【摘要】：目的:證明MLLK3在膠質(zhì)母細(xì)胞瘤中發(fā)揮作用,探討單獨(dú)及聯(lián)合靶向PI3Kβ和MLK3對(duì)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞增殖的影響。方法:首先通過(guò)western blot研究MLK3在GBM組織和細(xì)胞中的表達(dá)情況,通過(guò)siRNA基因沉默技術(shù)研究它對(duì)GBM細(xì)胞遷移和粘附的影響。然后評(píng)價(jià)研PTEN功能缺失對(duì)PI3Kβ和JNK協(xié)同調(diào)控GBM細(xì)胞增殖的影,并且評(píng)估聯(lián)合靶向MLK3和pl10β對(duì)GBM細(xì)胞遷移和黏著斑周轉(zhuǎn)是否存在協(xié)同抑制作用且協(xié)同作用是否強(qiáng)于JNK和PI3Kβ。結(jié)果:MLK3在64.5%的GBM樣本中(31例中有20例陽(yáng)性結(jié)果)蛋白表達(dá)水平提高;其中,MLK3蛋白在8例復(fù)發(fā)的GBM樣本中有7例顯著高表達(dá),且與GBM復(fù)發(fā)相關(guān)。通過(guò)MLK3表達(dá)降低后,GBM細(xì)胞遷移和侵襲能力降低。靶向PI3Kβ和JNK對(duì)過(guò)表達(dá)野生型PTEN的GBM細(xì)胞增殖有較強(qiáng)的協(xié)同抑制作用,而對(duì)PTEN功能缺失的GBM細(xì)胞的抑制作用較弱。同時(shí)聯(lián)合靶向MLK3抑制劑URMC-099和PI3Kβ AZD6482抑制劑比靶向JNK抑制劑和PI3Kβ抑制劑對(duì)GBM細(xì)胞的增殖有更強(qiáng)的協(xié)同作用。結(jié)論:MLK3蛋白表達(dá)與膠質(zhì)母細(xì)胞瘤復(fù)發(fā)相關(guān),且在膠質(zhì)母細(xì)胞瘤遷移及侵襲中發(fā)揮重要作用。聯(lián)合靶向PI3Kβ和MLK3對(duì)GBM細(xì)胞增殖的協(xié)同作用,發(fā)現(xiàn)該協(xié)同作用比聯(lián)合靶向PI3Kβ和JNK更強(qiáng),為后續(xù)研究聯(lián)合靶向PI3Kβ和MLK3抑制GBM細(xì)胞遷移侵襲及其分子機(jī)制提供了可靠的依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R739.4
【圖文】：

與 PI3Kβ對(duì)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞增殖的協(xié)同調(diào)控作用，且 JNK2 在這兩個(gè)亞基中的作用更為重要。圖3.1 誘導(dǎo)表達(dá)野生型PTEN 對(duì)聯(lián)合靶向PI3Kβ 和JNK 協(xié)同抑制膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞 U87.PTEN.WT 增殖的影響。(A) Muristerone A 處理 U87.PTEN.WT 細(xì)胞不同時(shí)間后 PTEN 和磷酸化 Akt 的表達(dá)情況。(B) PTEN 對(duì)聯(lián)合靶向 p110β 和 JNK 協(xié)同抑制膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)細(xì)胞 U87.PTEN.WT 增殖的影響。無(wú)水乙醇作為 Muristerone A處理的陰性對(duì)照，DMSO作為TGX-221和SP600125處理的陰性對(duì)照。(n=3。*: p <0.05;**: p <0.01。)

24圖3.3 MLK3在膠質(zhì)母細(xì)胞瘤組織和細(xì)胞系中的表達(dá)，及應(yīng)用siRNA干擾MLK3的表達(dá)。（A）代表性圖片表示MLK3在膠質(zhì)母細(xì)胞瘤組織樣本中的表達(dá)情況；（B）MLK3蛋白在9種膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系中的表達(dá)情況；（C）灰度分析MLK3在原發(fā)與復(fù)發(fā)GBM組織中的蛋白表達(dá)水平(*: p<0.05)；（D）灰度分析 MLK3 在膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系中的蛋白表達(dá)水平。

26圖3.4 siRNA干擾MLK3的表達(dá)后膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞遷移、粘附和侵襲能力的變化。（A）應(yīng)用siRNA干擾膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系U-87 MG中MLK3的表達(dá)。（B-C）劃痕實(shí)驗(yàn)表明siMLK3顯著降低了U-87 MG和U-118 MG細(xì)胞的遷移能力。（D）U-87 MG和U-118 MG細(xì)胞的粘附能力經(jīng)siMLK3_6處理后顯著升高了。（E-F）siMLK3顯著降低了U-87 MG和U-118MG細(xì)胞的侵襲能力。（n=3; *: p <0.05; **: p <0.01）3.4 聯(lián)合靶向 PI3Kβ 和 MLK3 對(duì)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞增殖的協(xié)同抑制作用。為了研究聯(lián)合靶向MLK3 和PI3Kβ對(duì)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞增殖的協(xié)同抑制作用，我們利用MLK3 抑制劑URMC-099 和PI3Kβ的抑制劑AZD6482 單獨(dú)或聯(lián)合處理膠質(zhì)

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本文編號(hào)：2770508