發(fā)布時(shí)間：2020-07-08 04:28

【摘要】：目的 應(yīng)用甲基化內(nèi)切酶酶切法檢測(cè)Duchenne肌營養(yǎng)不良(Duchenne muscular dystrophy,DMD)女性攜帶者X染色體失活情況,分析X染色體失活情況與DMD女性攜帶者臨床表型的關(guān)系,探索DMD女性攜帶者不同臨床表型的可能機(jī)制。方法1.收集2011年9月至2017年8月于廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院兒科就診,經(jīng)基因檢測(cè)確診的DMD患者及其攜帶基因突變的女性親屬的臨床資料;根據(jù)肌酸激酶水平將女性攜帶者分為高肌酸激酶組和正常肌酸激酶組。2.提取先證者及女性攜帶者外周血淋巴細(xì)胞DNA并測(cè)量其濃度及純度;所有病例的DNA標(biāo)本先進(jìn)行甲基化敏感性限制性內(nèi)切酶HpaII酶切/非酶切處理,然后擴(kuò)增HUMARA基因片段,2%瓊脂糖凝膠電泳后于化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)下觀察,Image Lab軟件進(jìn)行圖像分析酶切實(shí)驗(yàn)是否成功。3.Fam熒光標(biāo)記引物PCR擴(kuò)增酶切處理后DNA標(biāo)本的HUMARA基因片段,應(yīng)用ABI373自動(dòng)測(cè)序儀進(jìn)行毛細(xì)管電泳分離,熒光標(biāo)記片段經(jīng)Peak Scanner 2.0進(jìn)行分析,辨別失活X染色體及其父/母來源,根據(jù)基因片段熒光峰值計(jì)算X染色體失活比例,≥80%即為傾斜性失活。4.應(yīng)用SPSS 22.0軟件進(jìn)行處理,采用完全隨機(jī)設(shè)計(jì)兩樣本秩和檢驗(yàn)、Spearman等方法分析統(tǒng)計(jì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù),比較DMD女性攜帶者父/母來源X染色體失活、高肌酸激酶組和正常肌酸激酶組的差異,分析肌酸激酶水平與X染色體失活比例的相關(guān)性。P0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果1.本研究共納入38個(gè)DMD家系,包括男性DMD先證者40例,攜帶DMD基因突變的女性攜帶者57例,其中表現(xiàn)為肌酸激酶高的DMD女性攜帶者為36例(63.2%),納入高肌酸激酶組;表現(xiàn)為肌酸激酶正常的DMD女性攜帶者為21例(36.8%),納入正常肌酸激酶組。高肌酸激酶組中肌酸激酶最高值為7012U/L,最低值為183U/L,平均值1072.4U/L。2.DMD先證者及女性攜帶者外周血DNA提取成功(濃度最高值125.8ng/ul,最低值21.1 ng/ul,純度范圍在1.63-2.1之間);所有標(biāo)本酶切實(shí)驗(yàn)成功,即DMD先證者酶切組電泳結(jié)果為無條帶,非酶切組出現(xiàn)一條清晰的條帶,而DMD女性攜帶者酶切組和非酶切組均可見一條條帶,且非酶切組條帶濃度要高于酶切組。3.ABI373自動(dòng)測(cè)序儀毛細(xì)管電泳結(jié)果顯示DMD先證者酶切組無明顯峰值,非酶切組顯示有一個(gè)峰值。DMD女性攜帶者酶切組和非酶切組均顯示有兩個(gè)峰值,其中一個(gè)峰值所在片段大小與非酶切組DMD先證者一致。本研究57例DMD女性攜帶者中30例為母源X染色體失活(52.6%);27例為父源X染色體失活(47.4%)。4.比較DMD女性攜帶者母源X染色體失活組和父源X染色體失活組肌酸激酶水平,結(jié)果顯示Z=-0.176,P=0.860.05,可見母源X染色體失活組和父源X染色體失活組的肌酸激酶水平差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。比較DMD女性攜帶者高肌酸激酶組和正常肌酸激酶組X染色體失活比例,結(jié)果顯示Z=-0.24,P=0.810.05,可見高肌酸激酶組和正常肌酸激酶組的X染色體失活比例差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。分析X染色體失活比例與DMD女性攜帶者肌酸激酶水平的相關(guān)性,結(jié)果顯示P=0.8580.05,可見X染色體失活比例與DMD女性攜帶者肌酸激酶水平不存在相關(guān)性。結(jié)論1.本研究高肌酸激酶表現(xiàn)的DMD女性攜帶者占多數(shù),然而不能單純依靠肌酸激酶水平診斷DMD女性攜帶者身份,最終還是要依靠基因診斷明確遺傳學(xué)身份。2.母源X染色體失活組和父源X染色體失活組的肌酸激酶水平無明顯差異,高肌酸激酶組和正常肌酸激酶組DMD女性攜帶者的X染色體失活比例無明顯差異,且血清肌酸激酶水平與X染色體失活比例無明顯相關(guān)性,可見DMD女性攜帶者失活X染色體來源及X染色體失活比例可能不是造成DMD女性攜帶者臨床表型不同的原因。
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R746.2

