【摘要】：背景與目的腦出血(intracerebral hemorrhage,ICH)是指非外傷性腦實質(zhì)出血,在我國約占全部腦卒中的20%-30%,發(fā)病1月內(nèi)的病死率可高達40%,且存活者多遺留有明顯的神經(jīng)功能障礙,給患者家庭及社會帶來了沉重的負擔,嚴重的危害人類健康。目前對腦出血的治療尚缺乏有效的手段,因此深入研究腦出血的發(fā)病機制、尋找腦出血有效的治療靶點至關(guān)重要。炎癥反應(yīng)在腦出血二次損傷過程中具有重要作用,小膠質(zhì)細胞與浸潤至血腫周圍的巨噬細胞等表面的Toll樣受體家族可能對腦出血相關(guān)炎癥反應(yīng)具有重要的調(diào)控作用,可能會成為腦出血治療的潛在靶點。因此本課題擬通過給予外源性TLR4(Toll-like receptor 4,Toll樣受體4)拮抗劑研究拮抗TLR4的作用對腦出血小鼠相關(guān)炎癥反應(yīng)、腦損傷程度與神經(jīng)功能的影響,論證能否通過調(diào)控TLR4相關(guān)的炎癥反應(yīng)達到治療腦出血的目的,為腦出血的治療研究提供更多基礎(chǔ)理論支持。方法1實驗動物與分組:無特定病原體(SPF)級C57BL/6雄性小鼠,8-10月齡,體質(zhì)量30-35g,共128只,按照隨機數(shù)字表分為4組:(1)假手術(shù)+溶劑對照組(sham+vehicle,n=32),術(shù)前于相同時間腹腔注射等量無菌生理鹽水;(2)假手術(shù)+TAK-242組(sham+TAK-242,n=32),術(shù)前腹腔注射TAK-242;(3)腦出血+溶劑對照組(ICH+vehicle,n=32),術(shù)前腹腔注射等量生理鹽水,術(shù)中向紋狀體注射0.5ul含有0.075U的VII型膠原酶;(4)腦出血+TAK-242組(ICH+TAK-242,n=32),術(shù)前腹腔注射TAK-242。2小鼠腦出血模型的制作:采用立體定位注射法向左側(cè)尾狀核注射0.075U VII型膠原酶,尾狀核定位為:前囟前0.6mm,向左2.0mm,進針深度3.2mm。術(shù)后神經(jīng)功能缺損評分4分為模型失敗,排除實驗。假手術(shù)組與腦出血組操作相同,但微量注射器只進針不注膠原酶。3TLR4拮抗劑的配制與使用:將10mg TAK-242粉末溶于1ml DMSO(二甲基亞砜)配成母液并分裝保存于-80℃冰箱,用前用無菌生理鹽水稀釋至1ug/ul,于術(shù)前一周隔天腹腔注射一次,共三次,劑量為3mg/Kg體重。溶劑對照組在相同時間點腹腔注射等體積無菌生理鹽水。4實驗觀察指標:(1)急性期腦部組織形態(tài)指標:Luxol Fast Blue/Cresyl Viol et、FJB染色分別檢測腦出血3天血腫體積大小、神經(jīng)元變性程度(n=8/group)。(2)分子生物學(xué)指標:腦出血術(shù)后第1、3、7、14天用ELISA試劑盒檢測血清中IL-10、IL-23濃度。(3)遠期腦組織形態(tài)與行為學(xué)評價:Luxol Fast Blue/Cr esyl Violet染色檢測腦出血后28天腦組織殘余病灶、腦萎縮程度、腦白質(zhì)損傷程度,行為學(xué)檢測腦出血第1、3、7、14、28天檢測神經(jīng)功能評分(NDS)、前肢放置實驗、轉(zhuǎn)角實驗以評價神經(jīng)功能,并在此過程中記錄各組小鼠肛溫及存活情況。5統(tǒng)計學(xué)方法:使用SPSS21.0、Graphpad Prism5軟件進行統(tǒng)計分析,定量資料用均數(shù)±標準差(?x±s)表示,用t檢驗進行兩組間差異性比較,用單因素方差分析、非參數(shù)檢驗進行多組間差異性比較,然后用Bonferroni或Dunn’s進行多重兩兩比較。兩組間小鼠死亡率的比較用χ~2檢驗進行。P0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果1 TLR4拮抗劑干預(yù)顯著減輕了ICH急性期的腦損傷程度。溶劑對照組與TLR4拮抗劑干預(yù)組在腦出血3天均有腦組織損傷和FJB陽性細胞,但與溶劑對照組相比,TLR4拮抗劑干預(yù)組腦出血3d的血腫體積較小、FJB陽性細胞數(shù)較少,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(n=8/group,P=0.015)。2 TLR4拮抗劑顯著減輕腦出血小鼠遠期腦損傷程度并促進遠期神經(jīng)功能恢復(fù)。溶劑對照組與TLR4干預(yù)組在腦出血28天時均有不同程度的腦萎縮、腦白質(zhì)損傷及大小不同的殘余病灶,但與溶劑對照組相比,TLR4拮抗劑干預(yù)組在腦出血后28天殘余病灶較小(n=8/group,P=0.012)、腦白質(zhì)損傷程度較輕(n=8/group,P=0.012)、腦萎縮程度低于前者(n=8/group,P0.001),差異均有統(tǒng)計學(xué)意義。各組小鼠在腦出血后均有不同程度的神經(jīng)功能缺損。與溶劑對照組相比,從腦出血后第1~28天,TLR4拮抗劑干預(yù)組NDS評分低、右前肢放置百分比高、左轉(zhuǎn)率低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(術(shù)后第1~28天,4組間NDS評分的H值分別為50.18、49.93、50.82、52.89、58.77,P值均0.001,n=12-14/group;4組間前肢放置百分比H值分別為54.28、22.85、26.16、26.16、41.04,n=12-14/group,P值均0.001;4組間轉(zhuǎn)角實驗的Kruskal-Wallis檢驗統(tǒng)計值H分別為:47.26、44.35、39.66、40.35,n=12-14/group,P值均0.001)。3TLR4拮抗劑對腦出血后炎癥因子的影響。與溶劑對照組相比,TLR4拮抗劑可上調(diào)腦出血后早期血清中IL-10含量,在第1、3、7天差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(4組間差異性比較的F值分別為9.229、18.039、5.657,P值分別為0.001、0.001、0.008,n=5/group),但在第14天差異無統(tǒng)計學(xué)意義(F=-4.882,P=0.633,n=5/group)。TLR4拮抗劑干預(yù)組血清IL-23含量稍高,但與溶劑對照組相比,僅第7天差異有統(tǒng)計學(xué)意義(第1、3、7、14天多組間差異性比較的H值分別為1.743、0.141、9.629、2.229,P值分別為0.627、0.987、0.022、0.526,n=5/group)。結(jié)論1 TLR4拮抗劑能夠顯著減輕小鼠腦出血急性期與遠期的腦損傷程度,并具有促進遠期神經(jīng)功能恢復(fù)的作用。2 TLR4拮抗劑能夠影響腦出血小鼠外周血中炎癥因子的表達,其神經(jīng)保護作用的機制可能與對腦出血相關(guān)炎癥反應(yīng)的調(diào)節(jié)有關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R743.34
【圖文】：

