【摘要】：目的:本課題擬通過尋找mir-148a的靶基因,驗證mir-148a與靶基因之間的相互作用并研究其對神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞遷移和侵襲能力的影響。方法:1、運用生物信息學預(yù)測軟件TargetScan、miRanda、PicTar、PITA篩選和預(yù)測mir-148a的靶基因;2、運用生物素標記的RNApull down篩選mir-148a的靶基因;3、運用熒光素酶報告基因驗證mir-148a的靶基因;4、運用熒光定量PCR和Western Blot的方法檢測GADD45在mir-148a過表達和抑制表達穩(wěn)定細胞系中的基因和蛋白表達水平;5運用transwell遷移和侵襲實驗、劃痕實驗來驗證mir-148a通過靶向調(diào)控GADD45促進神經(jīng)膠質(zhì)瘤的遷移和侵襲作用。結(jié)果:1、生物信息學預(yù)測軟件TargetScan、miRanda、PicTar、PITA分別預(yù)測mir-148a的靶基因434個、7402個、434個、1847個,根據(jù)預(yù)測網(wǎng)站的評分及同源序列對比和互補,初步預(yù)測MEOX2-1、MEOX2-2、GADD45A-1、GADD45A-2、AG04、DLGAP1 為 mir-148a 的潛在靶基因。2、生物素標記的RNApull down結(jié)果表明,以DNMT1為陽性對照,初步篩選只有GADD45A-2是mir-148a的靶基因。3、熒光素報告基因活性檢測的結(jié)果證實,mir-148a能與GADD45 3'UTR區(qū)結(jié)合,抑制其報告基因的熒光強度,這些結(jié)果確證,miR-148a通過GADD45A基因3'UTR上的該位點來調(diào)控基因的表達,GADD45是mir-148a的靶基因。此外,qRT-PCR和Western Blot實驗的結(jié)果表明,與正常神經(jīng)膠質(zhì)細胞相比,GADD45在神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞系的表達明顯下調(diào),且差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。4、通過構(gòu)建GADD45過表達慢病毒載體(pLent-GADD45),感染神經(jīng)膠質(zhì)瘤U251、U87細胞系,建立了 GADD45過表達穩(wěn)定細胞系。5、利用熒光定量PCR和Western Blot分析,驗證了 mir-148a過表達下調(diào)GADD45基因和蛋白表達,mir-148a抑制表達時結(jié)果相反。這些結(jié)果證明mir-148a對GADD45存在調(diào)控作用。6、構(gòu)建過表達GADD45慢病毒載體(pLent-GADD45),感染神經(jīng)膠質(zhì)瘤U87、U251細胞系后進行transwell遷移和侵襲實驗、劃痕實驗,發(fā)現(xiàn)過表達GADD45減弱U87、U251的遷移和侵襲能力。結(jié)論:1、GADD45 是 mir-148a 的靶基因;2、mir-148a通過靶向調(diào)控GADD45促進神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞的遷移和侵襲。
【學位授予單位】：湖南師范大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R739.4
【圖文】：

邐：邋ＬｏｇＳｃａｉｅ邐Ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ，邋Ｃｅｌｓｉｕｓ逡逑圖１－２：邐ＲＴ－ＰＣＲ的擴增曲線和融解峰。逡逑６０－１邋＊逡逑ｃ邐Ｊ，逡逑0邋＊逡逑＇ｌ逡逑？４0＿邐＿ｒ．逡逑Ｓ－逡逑①邋＊逡逑ＴＯ逡逑芽邋２０－邐［３１，邐＊逡逑＾邐姦ｌ逡逑0N0——Ｍ——Ｍ——Ｍ——Ｍ—逡逑ＨＡ邋１８００邐ＢＴ３２５邐Ｕ２５１邐Ｕ８７邐ＳＷ０３８逡逑圖１－３：邐ｍｉｒ－１４８ａ在神經(jīng)肢質(zhì)瘤細胞系中的表達與神經(jīng)膠質(zhì)細胞ＨＡ１８００比較．？邋＞＜０．０５。逡逑９逡逑

