【摘要】：第一部分瓦勒氏變性動物模型探索目的:尋找研究瓦勒氏變性的穩(wěn)定的實驗動物模型。方法:對急性周圍神經(jīng)損傷和運動神經(jīng)元病(SOD1G93A小鼠)的周圍神經(jīng)進行形態(tài)學(xué)觀察。結(jié)果:1.急性坐骨神經(jīng)擠壓傷后的形態(tài)學(xué)表現(xiàn),前7天以變性為主,后期以再生為主。2.急性坐骨神經(jīng)擠壓傷模型可以復(fù)制瓦勒氏變性中巨噬細胞招募,血-神經(jīng)屏障受損,髓鞘被吞噬等基本病理變化。3.運動神經(jīng)元病周圍神經(jīng)的類瓦勒氏變性呈現(xiàn)區(qū)域性分布,具體表現(xiàn)為:軸突和施旺細胞變性,巨噬細胞招募,髓鞘結(jié)構(gòu)分解,未見明顯再生軸突萌芽。4.NF-E2相關(guān)因子2(Nrf2)和成纖維細胞生長因子9(FGF9)在急性擠壓傷模型中表達量降低,第二部分和第三部分分別對其進行調(diào)控、觀察,進而加深對NRF2和FGF9在急性擠壓傷模型中的生理病理作用的認知。結(jié)論:急性周圍神經(jīng)擠壓傷可以更好的重復(fù)瓦勒氏變性的過程,是研究瓦勒氏變性的理想模型。第二部分減弱的內(nèi)源性的抗氧化系統(tǒng)調(diào)節(jié)急性周圍神經(jīng)損傷中施旺細胞的可塑性目的:研究轉(zhuǎn)錄Nrf2在急性周圍神經(jīng)損傷中的生理作用。方法:在急性周圍神經(jīng)擠壓傷模型下,以Nrf2基因敲除鼠和Nrf2激動劑體內(nèi)實驗為實驗手段,研究Nrf2對瓦勒氏變性和再生的影響。結(jié)果:1.在急性周圍神經(jīng)損傷中,抗氧化系統(tǒng)被迅速的關(guān)閉,這一過程部分依賴于Nrf2,這一變化誘導(dǎo)了一個短暫的氧化應(yīng)激,然后抗氧化系統(tǒng)在再生過程中緩慢的部分恢復(fù)。2.Nrf2基因敲除促進了施旺細胞分子表型轉(zhuǎn)變和增殖,抑制了修復(fù)性施旺細胞的髓鞘形成和再分化。3.Nrf2激動劑-富馬酸二甲酯,雖然成功的上調(diào)了抗氧化系統(tǒng),但是對再生神經(jīng)的髓鞘化沒有影響。4.Nrf2功能的調(diào)節(jié)能夠?qū)е卵趸瘧?yīng)激水平的改變,但是它使靶向的抗氧化基因和活性氧的水平同時升高或降低。結(jié)論:Nrf2抗氧化系統(tǒng)在受傷的神經(jīng)中被短暫的關(guān)閉,促進了施旺細胞分子表型改變和增殖,它們功能的恢復(fù)對施旺細胞再分化和髓鞘形成是至關(guān)重要的。第三部分FGF9通過抑制施旺細胞去分化和促進巨噬細胞招募改變了瓦勒氏變性和再生過程目的:為了研究FGF9在瓦勒氏變性和神經(jīng)再生中的作用。方法:采用措施在周圍神經(jīng)急性擠壓傷模型中調(diào)控FGF9的含量,進而研究FGF9對瓦勒氏變性和再生的影響,包括:培育FGF9在施旺細胞中特異性敲除的小鼠品系;神經(jīng)內(nèi)注射外源性FGF9蛋白,細胞外調(diào)節(jié)激酶ERK1/2的抑制劑-PD0325901也被用來進一步闡明FGF9激活通過ER K1/2產(chǎn)生的作用。結(jié)果:1.在未損傷神經(jīng)中FGF9在軸突和施旺細胞中都有表達,在急性擠壓傷時表達量降低。2.在施旺細胞中特異性敲除FGF9損害了損傷神經(jīng)的碎片清除能力,最終阻礙神經(jīng)纖維再生。3.施旺細胞中特異性敲除FGF9促進了施旺細胞去分化,通過減少Mc p1,Tnfα,Il1β基因的表達量和血-神經(jīng)屏障的滲漏而延緩巨噬細胞招募。4.外源性FGF9蛋白神經(jīng)內(nèi)注射減緩神經(jīng)纖維變性,抑制施旺細胞去分化,加速巨噬細胞侵入。5.外源性FGF9蛋白能增加ERK1/2磷酸化水平,PD0325901能夠部分逆轉(zhuǎn)外源性FGF9蛋白神經(jīng)內(nèi)注射所引起的P75,Cyclin D1,Mcp1,Tn fα,Il1β,c-Jun改變。結(jié)論:FGF9抑制了施旺細胞去分化,加速了巨噬細胞的招募,外源性FGF9蛋白發(fā)揮作用部分依賴于ERK1/2。
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R745
【圖文】：

圖 1 損傷后不同時間點坐骨神經(jīng)形態(tài)學(xué)變化Fig. 1 Morphology of sciatic nerves at different time-points after injury. (A-D)TEM images of sciatic nerves while uncrushed (A), and at Day 3 (B), Day 7(C), Day 28 (D) after nerve crush. (E-H) TB images of sciatic nerves whileuncrushed (E), and at Day 3 (F), Day 7 (G), Day 28 (H) after nerve crush(bars=20μm).

圖 2 坐骨神經(jīng)損傷前后基本病理觀察thological observation of sciatic nerves before a) MBP immnostaing, and (C) EB staining of uncm distal end on Day 7 of crushed nerves (bars=

21萎縮側(cè)索硬化癥小鼠坐骨神經(jīng)類瓦勒氏變性形orphology observation of nerves from amyotroph- Wallerian-like degeneraiton. (A-B) TB staining otermate and SOD1G93Amice (bar=50μm). (C-D) mages of nerves from end-stage littermate and SOared representative nerve fibers of (F) (for E-J, ba

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本文編號：2746525