結(jié)果.1 動物死亡率及肛溫比較.1.1 動物死亡率sham+vehicle 組及 sham+TAK-242 組小鼠無死亡，ICH+vehicle 組小鼠只，ICH+ TAK-242 組小鼠死 3 只，死亡原因為模型損傷及麻醉過量。溶組（12.5%，4/32）與 TAK-242 干預(yù)組小鼠死亡率（9.4%，3/32）相比較無統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=0.0，P＞0.05）。.1.2 TLR4 拮抗劑對腦出血小鼠肛溫的影響量取并記錄小鼠術(shù)前、術(shù)后 1、3、7、14、28 天的肛溫。

圖 2.2 TLR4 拮抗劑減輕腦出血急性期腦損傷體積A 圖為腦出血 3 天腦組織 50um 切片的 Luxol Fast Blue/Cresyl Violet 染色，用于檢測腦損傷體積。其中 a、b、c、d 圖分別為 sham+vehicle 組、sham+TAK-242組、ICH+vehicle 組、ICH+TAK-242 組，未被染色、黑色曲線圈中部分為腦損傷，圖中標尺為 500um。sham+vehicle 與 sham+TAK-242 組腦組織完整，Luxol FastBlue/Cresyl Violet 染色均勻；ICH+ vehicle 與 ICH+TAK-242 組均有腦組織損傷，但 TLR4 拮抗劑干預(yù)組腦損傷體積明顯小于溶劑對照組，即 TLR4 拮抗劑能夠顯著減輕腦出血 3d 的血腫體積。ICH+vehicle 與 ICH+TAK-242 組腦出血 3 天腦損傷體積的統(tǒng)計結(jié)果用箱線圖表示（箱線圖中間的水平線代表中位數(shù)，箱線圖外上下兩條線分別代表最大值與最小值），用 Mann-Whitney U 檢驗進行兩組間差異性比較（B），與溶劑對照組相比，TLR4 拮抗劑干預(yù)組的腦出血 3 天血腫體積較小，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（scale bar=500um, n=8/group, U=4.0, P=0.015＜0.05，“*”表示與 ICH+vehicle 組相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義）。