邐碩士學位論文邐逡逑ＤＬＧＡＰ１為ｍｉｒ－１４８ａ的潛在耙基因（見圖２－１）。其中在ＴａｒｇｅｔＳｃａｎ中我們查詢逡逑了邋ＧＡＤＤ４５邋（ＮＭ００１９２４．３）邋３’ＵＴＲ邋處有邋８ｍｅｒ邋大小片段和邋ｍｉｒ－１４８ａ邋結(jié)合（見圖逡逑２－２）。逡逑己驗證個數(shù)逡逑＊

從而與其他成分分離。復合物洗脫后，檢測特定的ＲＮＡ結(jié)合蛋白是否與ＲＮＡ逡逑相互作用。逡逑圖２－３、圖２－４數(shù)據(jù)所示為存在有統(tǒng)計學意義的Ｉｎｐｕｔ值的靶基因，即總ＲＮＡ逡逑中檢測到的ＲＮＡ。ＤＮＭＴ１作為陽性對照，結(jié)果表明了圖示基因中只有逡逑ＧＡＤＤ４５Ａ－２邋是邋ｍｉｒ－１４８ａ邋的靶基因。逡逑ＤＮＭＴ１邋ＭＥＯＸ２－１邋ＭＥＯＸ２－２邐ＡＧ０４邋ＧＡＤＤ４５Ａ－１邋ＧＡＤＤ４５Ａ－２逡逑ｂｐ邋Ｍ／，癌／／＂／＂／＂／＂逡逑＆邋三ｉ逡逑２００—逡逑１Ｃ．：—ｉ邐。邐…、…廠逡逑ＤＬＧＡＰｔ逡逑ｂＰ邋／，／逡逑５００＿ｒ：逡逑４０３邋一ｋ邐：邋？逡逑１００逡逑圖２－３：待測靶基因ＲＮＡ邋ＰＵＬＬ邋ＤＯＷＮ產(chǎn)物的凝膠電泳圖。逡逑ｓ邋－｜逡逑■邋ｃｏｎｌｒｄ逡逑＾邐＊邋ｍｉＦ－ｌ４Ｓａ－３ｐ逡逑ｔ邋６－逡逑％逡逑＾邐４－邐？逡逑ｓ邋Ｓ逡逑量ｄ邋ｉ‘＇氣邐，逡逑□逡逑ｓｅ逡逑ｓ，逡逑０．０－１一＂邐Ｔ邐Ｔ－＊邋邋，邋逡逑圖２－４：以ＤＮＭＴ１為對照，ＧＡＤＤ４５Ａ－２的ｉｎｐｕｔ值有陽性反應(yīng)：＞＜０．０５。逡逑２１逡逑

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 何遠文;;彌散性神經(jīng)膠質(zhì)瘤的臨床診斷[J];深圳中西醫(yī)結(jié)合雜志;2017年10期

2 楊柳;馬芳州;;神經(jīng)膠質(zhì)瘤綜合放化療治療方法研究綜述[J];現(xiàn)代養(yǎng)生;2016年24期

3 楊陽;姜德華;;淺談影響成年神經(jīng)膠質(zhì)瘤患者術(shù)后生存率的相關(guān)因素[J];當代醫(yī)藥論叢;2014年17期

4 張貴升;;顱內(nèi)多發(fā)性神經(jīng)膠質(zhì)瘤的治療分析[J];吉林醫(yī)學;2011年36期

5 田永政;;蜂毒治療神經(jīng)膠質(zhì)瘤一例[J];蜜蜂雜志;2006年07期

6 陳贊 ,楊立莊 ,葉偉;神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞熱休克蛋白抗原肽復合物的研究[J];哈爾濱醫(yī)科大學學報;2003年05期

