓。本實驗使用動物中風(fēng)模型MCAO模型,利用高靈敏度的UPLC-MS質(zhì)譜平臺,研究小鼠腦缺血/再灌注期間損傷的大腦皮層內(nèi)脂質(zhì)的變化,因此本實驗通過脂組學(xué)方法來尋找在小鼠缺血再灌注腦損傷功能恢復(fù)過程中顯著性變化的脂質(zhì)分子并研究其對神經(jīng)元作用活性的影響及作用的分子機制等。研究方法1.建立小鼠MCAO中風(fēng)模型,然后用超高效液相色譜對小鼠大腦皮層進(jìn)行脂組學(xué)分析,篩選出具有顯著性差異的脂質(zhì)分子。2.取胚胎期胎鼠的大腦皮層,用做原代神經(jīng)元的培養(yǎng),并用免疫熒光染色(MAP-2)來鑒定是否為神經(jīng)元。3.將培養(yǎng)的原代神經(jīng)元,接種在96孔板上。用篩選到的脂質(zhì)分子處理原代神經(jīng)元后,再用CCK 8試劑盒,檢測脂質(zhì)分子對神經(jīng)元活力的影響。4.分別購買了幾種抑制細(xì)胞死亡的抑制劑和脂質(zhì)分子共同孵育原代神經(jīng)元,同樣用CCK 8測細(xì)胞活力,探究細(xì)胞死亡的方式。5.將培養(yǎng)的原代神經(jīng)元,接種在培養(yǎng)皿中,然后加入不同濃度的脂質(zhì)分子,檢測細(xì)胞內(nèi)鈣離子信號變化,探究脂質(zhì)分子是否能引起神經(jīng)元興奮性。研究結(jié)果1.建立小鼠MCAO中風(fēng)模型后,然后用超高效液相色譜對小鼠大腦皮層進(jìn)行相對性定量和絕對性定量分析,共篩選到578種脂質(zhì)分子,然后分析各組間差異脂質(zhì),共篩選到84種顯著性差異的脂質(zhì)分子。2.在中風(fēng)中一些顯著性變化的脂質(zhì)分子可以顯著性降低原代神經(jīng)元的活力(脂質(zhì)分子濃度為25μM-50μM時),導(dǎo)致神經(jīng)元死亡。3.對脂質(zhì)分子誘導(dǎo)神經(jīng)元死亡方式的探究,發(fā)現(xiàn)有些細(xì)胞死亡抑制劑可以顯著性恢復(fù)神經(jīng)元的活力,MK-801也能阻斷一些脂質(zhì)分子引起的興奮性毒性。研究結(jié)論小鼠腦缺血再灌注過程中,一些顯著性變化的脂質(zhì)分子在中風(fēng)恢復(fù)過程中起重要的調(diào)節(jié)作用。其中一些脂質(zhì)分子例如磷脂酰膽堿(Phosphatidylcholine)、溶血卵磷脂(Lysophosphatidylcholine)、神經(jīng)酰胺(Ceramides)、磷脂酰乙醇胺(P hosp-hatidylethanolamine)、溶血磷脂酰乙醇胺(Lysophosphatidylethanolamin e)等在中風(fēng)恢復(fù)過程中可誘導(dǎo)小膠質(zhì)細(xì)胞激活,引起炎癥反應(yīng)和神經(jīng)元的興奮性毒性,導(dǎo)致神經(jīng)元死亡。
【學(xué)位授予單位】：哈爾濱工業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R743.3
【圖文】：

哈爾濱工業(yè)大學(xué)工程碩士學(xué)位論文心縫合傷口。小鼠在中動脈缺血再灌注手術(shù)期間，要 直用加熱燈與持小鼠基礎(chǔ)體溫在 37℃左右。同樣，選取條件相同的 c57 雄鼠，在同進(jìn)行假手術(shù)組小鼠模型的建立，假手術(shù)組的小鼠并沒有對其進(jìn)行大腦，僅僅在小鼠頸部進(jìn)行小范圍的開口和正常的縫合。

