【摘要】：目的:探討背根神經(jīng)節(jié)(Dorsal Root Ganglion,DRG)神經(jīng)元上,內(nèi)源性硫化氫(Hydrogen sulfide,H_2S)調(diào)節(jié)電壓門控鈉通道1.7(Nav1.7)的內(nèi)在機(jī)制,并闡明其在神經(jīng)病理性疼痛疾病過(guò)程中發(fā)揮的作用。方法:本研究以Sprague-Dawley(SD)大鼠為研究對(duì)象,建立神經(jīng)病理性疼痛模型——坐骨神經(jīng)分支選擇性損傷模型(Spared Nerve Injury,SNI),并運(yùn)用免疫熒光技術(shù)和Western blot技術(shù)檢測(cè)造模前后L_4-L_6 DRG神經(jīng)元上,內(nèi)源性H_2S合成酶——胱硫醚β-合成酶(Cystathionineβ-Synthetase,CBS)和Nav1.7蛋白表達(dá)變化。運(yùn)用Western blot技術(shù)檢測(cè)阻斷劑對(duì)L_4-L_6 DRG神經(jīng)元中CBS,MEK/ERK,磷酸化MEK/磷酸化ERK(pMEK/pERK)和Nav1.7蛋白表達(dá)的影響。運(yùn)用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)檢測(cè)L_4-L_6 DRG神經(jīng)元興奮性指標(biāo)在造模和給予阻斷劑前后的變化。運(yùn)用Hargreave’s實(shí)驗(yàn)和丙酮實(shí)驗(yàn)檢測(cè)大鼠造模及給予阻斷劑前后的傷害性行為變化。結(jié)果:(1)免疫熒光和結(jié)果顯示,與Sham組相比,SNI+Vehicle組在造模后第7天,第14天和第21天DRG神經(jīng)元中CBS和Nav1.7的表達(dá)均增加(p0.05,n=6)。(2)Western blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,與Sham組相比,SNI+Vehicle組在造模后第7天,第14天和第21天DRG神經(jīng)元中CBS和Nav1.7的表達(dá)均增加(p0.05,n=6),并且在造模后第21天最明顯。(3)CBS阻斷劑AOAA可抑制SNI造模誘導(dǎo)的CBS,pMEK1/2,pERK1/2和Nav1.7蛋白表達(dá)的增加(p0.05,n=6),而Nav1.7特異性阻斷劑PF-04856264不能抑制SNI誘導(dǎo)的CBS,pMEK,pERK和Nav1.7蛋白表達(dá)增加(p0.05,n=6)。此外,MEK阻斷劑U0126能抑制SNI誘導(dǎo)的pMEK,pERK和Nav1.7蛋白表達(dá)的增加(p0.05,n=6),但不能抑制SNI造模誘導(dǎo)的CBS增加(p0.05,n=6)。(4)膜片鉗實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,SNI造模后DRG神經(jīng)元上動(dòng)作電位基強(qiáng)度降低且動(dòng)作電位頻數(shù)增加(p0.001,n=8)。(5)運(yùn)用阻斷劑AOAA(p0.001,n=8),U0126(p0.001,n=8)和PF-04856264(p0.001,n=8)均可顯著抑制SNI造模引起的動(dòng)作電位基強(qiáng)度降低和動(dòng)作電位頻數(shù)的增加。(6)行為學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,SNI造模后各組間熱刺激縮足潛伏期沒有顯著差異(F=0.130,p=0.9410.05,n=6)。此外,與Sham組相比,SNI+Vehicle組中冷刺激抬足時(shí)間顯著增加(F=924.429,p0.001,n=6)。給予CBS阻斷劑AOAA(F=64.280,p0.001,n=6),MEK阻斷劑U0126(F=46.196,p0.001,n=6)和Nav1.7特異性阻斷劑PF-04856264(F=24.021,p0.01,n=6)后,抬足時(shí)間均顯著降低。結(jié)論:內(nèi)源性H_2S激活MEK/ERK信號(hào)通路,上調(diào)Nav1.7通道從而參與神經(jīng)病理性疼痛的發(fā)生,Nav1.7通道有望成為神經(jīng)病理性疼痛疾病的治療靶點(diǎn)。
【學(xué)位授予單位】：石河子大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R741
【圖文】：

大鼠坐骨神經(jīng)周圍解剖結(jié)構(gòu)示意圖

倒置相差顯微鏡鏡下的DRG神經(jīng)元Figure2.InvertedphasecontrastmicroscopyofDRGneurons

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 蘆碧含;張文雯;李麗;馬克濤;司軍強(qiáng);;炎癥痛模型大鼠背根神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元?jiǎng)幼麟娢桓淖僛J];中國(guó)疼痛醫(yī)學(xué)雜志;2015年09期

本文編號(hào)：2732022