7 李紅旗;注射蛋氨酸派特掃描對神經(jīng)膠質(zhì)瘤的預(yù)后因素[J];醫(yī)學信息;2002年05期

8 姚培元,只達石,秦進喜;神經(jīng)膠質(zhì)瘤的反義治療研究進展[J];中華神經(jīng)外科雜志;1999年02期

9 ;顱面神經(jīng)膠質(zhì)瘤[J];國外醫(yī)學.耳鼻咽喉科學分冊;1997年02期

10 周文光;李南華;王廷芳;;鼻內(nèi)型神經(jīng)膠質(zhì)瘤一例[J];臨床耳鼻咽喉頭頸外科雜志;1990年02期

相關(guān)會議論文 前10條

1 江華;;量子點標記神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞的相關(guān)研究[A];第十四屆全國腫瘤生物治療大會論文集[C];2015年

2 黃達泉;容小明;彭英;;斑馬魚神經(jīng)膠質(zhì)瘤模型建立及轉(zhuǎn)移機制的研究[A];中華醫(yī)學會第十七次全國神經(jīng)病學學術(shù)會議論文匯編（下）[C];2014年

3 李興起;張勝華;歐陽志鋼;甄永蘇;;力達霉素抑制神經(jīng)膠質(zhì)瘤血管擬態(tài)和促細胞凋亡[A];2009醫(yī)學前沿論壇暨第十一屆全國腫瘤藥理與化療學術(shù)會議論文集[C];2009年

4 付秋平;;腦干神經(jīng)膠質(zhì)瘤的治療及護理[A];全國腫瘤護理學術(shù)交流暨專題講座會議論文匯編[C];2002年

5 陳忠平;張俊平;;神經(jīng)膠質(zhì)瘤的化療[A];中國醫(yī)師協(xié)會神經(jīng)外科醫(yī)師分會首屆全國代表大會論文匯編[C];2005年

6 章鎖江;;神經(jīng)膠質(zhì)瘤遺傳學研究進展[A];第五屆全國生物醫(yī)學體視學學術(shù)會議、第八屆全軍軍事病理學學術(shù)會議、第四屆全軍定量病理學學術(shù)會議論文匯編[C];2002年

7 張麗英;李青;陳廣生;林圣彩;葉菁;司少燕;張豐;;真核表達載體pIRES2-EGFP-Axin的構(gòu)建及其在神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞內(nèi)的表達[A];中華醫(yī)學會病理學分會2005年學術(shù)年會論文匯編[C];2005年

8 吳哠飛;胡宇馳;曹春然;;克瘤丸對人神經(jīng)膠質(zhì)瘤的抑制作用機制研究[A];2015年（第五屆）藥物毒理學年會論文集[C];2015年

9 林秀坤;吳寧;;MicroRNAs在神經(jīng)膠質(zhì)瘤診斷和治療中的作用[A];2011醫(yī)學科學前沿論壇第十二屆全國腫瘤藥理與化療學術(shù)會議論文集[C];2011年

10 湯海峰;易楊華;程光;馬寧;田冶;袁衛(wèi)華;林洪;周杰;張淑瑜;潘敏祥;韓華;邱峰;林厚文;王曉娟;姚新生;;抗神經(jīng)膠質(zhì)瘤——皂苷類抗癌新藥開發(fā)的突破口?[A];中國化學會第八屆天然有機化學學術(shù)研討會論文集[C];2010年