- 24 -圖 2-2 小鼠缺血再灌注及恢復(fù)期間體溫和體重的變化2.4.2 測定小鼠 MCAO 后行為學(xué)1) 測定小鼠 MCAO 后神經(jīng)功能缺損評分：如下圖 2-3 中，本次試驗共有 n=26 只小鼠進(jìn)行了 MCAO 手術(shù)，另外 n=10 只小鼠進(jìn)行了 Sham 手術(shù)，然后小鼠在手術(shù)清醒后對其進(jìn)行手術(shù)評分：結(jié)果發(fā)現(xiàn)，MCAO手術(shù)組小鼠評分大都在 2 分左右，為中度神經(jīng)功能損傷，由于 MCAO 手術(shù)組小鼠的手術(shù)評分比較均勻，因而神經(jīng)功能的損傷沒有顯著性差異，可用于此實驗后續(xù)的研究；而 Sham 組小鼠并沒有神經(jīng)功能損傷的癥狀，也可用于后續(xù)的對照組的實驗。

哈爾濱工業(yè)大學(xué)工程碩士學(xué)位論文圖 2-3 小鼠 MCAO 后神經(jīng)功能缺損評分行為學(xué)測試：4 中圖所示：小鼠 MCAO 手術(shù)后，其后肢的抓力后 1 天，達(dá)到最小值，然后運動功能逐漸恢，但依舊沒有恢復(fù)到 Sham 組鼠的正常水平。ShamMCAO01234neurologicaldeficits

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 馮亦璞,孫亞丁,陳寶泰,葉剛,曾貴云;小鼠腦缺血后的能量代謝改變和藥物的作用[J];藥學(xué)學(xué)報;1989年02期

2 陶真;趙海蘋;李錦程;段云霞;羅玉敏;;小檗堿促進(jìn)小鼠腦缺血損傷后的修復(fù)作用及其機制研究[J];生命科學(xué)儀器;2017年03期

3 賴泳,李輝,方春生,劉曉波,楊再康;藍(lán)布正對小鼠腦缺血的保護(hù)作用[J];大理學(xué)院學(xué)報(自然科學(xué));2005年05期

4 房紹寬;吳江;周春奎;;喹硫平對小鼠腦缺血后膠質(zhì)細(xì)胞增生及炎癥反應(yīng)的作用[J];中國老年學(xué)雜志;2011年03期

5 盧新華;谷彬;羅金榮;;苦菜總黃酮對小鼠腦缺血缺氧保護(hù)作用的實驗研究[J];時珍國醫(yī)國藥;2007年02期

6 張曉丹;;山楂葉總黃酮對小鼠腦缺血的保護(hù)作用研究[J];江西醫(yī)藥;2009年09期

7 譚艷,于龍順,劉忠武,王星文,任世蘭,趙國舉;賽庚啶對小鼠腦缺血再灌后學(xué)習(xí)記憶行為的影響[J];鄖陽醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2000年01期

8 張曉雙;張恩戶;高國鍇;任永奇;;薯蕷皂苷與冰片配伍對小鼠腦缺血再灌注損傷的影響[J];西部中醫(yī)藥;2011年12期

9 迪麗努爾·沙比托夫;朱毅忠;買爾旦·米吉提;陳希元;;紅花黃色素對小鼠腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用[J];中國中醫(yī)藥信息雜志;2006年02期

10 白海波,萬海同,鄭筱祥;養(yǎng)陰益氣活血沖劑拮抗小鼠腦缺血時血中腎上腺素水平增高的作用[J];中國中醫(yī)急癥;2001年06期

相關(guān)會議論文 前10條

1 蔡斌;林毅;方玲;王檸;;不同缺血時程對國際標(biāo)準(zhǔn)小鼠腦缺血模型腦損傷的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會第十七次全國神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編（下）[C];2014年

2 馬毓;補娟;黨輝;景燕;沙晶;艾山江;李紅燕;朱沂;;抑制磷酸腺苷活化蛋白激酶活性通過神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞對小鼠腦缺血損傷發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用[A];中華醫(yī)學(xué)會第十七次全國神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編（下）[C];2014年

3 李廣意;鄒柯杰;賈舞陽;馮志鵬;;阿魏酸對小鼠腦缺血再灌注神經(jīng)損傷的保護(hù)作用[A];第五屆全國解剖學(xué)技術(shù)學(xué)術(shù)會議論文集[C];2015年

4 陳翰博;;水通道蛋白-4在小鼠腦缺血再灌注損傷早期表達(dá)的研究[A];第七屆全國創(chuàng)傷學(xué)術(shù)會議暨2009海峽兩岸創(chuàng)傷醫(yī)學(xué)論壇論文匯編[C];2009年

5 沈琳輝;繆婕;趙詠桔;;脂聯(lián)素在小鼠腦缺血模型中的促血管新生作用及機制探討[A];中華醫(yī)學(xué)會第十次全國內(nèi)分泌學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2011年