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 李欣;柴晶美;楊阿龍;馬怡軒;周麗雅;;上中下通用痛風湯對痛風性關(guān)節(jié)炎模型TLR4信號通路的影響[J];長春中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報;2018年01期

2 賴沛龍;王玉連;翁建宇;杜欣;;TLR4炎癥通路與慢性移植物抗宿主病合并干眼癥的相關(guān)性[J];實用醫(yī)學(xué)雜志;2016年24期

3 路芳;鄔進輝;;TLR4在晚發(fā)型新生兒敗血癥患兒群體中的表達與監(jiān)測價值[J];海南醫(yī)學(xué);2017年03期

4 孫佳斌;李曉光;逄德志;張金波;謝偉裕;鄭佳音;王茉琳;;TLR4在原發(fā)性高尿酸血癥患者外周血單個核細胞中的表達[J];黑龍江醫(yī)藥科學(xué);2017年01期

5 鐘曉;王嶺;徐翔;楊陳麗;孫麗;;大動脈粥樣硬化型腦梗死患者TLR4基因多態(tài)性觀察[J];山東醫(yī)藥;2017年15期

6 楊以琳;潘競鏘;譚淑珍;鄭琳穎;黃楨;叢龍玲;;白芍總苷對非酒精性脂肪性肝病大鼠肝組織網(wǎng)膜素、TLR4表達的影響[J];中藥藥理與臨床;2017年03期

7 賴曾珍;徐志紅;;TLR4受體基因多態(tài)性與子宮內(nèi)膜異位癥相關(guān)性探討[J];標記免疫分析與臨床;2017年06期

8 劉寧;王薇;張蕊;韓慧蓉;;富馬酸氯馬斯汀在肺缺血/再灌注損傷中對TLR4表達的影響[J];實用醫(yī)學(xué)雜志;2016年18期

9 馮新富;范偉;柳楊;龔毅;候炬;;非酒精性脂肪性肝炎大鼠肝臟TLR4的表達[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2015年02期

10 張鑫;劉曉玲;王興興;蘇娟;王榮;;軟脂酸對腎小管上皮細胞TLR4表達的影響[J];中國現(xiàn)代醫(yī)生;2014年09期

相關(guān)會議論文 前10條

1 高豐光;王巖巖;胡純芳;李娟;游翔;;甘露糖受體及TLR4信號通路在乙酰膽堿N型受體調(diào)控樹突狀細胞交叉提呈中的作用[A];第十一屆全國免疫學(xué)學(xué)術(shù)大會摘要匯編[C];2016年

2 梁艷;楊再興;秦保東;周琳;仲人前;;TLR4通路誘導(dǎo)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化在原發(fā)性膽汁性肝硬化中的作用研究[A];第十屆全國免疫學(xué)學(xué)術(shù)大會匯編[C];2015年

3 尹曉琳;劉穎;馬翠卿;姚智燕;楊麗娟;魏林;;尿路感染患者TLR4基因多態(tài)性和表達水平的臨床研究[A];河北省免疫學(xué)會第六次免疫學(xué)大會資料匯編[C];2010年

4 楊關(guān)根;裘建明;;結(jié)直腸癌TLR4單核苷酸多態(tài)性的研究[A];2011年浙江省肛腸外科學(xué)術(shù)大會暨結(jié)直腸肛門疾病診治新進展學(xué)習(xí)班論文匯編[C];2011年

5 牟海波;林茂芳;岑洪;黃河;;轉(zhuǎn)化生長因子β1抑制樹突狀細胞的成熟及下調(diào)TLR4的表達[A];浙江省免疫學(xué)會第五次學(xué)術(shù)研討會論文匯編[C];2004年

6 張輝;李昂;段美麗;;大黃素抑制人臍靜脈內(nèi)皮細胞TLR4及ICAM-1的表達[A];2012中國中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會急救醫(yī)學(xué)專業(yè)委員會學(xué)術(shù)年會論文集[C];2012年