相關(guān)重要報紙文章 前10條

1 毛文波;法成功治療神經(jīng)膠質(zhì)瘤[N];科技日報;2004年

2 通訊員 羅倩　記者 王春;我科學家發(fā)現(xiàn)遏制腫瘤生長的有效代謝物[N];科技日報;2009年

3 記者孫國根;為神經(jīng)膠質(zhì)瘤生長“踩剎車”[N];健康報;2009年

4 通訊員 羅倩　記者 姜澎;為神經(jīng)膠質(zhì)瘤生長踩住“剎車”[N];文匯報;2009年

5 衣曉峰；莊磊;探索神經(jīng)膠質(zhì)瘤治療新途徑[N];中國醫(yī)藥報;2005年

6 王英典;我學者提出神經(jīng)膠質(zhì)瘤新分型系統(tǒng)[N];科技日報;2014年

7 于平;神經(jīng)膠質(zhì)瘤的聯(lián)合療法[N];中國醫(yī)藥報;2004年

8 于海玲;尼妥珠單抗有望成為兒科神經(jīng)膠質(zhì)瘤一線用藥[N];中國醫(yī)藥報;2007年

9 ;納米級氧化鐵－蝎毒素肽靶向治療神經(jīng)膠質(zhì)瘤的實驗研究[N];中國醫(yī)藥報;2003年

10 秦勉;趙世民：破解人體致癌機理[N];北京科技報;2011年

相關(guān)博士學位論文 前10條

1 江濤;ARPP-19,LC3B,P62在神經(jīng)膠質(zhì)瘤中的表達和意義[D];安徽醫(yī)科大學;2016年

2 李興起;力達霉素對神經(jīng)膠質(zhì)瘤抑制作用及聯(lián)合替莫唑胺的協(xié)同作用研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學;2009年

3 李燦輝;青蒿素衍生物治療腦神經(jīng)膠質(zhì)腫瘤的實驗研究[D];廣州中醫(yī)藥大學;2006年

4 付玉;IFN-α基因修飾樹突狀細胞抗神經(jīng)膠質(zhì)瘤及其機制的研究[D];吉林大學;2006年

5 劉冬平;EphrinA1在神經(jīng)膠質(zhì)瘤中的作用及食管癌的蛋白質(zhì)組學研究[D];中國科學院研究生院（上海生命科學研究院）;2007年

6 梁秦川;Basigin/CD147在人神經(jīng)膠質(zhì)瘤侵襲中的作用機制及其反義RNA抑制神經(jīng)膠質(zhì)瘤侵襲的實驗研究[D];第四軍醫(yī)大學;2007年

7 高飛;新的抑癌基因PDCD4在人神經(jīng)膠質(zhì)瘤中的缺失及其機制研究[D];山東大學;2008年

8 張曉輝;冬凌草甲素抑制神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞生長及其機制的實驗研究[D];中國人民解放軍醫(yī)學院;2015年

9 高靜;NECL1蛋白在神經(jīng)膠質(zhì)瘤中表達缺失的表觀遺傳調(diào)控機制[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學;2008年

10 張瑜;MicroRNA-128在神經(jīng)膠質(zhì)瘤中的生物學功能研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學;2009年

相關(guān)碩士學位論文 前10條

1 朱婷;黃連素通過對c-Met和EGFR雙重抑制發(fā)揮抗神經(jīng)膠質(zhì)瘤的作用[D];南方醫(yī)科大學;2015年

2 羅艷紅;MicroRNA-148a通過靶向調(diào)控GADD45促進神經(jīng)膠質(zhì)瘤的遷移和侵襲[D];湖南師范大學;2018年

3 韓新旺;神經(jīng)膠質(zhì)瘤靶向治療的研究進展[D];河北醫(yī)科大學;2018年

4 韓曉正;RBM5在不同級別神經(jīng)膠質(zhì)瘤的表達及其意義[D];河北醫(yī)科大學;2018年

5 虞淑葉;GBP2在神經(jīng)膠質(zhì)瘤中的生物學功能及分子機制研究[D];蘇州大學;2018年

6 張建平;PD-1/PD-L1在神經(jīng)膠質(zhì)瘤中表達及預(yù)后相關(guān)的meta分析[D];蘭州大學;2018年

7 趙麗嬌;腫瘤中SIX1蛋白的互作及ITE抑制神經(jīng)膠質(zhì)瘤侵襲[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學;2018年

8 于震男;CEP55在神經(jīng)膠質(zhì)瘤中的表達及其對膠質(zhì)瘤細胞功能的影響[D];南京醫(yī)科大學;2017年

9 趙雅婷;兩種神經(jīng)膠質(zhì)瘤模型的建立及ITE促進神經(jīng)膠質(zhì)瘤組織中CD8+細胞的浸潤[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學;2017年

10 康丹丹;內(nèi)源性小分子ITE結(jié)合AhR通過FAK及PYK2抑制神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞遷移[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學;2017年

本文編號：2766009