6 楊繼峰;;洛他唑?qū)π∈竽X缺血再灌注損傷的保護(hù)作用及對bcl-2蛋白表達(dá)的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會急診醫(yī)學(xué)分會第十三次全國急診醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)年會大會論文集[C];2010年

7 王斌;白敏;杜聰;侯建平;;梔子、黃芩藥材與標(biāo)準(zhǔn)品對小鼠腦缺血保護(hù)作用及機制研究[A];第十屆全國抗炎免疫藥理學(xué)學(xué)術(shù)會議論文集[C];2010年

8 楊浩鵬;郭中順;寇俊萍;余伯陽;;生脈注射液改善小鼠腦缺血再灌注損傷的作用機制研究[A];全國中藥藥理學(xué)會聯(lián)合會學(xué)術(shù)交流大會論文摘要匯編[C];2012年

9 梁賢凱;王秀杰;;小鼠腦缺血組織中自然殺傷細(xì)胞的浸潤[A];中華醫(yī)學(xué)會急診醫(yī)學(xué)分會第十六次全國急診醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)年會論文集[C];2013年

10 陳翰博;;水通道蛋白-4在小鼠腦缺血再灌注損傷早期表達(dá)的研究[A];《中華急診醫(yī)學(xué)雜志》第八屆組稿會暨急診醫(yī)學(xué)首屆青年論壇論文匯編[C];2009年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前9條

1 蔣英華;內(nèi)分泌調(diào)控因子FGF21改善雄性2型糖尿病小鼠腦缺血預(yù)后的轉(zhuǎn)化研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2019年

2 孫晶;丁酸鈉對小鼠腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用及其機制研究[D];蘇州大學(xué);2016年

3 劉佳;瑞香素對小鼠腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用及機制研究[D];武漢大學(xué);2017年

4 侯紹章;甘草酸二銨對小鼠腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用及機制研究[D];南京中醫(yī)藥大學(xué);2012年

5 唐穎馨;縫隙連接通訊對腦缺血邊緣區(qū)及遠(yuǎn)隔區(qū)神經(jīng)元損傷的影響及機制研究[D];華中科技大學(xué);2009年

6 薛婧;鞘磷脂合成酶2缺乏對小鼠腦缺血再灌注損傷后炎癥反應(yīng)的影響及其機制研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2017年

7 房紹寬;喹硫平對小鼠腦缺血保護(hù)作用的實驗研究[D];吉林大學(xué);2009年

8 宋文英;球狀脂聯(lián)素對糖尿病小鼠腦缺血損傷的保護(hù)作用及其抗凋亡機制研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2013年

9 宋文英;球狀脂聯(lián)素對糖尿病小鼠腦缺血損傷的保護(hù)作用及其抗凋亡機制研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2013年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 司騰霄;小鼠腦缺血再灌注損傷相關(guān)的脂質(zhì)分子對神經(jīng)元的作用及機理[D];哈爾濱工業(yè)大學(xué);2019年

2 劉春龍;長時間禁食改善小鼠腦缺血損傷及其機制研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2016年

3 張靜;甘氨酸對小鼠腦缺血再灌注損傷保護(hù)作用的研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2013年

4 王敏;小鼠腦缺血再灌注后早期免疫炎癥反應(yīng)及白蛋白或氯化鋅的干預(yù)作用[D];天津醫(yī)科大學(xué);2011年

5 楊繼峰;西洛他唑?qū)π∈竽X缺血再灌注損傷的保護(hù)作用及對bcl-2蛋白表達(dá)的影響[D];華中科技大學(xué);2010年

6 董文鵬;白藜蘆醇對小鼠腦缺血再灌注損傷不同階段的保護(hù)機制研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2008年

7 張快;氧化槐定堿對小鼠腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用[D];寧夏醫(yī)科大學(xué);2012年

8 楊麗;重組人核糖核酸酶抑制因子對小鼠腦缺血的抗氧化保護(hù)作用及其抗腫瘤的研究[D];大連醫(yī)科大學(xué);2007年

9 賈薔;小鼠腦缺血模型的優(yōu)化及丹紅注射液抗腦缺血機制研究[D];山東中醫(yī)藥大學(xué);2015年

10 于海龍;香芹酚對小鼠腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用及機制的研究[D];蘇州大學(xué);2013年

本文編號：2771207