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大蒜素對(duì)大鼠實(shí)驗(yàn)性蛛網(wǎng)膜下腔出血早期腦損傷保護(hù)作用的研究

發(fā)布時(shí)間:2020-07-02 03:15
【摘要】:研究背景:蛛網(wǎng)膜下腔出血(Subarachnoid hemorrhage,SAH)主要由腦動(dòng)脈破裂導(dǎo)致血液流入蛛網(wǎng)膜下腔引起。雖然它在所有中風(fēng)患者中的發(fā)生率僅為5%,卻導(dǎo)致了 35%的死亡率。蛛網(wǎng)膜下腔出血后能夠活下來(lái)的病人通常會(huì)面臨神經(jīng)功能受損和認(rèn)知功能障礙。既往大量研究表明,與腦血管痙攣(cerebral vasospasm,CVS)相比,蛛網(wǎng)膜下腔出血后72小時(shí)內(nèi)發(fā)生的全腦急性損傷-早期腦損傷(early brain injury,EBI)-在不良預(yù)后中起著更為重要的作用。早期腦損傷發(fā)生的機(jī)制包括顱內(nèi)壓(intracranial pressure,ICP)升高、腦血流(cerebral blood flow,CBP)減少和全腦缺血,繼而引起繼發(fā)性損傷,比如炎癥和氧化應(yīng)激,最終導(dǎo)致神經(jīng)細(xì)胞死亡、血腦屏障(blood brain barrier,BBB)破壞、腦水腫(brain edema,BE)形成。中醫(yī)使用大蒜(Garlic)治療各種疾病有著悠久的歷史,同時(shí)大蒜因獨(dú)特的辛辣味被世界各地廣泛用作調(diào)味品。當(dāng)蒜瓣被擠壓時(shí)會(huì)產(chǎn)生大蒜素(Allicin),化學(xué)名為二烯丙基硫代亞磺酸鹽(diallyl thiosulfinate),它的存在是大蒜具有特殊氣味和多種生物活性功能的主要原因。既往研究顯示大蒜素具有多種生物學(xué)功能,包括抗氧化、抗炎,保護(hù)心血管系統(tǒng),抑制血小板聚集和抗菌等功能。針對(duì)大蒜素抗氧化作用的研究表明,大蒜素是一種有效的抗氧化劑,可以抵抗尼古丁引起的氧化損傷。據(jù)報(bào)道,大蒜素對(duì)兔脊髓缺血再灌注損傷,對(duì)大鼠創(chuàng)傷性腦損傷,對(duì)大鼠皮層神經(jīng)元機(jī)械性創(chuàng)傷,對(duì)缺血性腦損傷以及對(duì)谷氨酸誘導(dǎo)的脊髓神經(jīng)元氧化應(yīng)激損傷具有保護(hù)作用。在本研究中,主要探索大蒜素對(duì)大鼠實(shí)驗(yàn)性蛛網(wǎng)膜下腔出血后早期腦損傷的影響。方法:實(shí)驗(yàn)采用250g-300g成年雄性Sprague-Dawley大鼠。將75只大鼠隨機(jī)分配到以下各組:假手術(shù)組(n= 15);SAH組(n = 15);SAH+溶劑組(n= 15);SAH + 30 mg/kg大蒜素組(n = 15);SAH + 70mg/kg大蒜素組(n = 15)。本實(shí)驗(yàn)采用大鼠視交叉前池注血模型。將大蒜素溶于10%(體積/體積,0.9%鹽水)二甲基亞砜(dimethylsulfoxide,DMSO)中備用。造模后30分鐘通過(guò)腹膜內(nèi)注射兩種不同劑量大蒜素(低:30mg/kg;高:70mg/kg),用以檢測(cè)其不同的神經(jīng)保護(hù)作用。假手術(shù)組和SAH +溶劑組腹腔內(nèi)注射等體積的10%二甲基亞砜。造模后24小時(shí)進(jìn)行評(píng)估,評(píng)估內(nèi)容包括神經(jīng)功能缺損、體重減輕、腦水含量、伊文氏藍(lán)(Evans blue,EB)外滲、Western blot、組織病理學(xué)和生化檢測(cè)等。結(jié)果:75只實(shí)驗(yàn)大鼠9只在造模處理后死亡。假手術(shù)組術(shù)后24小時(shí)死亡率為0%(0/15);SAH組死亡率為15.4%(13/2);SAH+溶劑組死亡率為23.1%(13/3);SAH + 30 mg/kg大蒜素組死亡率為16.7%(12/2);SAH + 70 mg/kg大蒜素組死亡率為15.4%(13/2)。SAH+70mg/kg大蒜素組較SAH+30mg/kg大蒜素組在24小時(shí)表現(xiàn)出更好的神經(jīng)功能評(píng)分。與SAH +大蒜素組相比,SAH +溶劑組的前后體重變化存在顯著差異。SAH + 70mg/kg大蒜素組較SAH+ 30mg/kg大蒜素組表現(xiàn)出更少的腦水腫和EB外滲。SAH后24小時(shí)的評(píng)估顯示,SAH+70mg/kg大蒜素組與SAH +30mg/kg大蒜素組相比cleaved caspase-3的表達(dá)被顯著抑制,GSH和SOD水平升高,MDA水平降低,神經(jīng)元變性程度減輕,凋亡神經(jīng)元比例減少。結(jié)論:我們?cè)诖笫髮?shí)驗(yàn)性蛛網(wǎng)膜下腔出血模型中首次證實(shí)大蒜素可通過(guò)抑制SAH后氧化應(yīng)激損傷,減輕腦水腫和血腦屏障功能障礙,減少細(xì)胞凋亡,減輕早期腦損傷,從而改善神經(jīng)功能,這可能會(huì)對(duì)SAH的治療帶來(lái)新的研究方向。
【學(xué)位授予單位】:南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2019
【分類號(hào)】:R743.35
【圖文】:

