【摘要】：目的:探究miR-422a在U251細(xì)胞氧糖剝奪再灌注后對SMOC1及TGF信號通路的影響。方法:隨機(jī)將人神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞瘤株U251分為5組,分別設(shè)為正常對照組,以及氧糖剝奪1小時(shí)后再灌注不同時(shí)間的4組。各組U251細(xì)胞用MTT比色法、流式雙染法檢測細(xì)胞凋亡情況,用Real-time PCR檢測miR-422a與SMOC1的mRNA表達(dá),WB檢測SMOC1的蛋白情況;用雙熒光素酶報(bào)告基因共轉(zhuǎn)染檢測miR-422a對SMOC1-3’UTR的直接調(diào)控作用;分為正常對照組,試劑對照組及miR-422a過表達(dá)組3組,在氧糖剝奪1小時(shí)后再灌注24h時(shí),用MTT比色法測細(xì)胞活性,流式雙染法檢測各組的凋亡率,WB檢測SMOC1、TGF-β1、ALK1/5蛋白的表達(dá)。結(jié)果:1.OGD/R細(xì)胞凋亡的變化:細(xì)胞活性呈先下降再上升的表達(dá)變化,OGD/R24h組的細(xì)胞活性明顯下降,達(dá)到谷值,差異具有顯著性(P0.01);細(xì)胞凋亡率則反之,表現(xiàn)為先上升再降低的變化趨勢,在OGD/R24h達(dá)到峰值(P0.01);2.miR-422a mRNA的表達(dá)變化:OGD/R后miR-422a mRNA的表達(dá)先下調(diào)再上調(diào),OGD/R24h miR-422a mRNA明顯降低,達(dá)到谷值(P0.01);3.SMOC1的表達(dá)變化:SMOC1 mRNA在OGD/R后呈現(xiàn)為先下調(diào)再上調(diào)的變化趨勢,在OGD/R24h達(dá)到谷值(P0.01);SMOC1蛋白表達(dá)變化同mRNA基本一致;4.上調(diào)miR-422a后SMOC1蛋白顯著下降,有顯著性差異(P0.01)。雙熒光素酶報(bào)告基因共轉(zhuǎn)染驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果顯示miR-422a顯著抑制SMOC1(熒光比值為56.71%)。5.miR-422a過表達(dá)組與試劑對照組、正常對照組比,氧糖剝奪再灌注24小時(shí)的miR-422a與SMOC1表達(dá)、細(xì)胞活性以及TGF-β1、ALK1明顯升高(P0.01),ALK5稍升高(P0.05),而細(xì)胞凋亡率明顯降低(P0.01)。結(jié)論:miR-422a可能在氧糖剝奪再灌注過程中發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用,其可能與靶向SMOC1激活TGF-β1/ALK1信號通路有關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R743
【圖文】：

miR-422a 過表達(dá)組。（4）將培養(yǎng)板置于內(nèi)部溫度 37 攝氏度且為飽和濕度、并碳和 95%空氣的培育箱中進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng) 6h 后，小心摒棄含有轉(zhuǎn)基，更替成完全新鮮的培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng) 24-96h 后，繼續(xù)進(jìn)行下2.2.5.3 熒光素酶檢測 miR-422a 和 SMOC1 基因 3’UTR 質(zhì)粒的相

(P>0.05 )；再灌注 12 小時(shí)與正常組比較，細(xì)胞活性明顯下降(P<0.05)；再灌4 小時(shí)細(xì)胞活性明顯下降(P<0.01)，此時(shí)已達(dá)到谷值；再灌注 48 小時(shí)，細(xì)胞較再灌注 24 小時(shí)有所升高，與正常組比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。（見表，表 3-2，圖 3-1，圖 3-2）表 3-1 U251 細(xì)胞 OGD/R 后不同時(shí)間的細(xì)胞活性情況生長時(shí)間 對照組 OGD/R 組0h 1.519±0.023 1.500±0.02512h 1.553±0.076 1.249±0.109*24h 1.563±0.074 0.869±0.086**48h 1.554±0.034 0.986±0.110**注：OD 值，與對照組相比，*：P<0.05，**：P<0.01

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本文編號：2740606