【摘要】：背景缺血性腦卒中涉及多種病理生理學(xué)機制,研究證據(jù)表明炎癥反應(yīng)是缺血性腦損傷的重要發(fā)病機制之一,并且可能為中風治療提供靶點。白介素1受體相關(guān)激酶M(IRAK-M)負調(diào)節(jié)Toll樣受體(TLRs)信號通路,通過對固有免疫反應(yīng)的信號重編程負反饋抑制炎癥反應(yīng)。它在多種感染與疾病的病理生理學(xué)過程中至關(guān)重要,但IRAK-M在腦缺血再灌注中的作用尚不清楚。目的本研究擬探討白介素1受體相關(guān)激酶M在小鼠大腦中動脈阻塞術(shù)后腦損傷中的作用。方法本研究使用大腦中動脈阻塞法(middle cerebral artery occlusion)MCAO誘導(dǎo)C57BL/6小鼠缺血性腦卒中模型,并使用激光多普勒檢測小鼠術(shù)中和術(shù)后的腦血流變化。1)qPCR檢測腦缺血再灌注后分別1小時,8小時,12小時,24小時測腦梗區(qū)IRAK-M的mRNA的表達;2)檢測抑制HIF-1α的表達后IRAK-M的表達情況;3)分別在野生型(WT)、敲除(KO)小鼠上制備MCAO模型,再灌注24小時后比較兩組動物神經(jīng)功能評分和梗死體積的影響。4)干濕重法評估IRAK-M基因敲除后對小鼠術(shù)后腦水腫的影響;5)伊文氏藍(Evans Blue)和免疫組化標記IgG檢測兩組小鼠術(shù)后血腦屏障(blood brain barrier,BBB)的損傷;6)利用定量PCR、蛋白印跡法檢測腦缺血再灌注后兩組小鼠之間基質(zhì)金屬酶和炎癥因子mRNA和蛋白表達情況。結(jié)果1.IRAK-M在腦缺血再灌注后表達升高:(1)腦缺血再灌注損傷后IRAK-M表達上調(diào)qPCR結(jié)果顯示在小鼠腦缺血再灌注后1小時IRAK-M的mRNA表達量升高并且達到最高峰,并且在之后的24小時內(nèi)逐漸降低;(2)腦缺血再灌后1小時注HIF-1α的表達上調(diào)與IRAK-M的表達升高相關(guān)在MCAO造模之前腹腔注射HIF-1α的抑制劑2ME2后使用qPCR檢測IRAK-M的表達下調(diào);2.IRAK-M基因敲除加重小鼠缺血性腦卒中的腦血管組織是損傷的程度:(1)IRAK-M基因敲除加重缺血性腦卒中的神經(jīng)功能評分。與WT小鼠相比,IRAK-M KO小鼠的Bederson評分升高,grip test的評分降低,表現(xiàn)為更嚴重的神經(jīng)功能損傷;(2)與WT小鼠相比,IRAK-M KO鼠和缺血性腦卒中體積和腦水腫體積增加。IRAK-M KO小鼠的缺血性腦卒中體積和水腫百分比較WT小鼠明顯增加;(3)IRAK-M KO鼠較WT小鼠相比有更高的含水量和更高的出血轉(zhuǎn)化發(fā)生率。IRAK-MKO鼠在肉眼和數(shù)據(jù)上均表現(xiàn)較高的腦水腫。IRAK-MKO的出血轉(zhuǎn)化的發(fā)生率明顯高于對照組;(4)與WT小鼠相比IRAK-MKO鼠有更嚴重的血腦屏障的破壞。IRAK-MKO鼠腦組織中有更多的伊文斯藍的滲出。冰凍切片IgG染色發(fā)現(xiàn)KO小鼠腦組織中IgG的染色深度和體積也明顯增加。3.IRAK-M基因敲除小鼠缺血性腦卒中側(cè)的基質(zhì)金屬蛋白酶和炎癥因子表達升高:(1)血腦屏障破壞相關(guān)因子基質(zhì)金屬蛋白酶在IRAK-MKO鼠表達升高。IRAK-M基因敲除后缺血性腦卒中后的4小時和24小時有不同程度的MMP-2和MMP-9的表達上調(diào),可能與血腦屏障破壞加重有關(guān)。(2)IRAK-M基因敲除導(dǎo)致小鼠腦梗死側(cè)腦組織中炎癥因子的表達上調(diào)。IRAK-MKO小鼠梗死側(cè)IL-6、TNF-α、IL-1β、IL-10、iNOS、COX-2 以及NLRP3等炎癥因子表達較WT小鼠明顯升高。(3)IRAK-M基因敲除增強NF-κB信號通路的激活。IRAK-M KO鼠梗死側(cè)的細胞核內(nèi)的P65的蛋白量檢測發(fā)現(xiàn)其表達量明顯高WT鼠梗死側(cè)。結(jié)論1.IRAK-M在小鼠腦缺血再灌注的過程中表達增高,并且IRAK-M的表達增高可以被HIF-1抑制劑2ME2抑制。2.IRAK-M基因敲除通過加重炎癥而增加缺血性腦卒中的體積、加重缺血性腦卒中后的腦水腫和血腦屏障的破壞。
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R743.3
【圖文】：

