發(fā)布時(shí)間：2020-06-27 20:19

【摘要】：目的探究載脂蛋白E(ApoE)對(duì)髓鞘抗原誘導(dǎo)免疫后的的小鼠脾臟淋巴細(xì)胞腫瘤壞死因子α(TNF-α)、白介素-17(IL-17)以及基質(zhì)金屬蛋白酶-9(MMP-9)、基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制劑-1(TIMP-1)表達(dá)的影響。方法用0.01mol/L的PBS緩沖溶液將少突膠質(zhì)細(xì)胞糖蛋白(MOG35-55)稀釋至2mg/ml,與等量的含4mg/ml熱滅活結(jié)核菌素(H37Ra)的完全弗氏佐劑充分混勻,在冰上使用全玻璃注射器抽打制備成油包水乳劑抗原。在同源的ApoE基因缺失型(ApoE-/-)和野生型(WT)型的C57BL/6J成年期雌性小鼠背部皮下多點(diǎn)注射已制備的MOG35-55乳劑抗原(0.2ml/只)。免疫當(dāng)天、免疫后48h給每只小鼠腹腔各注射一次百日咳毒素(200ng/次/只)。免疫誘導(dǎo)后第7d取小鼠脾臟,分離提取小鼠脾臟淋巴細(xì)胞并進(jìn)行體外培養(yǎng),隨機(jī)將兩種小鼠中提取的淋巴細(xì)胞分為四組,即ApoE-/-實(shí)驗(yàn)組(E-ApoE-/-)、WT實(shí)驗(yàn)組(E-WT)、ApoE-/-對(duì)照組(C-ApoE-/-)、WT對(duì)照組(C-WT)。用25μg/ml的MOG35-55刺激兩實(shí)驗(yàn)組(E-ApoE-/-組和E-WT組)的淋巴細(xì)胞,兩對(duì)照組淋巴細(xì)胞(C-ApoE-/-組和C-WT組)給予等量生理鹽水進(jìn)行處理,24小時(shí)后,分別離心并收集各組淋巴細(xì)胞培養(yǎng)上清液。采用酶聯(lián)免疫吸吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)測(cè)定各組細(xì)胞分泌腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白細(xì)胞介素-17(IL-17)、基質(zhì)金屬蛋白酶-9(MMP-9)、基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制劑-1(TIMP-1)的濃度變化情況并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果(1)ApoE-/-小鼠和WT小鼠被髓鞘抗原免疫誘導(dǎo)后,其脾臟淋巴細(xì)胞(C-Apo E-/-組和C-WT組)均能分泌TNF-α、IL-17、MMP-9,ApoE-/-小鼠(C-ApoE-/-組)相對(duì)于WT小鼠(C-WT組)脾臟淋巴細(xì)胞TNF-α、IL-17、MMP-9分泌的量增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);(2)體外用髓鞘抗原MOG35-55單獨(dú)刺激兩種小鼠脾臟淋巴細(xì)胞后,兩實(shí)驗(yàn)組(E-ApoE-/-組和E-WT組)淋巴細(xì)胞TNF-α、IL-17、MMP-9的濃度相對(duì)于兩對(duì)照組(CApoE-/-組和C-WT)明顯升高,且E-ApoE-/-組較E-WT組濃度升高更明顯,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);(3)免疫誘導(dǎo)和體外用MOG35-55刺激各組小鼠脾臟淋巴細(xì)胞后,均能表達(dá)TIMP-1,但各組小鼠脾臟淋巴細(xì)胞TIMP-1的濃度未見(jiàn)明顯差別,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論髓鞘抗原刺激小鼠脾臟淋巴細(xì)胞可以使其表達(dá)炎癥因子TNF-α、IL-17和基質(zhì)金屬蛋白酶-9(MMP-9)、基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑-1(TIMP-1);ApoE缺乏可以使脾臟淋巴細(xì)胞分泌的炎癥因子TNF-α、IL-17和基質(zhì)金屬蛋白酶-9(MMP-9)明顯增加,進(jìn)而可能影響血腦屏障的完整性,但ApoE缺乏對(duì)小鼠脾臟淋巴細(xì)胞TIMP-1表達(dá)的量無(wú)明顯影響。ApoE、炎癥因子、基質(zhì)金屬蛋白酶-9三者之間的關(guān)系可以作為對(duì)諸如多發(fā)性硬化等免疫介導(dǎo)的炎性脫髓鞘疾病中血腦屏障損傷機(jī)制研究及其治療策略研究的切入點(diǎn)。
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R744.51
【圖文】：

2015 級(jí)碩士研究生學(xué)位論文 載脂蛋白 E 對(duì)小鼠脾臟淋巴細(xì)胞 TNF-α、IL-17、MMP-9、TIMP-1 表達(dá)的結(jié)果1. 各組脾臟淋巴細(xì)胞 TNF-α、IL-17 表達(dá)情況比較見(jiàn)圖 1（A、B），C-ApoE-/-組淋巴細(xì)胞 TNF-α、IL-17 的濃度較 C-W的濃度升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）； E-ApoE-/-組和 E-WT 組淋細(xì)胞 TNF-α、IL-17 濃度分別與對(duì)照組相比，其濃度均明顯升高，差異有計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與 E-WT 組相比，E-ApoE-/-組 TNF-α、IL-17 的濃明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

臟淋巴細(xì)胞培養(yǎng)液 MMP-9 濃度的比較omparison of MMP-9 concentrations in spleen lymphocyte cultur脾臟淋巴細(xì)胞 TIMP-1 表達(dá)情況比較，對(duì)四組測(cè)定結(jié)果進(jìn)行兩兩比較，各組小鼠脾臟淋巴細(xì)見(jiàn)明顯差異，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前4條

1 鄭明華;唐玉蘭;韋俊杰;梁培霄;陶敏;韋云飛;;載脂蛋白E擬肽對(duì)實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎小鼠腦脊髓CD4~+、CD8~+ T淋巴細(xì)胞表達(dá)的影響[J];臨床神經(jīng)病學(xué)雜志;2013年03期

2 楊帆;楾光濤;李濤;;多發(fā)性硬化相關(guān)T細(xì)胞免疫機(jī)制的研究進(jìn)展[J];免疫學(xué)雜志;2013年05期

3 韋俊杰;鄭明華;梁培霄;陶敏;唐玉蘭;;載脂蛋白E擬肽對(duì)EAE小鼠的髓鞘和軸突損傷的影響[J];中風(fēng)與神經(jīng)疾病雜志;2012年10期

4 彭鏡;尹飛;曾衛(wèi)民;甘娜;張紅媛;;腫瘤壞死因子α對(duì)體外血腦屏障模型通透性的影響(英文)[J];中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù);2007年36期

本文編號(hào)：2732054