7 李秀秀;方敬愛;孫艷艷;張曉東;劉文媛;常沁濤;王蕊花;王月香;李慧;劉婷;范彥君;楊素云;胡春艷;;益腎膠囊對糖尿病腎病大鼠模型腎組織TLR4表達的影響[A];第十一屆全國中西醫(yī)結(jié)合腎臟病學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2010年

8 尹曉琳;陳磊;劉穎;楊建嶺;馬翠卿;姚智燕;楊麗娟;魏林;;黃芪多糖通過增加TLR4表達增強膀胱上皮細胞的固有免疫反應(yīng)[A];河北省免疫學(xué)會第六次免疫學(xué)大會資料匯編[C];2010年

9 陳逢;劉玉蘭;李權(quán);朱惠玲;侯永清;易丹;陳洪波;;TLR4信號通路關(guān)鍵基因在斷奶仔豬不同組織中的mRNA表達[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會動物營養(yǎng)學(xué)分會第十一次全國動物營養(yǎng)學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2012年

10 林昌松;梁江;劉清平;徐強;林云斌;;斷藤益母湯對人類風濕關(guān)節(jié)炎滑膜成纖維細胞增殖和TLR4表達的影響[A];第17次全國風濕病學(xué)學(xué)術(shù)會議論文集[C];2012年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 彭歡;TLR4信號通路在膽囊癌中的表達及其作用機制的初步研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2011年

2 耿紅蓮;TLR4介導(dǎo)氧化型低密度脂蛋白致動脈粥樣硬化作用的研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2006年

3 朱海濤;TLR4在創(chuàng)傷性腦損傷急性炎癥損傷中的作用機制及姜黃素的保護效應(yīng)研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2016年

4 李真玉;TLR4基因沉默對兔頸動脈粥樣硬化斑塊血管生及細胞凋亡的影響及機制探討[D];天津醫(yī)科大學(xué);2015年

5 黃潔;TLR4受體在糖尿病大鼠冠狀動脈功能變化中的作用及機制[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2010年

6 陳鋒;抗TLR4納米抗體制備及其對革蘭陰性菌膿毒癥大鼠模型的作用研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2016年

7 谷有全;TLR4在帕金森病小鼠中腦的表達及其對炎癥介質(zhì)釋放的影響[D];南方醫(yī)科大學(xué);2014年

8 張碧云;TLR4啟動子遺傳變異及環(huán)境因素交互與復(fù)發(fā)性流產(chǎn)易感性[D];暨南大學(xué);2011年

9 王李莉;TLR4在肝細胞癌中表達活化后對細胞增殖的影響及其相關(guān)機制研究[D];復(fù)旦大學(xué);2011年

10 華鋒;纖溶酶原激活抑制物-1對急性肺損傷小鼠TLR4信號途徑的影響[D];復(fù)旦大學(xué);2010年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 朱麗;TLR4拮抗劑對腦出血小鼠的神經(jīng)保護作用[D];鄭州大學(xué);2018年

2 楊海霞;TLR4、MyD88、iNOS的表達對前列腺癌發(fā)生、轉(zhuǎn)移的影響[D];蘭州大學(xué);2018年

3 黃文亞;芍藥苷抑制TLR4介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)保護小鼠肝缺血再灌注損傷[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2017年

4 袁穎琳;黃芩苷納米脂質(zhì)體抑制TLR4信號通路減輕小鼠非酒精性脂肪肝病[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2017年

5 袁俊輝;阿魏酸下調(diào)CYP 2E1和抑制TLR4介導(dǎo)的炎癥減輕對乙酰氨基酚誘導(dǎo)的肝毒性[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2017年

6 馬莉;芝麻素抑制TLR4信號活化減輕脂多糖/D-半乳糖胺誘導(dǎo)的小鼠暴發(fā)性肝衰竭[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2015年

7 張沛;TLR4受體介導(dǎo)的殼寡糖對巨噬細胞激活機制的研究[D];中國海洋大學(xué);2013年

8 周若宇;TLR4基因單核苷酸多態(tài)與云南漢族人群系統(tǒng)性紅斑狼瘡相關(guān)性研究[D];云南大學(xué);2010年

9 景雪峰;腦缺血預(yù)處理對大鼠局灶性腦缺血后TLR4表達的影響[D];中國醫(yī)科大學(xué);2010年

10 吳明;高容量血液濾過對膿毒癥休克犬肺TLR4的影響[D];南昌大學(xué);2008年

本文編號：2731148