流程圖,實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì),流程,蛛網(wǎng)膜下腔出血


逡逑組給予等量溶劑進(jìn)行對(duì)照。實(shí)驗(yàn)流程詳見技術(shù)路線(圖2-1)。逡逑AJIicin(i.p.)逡逑Ohr邐30min邐24hr逡逑—t邐§邐?邐?逡逑SAH^^邐Neurological邋Score逡逑Body邋Weight邋Ratio逡逑Brain邋Edema逡逑Evans邋Blue邋Extravasation逡逑Western邋blot逡逑Histological邋Studies逡逑Biochemical邋Estimation逡逑圖2-1實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)流程。完成大鼠實(shí)驗(yàn)性蛛網(wǎng)膜下腔出血模型后30分鐘通過(guò)腹腔注射的方法逡逑分別給予實(shí)驗(yàn)組兩種不同劑量大蒜素。蛛網(wǎng)膜下腔出血24小時(shí)后分別進(jìn)行神經(jīng)功能評(píng)分、逡逑體重變化測(cè)定、腦含水量測(cè)定、伊文氏藍(lán)外滲、Western邋blot、組織學(xué)研究和生化檢測(cè)。逡逑Fig.邋2-1.邋Schematic邋illustration邋of邋experiment邋design.邋Allicin邋was邋given邋intraperitoneally(i.p.)邋in邋2逡逑different邋doses邋in邋30邋min邋after邋SAH.邋The邋neurobehavioral邋score邋and邋body邋weight邋ratio邋were逡逑recorded邋and邋animals邋were邋killed邋for邋brain邋water邋content,邋Evans邋blue邋(EB)邋extravasation.邋Western逡逑blot

大蒜素,蛛網(wǎng)膜下腔出血,神經(jīng)功能,體重變化


為邋16.邋7%邋(12/2)邋;SAH+70mg/kg邋大蒜素組死亡率為邋15.邋4%邋(13/2)。逡逑2.邋2.邋2大蒜素對(duì)神經(jīng)功能和體重的影響逡逑圖2-2顯示了神經(jīng)功能評(píng)分的統(tǒng)計(jì)結(jié)果(圖2-2A)和體重比(圖2-2B)的逡逑統(tǒng)計(jì)學(xué)結(jié)果。SAH+70mg/kg大蒜素組在SAH后24小時(shí)顯示出比SAH組和SAH+溶逡逑劑組更好的神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分。然而,與SAH組和SAH+溶劑組相比,SAH+30mg/kg逡逑大蒜素組沒(méi)有表現(xiàn)出顯著差異。SAH+溶劑組與SAH+大蒜素組相比,體重比可能逡逑存在顯著差異,但SAH后24小時(shí)比較SAH組和SAH+溶劑組沒(méi)有發(fā)現(xiàn)顯著差異。逡逑^6]邐^邋ns邋|邋ns邐B0,00逡逑i邋:l__邋i}邋JIT邋1逡逑圖2-2大蒜素對(duì)大鼠實(shí)驗(yàn)性蛛網(wǎng)膜下腔出血24小時(shí)后神經(jīng)功能和體重變化情況逡逑的影響。A:圖示各實(shí)驗(yàn)組神經(jīng)功能評(píng)分。與SAH組和SAH+溶劑組相比,逡逑-32-逡逑

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