丨ＲＡＫ－Ｍ表達的誘導(dǎo)。為了研究ＨＩＦ－ｌａ是否是缺血再灌注后誘導(dǎo)丨ＲＡＫ－Ｍ上調(diào)逡逑的誘因，我們在ＭＣＡＯ手術(shù)前抑制ｍＦ－ｌａｍＲＮＡ的表達。結(jié)p}顯示，與賦形逡逑劑組相比，２ＭＥ２顯著抑制腦缺血后１小時的ＨＩＦ－ｌａ以及丨ＲＡＫ－Ｍ表達（圖２－２），逡逑表明增加ＨＩＦ－ｌａ可能與腦血管阻塞和再灌注后ＩＲＡＫ－Ｍ的上調(diào)有關(guān)。逡逑１３逡逑

妒、０邋Ｐ邐）逡逑圖２－１．腦缺血再灌注之后ＩＲＡＫ－Ｍ表達明顯增高．（Ａ）激光多普勒檢測ＭＣＡＯ對小鼠腦血逡逑流（ＣＢＦ）的影響，以與基礎(chǔ)水平的百分比表示。（Ｂ＞采用實時ＲＴ－ＰＣＲ檢測梗死腦半球再灌逡逑注后不同時間點ＩＲＡＫ－Ｍ的相對ｍＲＮＡ水平。所有實驗數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差表示，每組ｎ＝６，逡逑與假手術(shù)組相比，＊尸＜０．０５，ＭＰＣＯ．Ｏｌ。逡逑Ｆｉｇ．２－１邋Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－１邋ｒｅｃｅｐｔｏｒ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ邋ｋｉｎａｓｅ邋（ＩＲＡＫ）－Ｍ邋ｗａｓ邋ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ邋ｕｐｒｅｇｕｌａｔｅｄ逡逑ａｆｔｅｒ邋ｃｅｒｅｂｒａｌ邋ｉｓｃｈｅｍｉａ邋ｒｃｐｅｒｆｕｓｉｏｎ．邋（Ａ）邋Ｃｅｒｅｂｒａｌ邋ｂｌｏｏｄ邋Ｈｏｗ邋（ＣＥＢＦ）邋ｏｆ邋ｍｉｃｅ邋ｓｕｂｊｅｃｔｅｄ邋ｔｏ逡逑ｔＭＣＡＯ邋ｄｅｔｅｃｔｅｄ邋ｂｙ邋ｌａｓｅｒ－Ｄｏｐｐｌｅｒ邋ａｎｄ邋ｓｈｏｗｅｄ邋ａｓ邋ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ邋ｏｆ邋ｂａｓａｌ邋ｌｅｖｅｌ．邋（Ｂ）邋Ｒｅｌａｔｉｖｅ邋ｍＲＮＡ逡逑ｌｅｖｅｌｓ邋ｏｆ邋ＩＲＡＫ－Ｍ邋ｗｅｒｅ邋ｍｅａｓｕｒｅｄ邋ｂｙ邋ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ邋ＲＴ－ＰＣＲ邋ａｔ邋ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ邋ｔｉｍｅ邋ｐｏｉｎｔｓ邋ａｆｔｅｒ邋ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ逡逑ｉｎ邋ｔｈｅ邋ｉｎｆａｒｃｔｅｄ邋ｃｅｒｅｂｒａｌ邋ｈｅｍｉｓｐｈｅｒｅ．邋Ｄａｔａ邋ａｒｅ邋ｐｒｅｓｅｎｔｅｄ邋ａｓ邋ｍｅａｎ邋土邋ＳＤ

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本文編號：2736126