【摘要】：目的:1.探討癲癇發(fā)作后不同時(shí)間點(diǎn),miR-134表達(dá)的動(dòng)態(tài)變化特點(diǎn)。2.探討mi R-134在癲癇大鼠海馬組織和外周血中動(dòng)態(tài)表達(dá)趨勢(shì)是否具有一致性。3.外周血中miR-134表達(dá)能否作為生物標(biāo)志物深入研究。方法:實(shí)驗(yàn)采用健康成年wistar雌性大鼠,應(yīng)用戊四氮62 mg/kg腹腔注射法制備大鼠癲癇模型,生理鹽水腹腔注射制備對(duì)照組大鼠模型,癲癇組模型均按照Racine分級(jí)達(dá)到癲癇持續(xù)狀態(tài)。按照實(shí)驗(yàn)對(duì)照原則和癲癇發(fā)作后不同時(shí)間點(diǎn)分為11個(gè)實(shí)驗(yàn)組(對(duì)照組、0.5h組、1h組、6h組、12h組、24h組、48h組、72h組、1w組、2w組、4w組),每實(shí)驗(yàn)組隨機(jī)取6只存活鼠進(jìn)入實(shí)驗(yàn)分析。應(yīng)用眼動(dòng)脈取血法取各組大鼠外周血5ml凍存,隨后立即脊椎脫臼后取雙側(cè)海馬凍存,應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)海馬組織、血液中mi R-134的表達(dá)。運(yùn)用SPSS 22.0軟件對(duì)所得各組數(shù)據(jù)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)、獨(dú)立樣本Mann-Whitney U檢驗(yàn)、Pearson相關(guān)系數(shù)分析、Spearman相關(guān)系數(shù)分析、線性回歸顯著水平檢驗(yàn)。P0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果:1.miR-134在癲癇發(fā)作后數(shù)小時(shí)內(nèi)海馬組織和外周血中表達(dá)量均隨時(shí)間推移逐漸增加,72h達(dá)到表達(dá)高峰;隨后表達(dá)量逐漸減少,均低于對(duì)照組表達(dá)量。2.海馬組織和外周血中miR-134表達(dá)量在癲癇發(fā)作期顯著升高,與對(duì)照組相比有顯著差異(海馬組織P=0.037;外周血P=0.042)。發(fā)作間期組海馬組織和外周血中miR-134表達(dá)量與對(duì)照組相比顯著降低(海馬組織P=0.002;外周血P=0.000)。發(fā)作期組海馬組織中miR-134表達(dá)量比發(fā)作間期組顯著升高(P=0.001),外周血中miR-134在發(fā)作期組表達(dá)量比發(fā)作間期組表達(dá)量顯著升高(P=0.001)。發(fā)作期各時(shí)間節(jié)點(diǎn)外周血中miR-134表達(dá)量均較對(duì)照組顯著升高(P0.05);發(fā)作間期各時(shí)間點(diǎn)外周血中miR-134表達(dá)量均較對(duì)照組顯著降低(P0.05)。3.海馬組織和外周血中miR-134表達(dá)量在癲癇發(fā)作后具有趨勢(shì)一致性。癲癇發(fā)作后6h、12h、24h、48h、72h、1w、2w、4w,海馬組織和外周血中miR-134表達(dá)量具有相關(guān)性(P0.05),72小時(shí)組相關(guān)性最強(qiáng)(P=0.000,r=0.986)。在以上時(shí)間點(diǎn),外周血中miR-134表達(dá)量可以反映出海馬組織中miR-134表達(dá)量水平。結(jié)論:1.癲癇發(fā)作后miR-134表達(dá)量逐漸增加,72h達(dá)高峰,發(fā)作間期逐漸低于正常水平。2.海馬組織和外周血中miR-134動(dòng)態(tài)表達(dá)具有趨勢(shì)一致性。3.海馬組織和外周血中miR-134表達(dá)量具有相關(guān)性,癲癇發(fā)作后72h相關(guān)性最強(qiáng),提示外周血中miR-134可作為癇性放電生物標(biāo)志物進(jìn)一步研究。
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R742.1
【圖文】：

搶救無(wú)效死亡，余所有癲癇模型均一次達(dá)到癲癇持續(xù)狀態(tài)。癲癇模型制備成功后，偶可觀察到自發(fā) RacineI-III 級(jí)發(fā)作。3.2 海馬組織與外周血中 miR-134 的表達(dá)用 Thermo NanoDrop 2000 超微量分光光度計(jì)對(duì)所得實(shí)驗(yàn)樣本 RNA 進(jìn)行純度和濃度分析，反應(yīng) RNA 純度的指標(biāo) OD260/280 值均在 1.9-2.0 之間，提示本實(shí)驗(yàn)提取的 RNA 純度較高。新鮮配置 1.2%普通瓊脂糖凝膠電泳，向電泳槽中的1 x MOPS-EDTA Buffer 電泳緩沖液，加入 10ul 樣本 RNA，于 7.5V/ml 的電壓下電泳，在紫外燈下檢查電泳結(jié)果，電泳圖無(wú)雜帶，提示 RNA 無(wú)降解。Retime-qPCR 提示所得 miR-134 和 U6 溶解曲線峰值單一，表明引物的特異性高，擴(kuò)增曲線平滑表明目的基因重復(fù)性好（圖 3.1）。

間期）與對(duì)照組相比顯著降低(P=0.002)；海馬組織中miR-134表達(dá)量在發(fā)作間期比發(fā)作期顯著降低（P=0.001）。提示癲癇發(fā)作期、發(fā)作間期與對(duì)照組海馬組織中miR-134呈差異性表達(dá)，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（表3.3、圖3.2所示）。表3.3 海馬組織中miR-134相對(duì)表達(dá)量變化N miR-134表達(dá)量 P1 P2 P3對(duì)照組 6 1.005 ±0.0480.037 0.002 0.001發(fā)作期組 42 3.966 ±5.194發(fā)作間期組 18 0.722±0.199注：P1為發(fā)作期組與對(duì)照組大鼠海馬組織miR-134表達(dá)量對(duì)比統(tǒng)計(jì)結(jié)果；P2為癲癇大鼠發(fā)作間期組與對(duì)照組海馬組織中miR-134表達(dá)量對(duì)比統(tǒng)計(jì)結(jié)果；P3為發(fā)作期組與發(fā)作間期組大鼠海馬組織miR-134表達(dá)量對(duì)比統(tǒng)計(jì)結(jié)果。P值均由獨(dú)立樣本T檢驗(yàn)得出。

第 3 章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果3.5 外周血與海馬組織中 miR-134 相關(guān)性分析將對(duì)照組和各時(shí)間點(diǎn)癲癇大鼠所得數(shù)據(jù)做成以海馬組織 miR-134 相對(duì)表達(dá)量為 X 軸，外周血 miR-134 相對(duì)表達(dá)量為 Y 軸做散點(diǎn)圖（圖 3.4），對(duì) X 和 Y進(jìn)行 Pearson 秩相關(guān)檢驗(yàn)，P=0.000（表 3.6），線性回歸顯著水平檢驗(yàn) r2=0.956接近 1，提示外周血與海馬組織中 miR-134 表達(dá)量具有明顯的正相關(guān)一致性。

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 王倩;陳陽(yáng)美;郭靖;楊小蘭;謝運(yùn)蘭;;MicroRNA-134/CREB/pCREB通路在癲癇中的表達(dá)及意義[J];中國(guó)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)報(bào);2014年06期

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 王曉爽;癲癇患者外周血miR-134表達(dá)及意義[D];吉林大學(xué);2016年

本文編號(hào)：2766063