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 周建軍;;乙型肝炎病毒表面抗原攜帶者概況分析[J];兵團(tuán)醫(yī)學(xué);2017年02期

2 南鷗;;時(shí)間是命運(yùn)的攜帶者[J];中國詩歌;2018年06期

3 南鷗;;時(shí)間是命運(yùn)的攜帶者[J];詩選刊;2018年04期

4 耿敬芝;;做一個(gè)能安心、安全活動(dòng)的PICC導(dǎo)管攜帶者[J];抗癌之窗;2016年06期

5 YOYOU;;做幸�；虻臄y帶者[J];婚姻與家庭(性情讀本);2017年09期

6 趙炳鑫;;欲望時(shí)代,靈魂的救贖是否可能——讀林恩長篇小說《攜帶者》[J];青春;2017年10期

7 陳森;;抗結(jié)核藥物對(duì)非活動(dòng)性HBsAg攜帶者合并肺結(jié)核患者肝損害的影響[J];廣東醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2011年04期

8 饒和平;邱惠萍;盧偉力;蔣峻梅;;非活動(dòng)性HBsAg攜帶者188例住院相關(guān)性原因分析與健康宣教[J];全科醫(yī)學(xué)臨床與教育;2009年04期

9 楊玲云;劉躍暉;陳慧平;;心理干預(yù)對(duì)青少年HBsAg攜帶者自我接納及應(yīng)對(duì)方式的影響[J];華南國防醫(yī)學(xué)雜志;2009年04期

10 李勁松;楊澤福;楊志宏;;135例HBsAg攜帶者10年B超的追蹤觀察[J];寧夏醫(yī)學(xué)雜志;2007年03期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 胡愛榮;毛聯(lián)鋼;蔣素文;顏華東;胡耀仁;;110例非活動(dòng)性HBsAg攜帶者肝組織的病理學(xué)特征分析[A];全國寄生蟲病高峰論壇暨2016年浙江省熱帶病與寄生蟲病學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2016年

2 邵發(fā)助;但斌;;中西醫(yī)結(jié)合治療無癥狀乙肝病毒表面抗原攜帶者30例臨床報(bào)道[A];首屆江西省中西醫(yī)結(jié)合肝病學(xué)術(shù)研討會(huì)、首屆江西省中西醫(yī)結(jié)合肝病新進(jìn)展學(xué)習(xí)班資料匯編[C];2008年

3 吳邦富;楊江英;周峗;張大維;溫凌;肖間開;王巧瑜;吳偉鴻;張美華;潘潔;彭英宇;楊軍;吳熒;;自體樹突狀細(xì)胞疫苗治療非活動(dòng)性HBsAg攜帶者的初步臨床試驗(yàn)[A];第一屆全國疑難重型肝病大會(huì)、第四屆全國人工肝及血液凈化學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2008年

4 李東;林飛;王潔;刁振宇;張寧媛;孫海翔;;羅氏異位攜帶者胚胎染色體變異分析[A];第十一屆全國遺傳病診斷與產(chǎn)前診斷學(xué)術(shù)交流會(huì)暨第二屆海峽兩岸醫(yī)藥衛(wèi)生交流協(xié)會(huì)遺傳與生殖專業(yè)委員會(huì)年會(huì)論文集[C];2018年

5 張麗華;陳秋征;馬兆榮;;肺結(jié)核合并乙肝病毒表面抗原攜帶者抗結(jié)核治療觀察[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第七次全國感染病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2001年

6 武寧強(qiáng);;HBsAg攜帶者中西醫(yī)結(jié)合治療[A];第一次全國中西醫(yī)結(jié)合傳染病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2006年

7 欒秀坤;;重視預(yù)防HBsAg攜帶者在手術(shù)中的傳播[A];河南省護(hù)理學(xué)會(huì)手術(shù)室護(hù)理學(xué)術(shù)交流暨高級(jí)研修班論文匯編[C];2005年

8 陸畔玲;丁秋蘭;戴菁;王鴻利;王學(xué)鋒;;血友病的攜帶者與產(chǎn)前基因診斷[A];第11次中國實(shí)驗(yàn)血液學(xué)會(huì)議論文匯編[C];2007年

9 魏賢達(dá);梁德生;鄔玲仟;;中國人群脊肌萎縮癥遺傳流行病學(xué)研究與“2+0”型攜帶者風(fēng)險(xiǎn)估計(jì)[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十五次全國醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議暨中國醫(yī)師協(xié)會(huì)醫(yī)學(xué)遺傳醫(yī)師分會(huì)第一屆全國學(xué)術(shù)會(huì)議暨2016年浙江省醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)年會(huì)論文匯編[C];2016年

