【摘要】：研究背景:中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤是癌癥發(fā)病率和死亡率高的重要起因,特別在兒童和年輕人中,癌癥死亡率分別約為30%和20%。成人腦腫瘤中膠質(zhì)瘤占了24%,也是第二最常見的腦腫瘤。膠質(zhì)瘤的標準治療方法是最大化的手術(shù)切除,并輔助放療和替莫唑胺(TMZ)化療,但膠質(zhì)瘤的關鍵生物特性、耐藥和耐放療等分子機制尚未完全闡述明白,以及腫瘤微環(huán)境的存在增強了腫瘤生存和耐藥等各方面生物特征,所以治療效果及預后卻不樂觀。腫瘤特征之一是分化受限和分化程度失控。通過誘導腫瘤細胞的分化進程并促進細胞分化成熟,因此而失去腫瘤細胞特征和表達良性表型,即誘導分化療法。研究方法:我們通過使用誘導分化藥物苯丁酸鈉(SPB)和全反式維甲酸(ATRA)作用于膠質(zhì)瘤細胞系U87細胞來建立膠質(zhì)瘤細胞誘導分化模型,為進一步研究打下基礎。為了觀察誘導分化之后的膠質(zhì)瘤細胞對腫瘤微環(huán)境中的血管內(nèi)皮細胞時是否具有吸引和促進遷移作用,我們應用微流控芯片技術(shù)來對二者進行共培養(yǎng)。微流控芯片技術(shù)(Microfluidics)具備實現(xiàn)獨立培養(yǎng)細胞的空間同時細胞之間可以實現(xiàn)物質(zhì)交換和信息傳遞的優(yōu)點,我們使用設計獨特的芯片并且使用微流控芯片技術(shù)創(chuàng)造膠質(zhì)瘤細胞和腦靜脈內(nèi)皮細胞的共培養(yǎng)條件,揭示膠質(zhì)瘤細胞對內(nèi)皮細胞的吸引是否與分化程度差相。同時,我們經(jīng)回顧研究發(fā)現(xiàn),作為腦組織中含量最多的成分——脂質(zhì),越來越多的研究表明脂質(zhì)不僅與細胞生物學特性相關,在腫瘤的進展中具備一定的相關性,但細胞膜表面脂質(zhì)組成是否因誘導分化而產(chǎn)生改變,目前仍未被闡明。因此我們利用基質(zhì)輔助激光解吸電離技術(shù)(Matrix-Assisted Laser Desorption Ionization MALDI)直接檢測膠質(zhì)瘤細胞經(jīng)誘導分化前后細胞膜表面脂質(zhì)成分的改變。結(jié)果:經(jīng)過誘導分化藥物治療之后,膠質(zhì)瘤細胞系U87細胞呈現(xiàn)了明顯的生物學特征改變,即兩種誘導分化藥物均能夠使膠質(zhì)瘤細胞增殖率降低,且細胞增殖率隨藥物濃度和作用時間呈現(xiàn)正相關,細胞周期停滯于G1期、胚胎性蛋白表達下降,誘導分化后U87細胞從原先無限增值的狀態(tài)進入凋亡進程,呈現(xiàn)類似正常細胞的細胞進程,實現(xiàn)了誘導分化效應。微流控芯片共培養(yǎng)膠質(zhì)瘤細胞與腦靜脈內(nèi)皮細胞結(jié)果表明,誘導分化藥物SPB作用過的細胞對腦靜脈內(nèi)皮細胞的遷移影響略微減小,ATRA對此響應不明顯。使用PCA將質(zhì)譜數(shù)據(jù)降維至三維進行可視化,做散點圖顯示誘導分化藥物治療后U87細胞膜表面脂質(zhì)成分呈現(xiàn)具有統(tǒng)計學意義的差異。進一步查詢脂質(zhì)質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫并且用MALDI質(zhì)譜儀檢測目標脂質(zhì)的二級結(jié)構(gòu),分析化學信息結(jié)果提示細胞膜表面脂質(zhì)成分與膠質(zhì)瘤分化程度相關。
【學位授予單位】：福建醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R739.4
【圖文】：

22根據(jù)圖 2.3，橫向通道左邊與藥物（ATRA、SPB）誘導分化過的膠質(zhì)瘤細胞系 U87細胞培養(yǎng)通道相連，橫向通道右邊為與無藥物處理的膠質(zhì)瘤細胞系 U87 細胞培養(yǎng)通道相連，中間縱向通道培養(yǎng)的是腦靜脈內(nèi)皮細胞（HBMEC）。在芯片內(nèi)培養(yǎng) 24h之后，celltracker 示蹤情況顯示 ATRA 藥物組未見明顯區(qū)別，SPB 藥物組略微見HBMEC 細胞偏向于藥物未處理組遷移。

而獲得相對準確的物質(zhì)信息。如圖 3.5，三個圈內(nèi)包含的數(shù)字分別表示該實驗組所獲得的具備可檢測二級結(jié)構(gòu)條件的脂質(zhì)分子質(zhì)量，A 表示未使用藥物組與其他兩組相比呈現(xiàn)特異性差異的脂質(zhì)相對分子質(zhì)量有 581、799、952、733；E 表示藥物 SPB 作用細胞后，與其他兩組相比呈現(xiàn)特異性差異的脂質(zhì)相對分子質(zhì)量有 543、556；G 表示藥物 ATRA 作用細胞后，與其他兩組相比呈現(xiàn)特異性差異的脂質(zhì)相對分子質(zhì)量有 952、734、503。三個實驗組都具備共同表達的脂質(zhì)相對分子質(zhì)量即C：495、605、702、759、482。SPB 藥物組與未使用藥物組有共同表達的分子質(zhì)量為 B: 411、626、787；ATRA 藥物組與未使用藥物組有共同表達的分子質(zhì)量為D:551、895、539、798;兩種藥物藥物組有共同 表達的分子質(zhì)量為 F:521。3、解脂質(zhì)質(zhì)譜根據(jù)二級結(jié)構(gòu)片段分子質(zhì)量結(jié)合化學結(jié)構(gòu)式解脂質(zhì)質(zhì)譜得到一下數(shù)據(jù)：分子質(zhì)量 可能脂質(zhì)種類A 組

【參考文獻】

相關期刊論文 前2條

1 Farah Fatima;Muhammad Nawaz;;Stem cell-derived exosomes:roles in stromal remodeling,tumor progression,and cancer immunotherapy[J];Chinese Journal of Cancer;2015年12期

2 胡勝利;楊麗娟;林志雄;王偉;何理盛;康德智;;人腦星形細胞腫瘤CD133和巢蛋白陽性細胞的分布特征[J];中國現(xiàn)代神經(jīng)疾病雜志;2009年05期

本文編號：2765557