10 黎燕銀;程融;梁彝順;葉小鷗;;慢性無癥狀乙肝病毒攜帶者的管理[A];中國中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)第十二次全國消化系統(tǒng)疾病學(xué)術(shù)研討會(huì)論文匯編[C];2000年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 江亞平;印度HIV攜帶者人數(shù)2年內(nèi)將飆至第一[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2004年

2 陳雪寒;家有HBsAg攜帶者[N];人民政協(xié)報(bào);2000年

3 毛立軍;科學(xué)與法律拒絕“乙肝歧視”[N];人民政協(xié)報(bào);2009年

4 記者 吳偉農(nóng);美國半數(shù)艾滋病患者病毒有抗藥性[N];新華每日電訊;2001年

5 呂群;艾滋病病毒攜帶者宜多做有氧運(yùn)動(dòng)[N];中國醫(yī)藥報(bào);2001年

6 張?zhí)烊A;艾滋病繼續(xù)在非洲蔓延[N];中國醫(yī)藥報(bào);2003年

7 呂 斌;孩子緣何咬傷自己的手指[N];中國中醫(yī)藥報(bào);2003年

8 本報(bào)記者 高鑄成邋本報(bào)通訊員 李泓;深圳：做不做體檢單位說了算[N];工人日?qǐng)?bào);2008年

9 魏建華;可植入人體的“身份證”[N];人民公安報(bào);2002年

10 錢錚;日新增HIV攜帶者人數(shù)創(chuàng)紀(jì)錄[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2007年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 唐翠蘭;慢性乙型肝炎患者和HBV攜帶者外周血單個(gè)核細(xì)胞差異表達(dá)基因的篩選與驗(yàn)證[D];浙江大學(xué);2006年

2 戚慶煒;應(yīng)用熒光原位雜交技術(shù)診斷基因缺失型D/BMD先證者和攜帶者的研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2000年

3 方定志;Ⅰ.人肝脂酶基因多態(tài)性與血漿脂質(zhì)、載脂蛋白水平的關(guān)聯(lián)性研究�、�.高凝狀態(tài)大鼠肝臟差異表達(dá)基因cDNA文庫的構(gòu)建與初篩[D];四川大學(xué);2003年

4 邢宇鋒;30歲以上慢性HBV攜帶者肝臟組織學(xué)特征及補(bǔ)腎法干預(yù)后的病理變化[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2015年

5 魯艷平;嶺南地區(qū)慢性HBV攜帶者證候特點(diǎn)及及補(bǔ)腎祛濕法對(duì)其干預(yù)的研究[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2015年

6 賀靜;核苷酸剪切修復(fù)基因單核苷酸多態(tài)性與胃癌遺傳易感性的分子流行病學(xué)研究[D];復(fù)旦大學(xué);2013年

7 張?jiān)缕?相互易位攜帶者植入前診斷及早期胚胎染色體分離方式研究[D];復(fù)旦大學(xué);2002年

8 韓筱煦;無脈絡(luò)膜癥的基因篩查與臨床表型分析[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2013年

9 陳英杰;補(bǔ)腎健脾解毒方對(duì)慢性HBV攜帶者免疫耐受的影響研究[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2014年

10 聶睿;HBV在輔助生育技術(shù)中的傳播風(fēng)險(xiǎn)[D];華中科技大學(xué);2011年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 謝彥舒;X染色體失活與DMD女性攜帶者臨床表型關(guān)系的研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2018年

2 胡莉;KIBRA基因多態(tài)性對(duì)健康青年人腦微觀組織結(jié)構(gòu)影響的磁共振研究[D];山東大學(xué);2018年

3 李鑫;芳香化酶基因（CYP19A1）多態(tài)性與糖代謝、脂代謝和超重的相關(guān)性研究[D];寧夏醫(yī)科大學(xué);2018年

4 徐麗;SP-A1，SP-A2和SP-D基因多態(tài)性與放射性肺炎易感性的關(guān)聯(lián)研究[D];川北醫(yī)學(xué)院;2018年

5 孫國棟;社區(qū)人群HBsAg攜帶者自發(fā)性再激活的流行病學(xué)研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2017年

6 張建琴;俄克拉荷馬州囊性纖維化攜帶者篩查及基因測(cè)序分析[D];吉林大學(xué);2015年

7 李美燕;補(bǔ)腎疏肝解毒方對(duì)慢性HBV攜帶者臨床療效的研究[D];廣西中醫(yī)藥大學(xué);2017年

8 劉軍霞;一個(gè)中國LHON大家系中新核修飾因子的發(fā)現(xiàn)與鑒定[D];浙江大學(xué);2015年

9 潘麗;染色體易位攜帶者植入前遺傳學(xué)診斷體系的建立與應(yīng)用[D];中南大學(xué);2007年

10 方明娟;WD攜帶者基因分型與實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)相關(guān)性研究[D];安徽中醫(yī)藥大學(xué);2015年

本文編號(hào)：2746094