發(fā)布時間：2020-06-21 21:43

【摘要】：目的:探討強(qiáng)制性運動療法(CIMT)對腦缺血后大鼠認(rèn)知功能恢復(fù)的影響,以及其對腦缺血大鼠海馬齒狀回(DG)、CA1及CA3區(qū)沉默信息調(diào)節(jié)因子1(SIRT1)和腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)表達(dá)情況的影響,從而闡明CIMT影響腦缺血后大鼠認(rèn)知功能可能的作用機(jī)制。方法:成年雄性Wistar大鼠隨機(jī)分為3組:假手術(shù)組(SHAM組)、缺血組(ISC組)、缺血后給予CIMT組(ISC+CIMT組)。使用立體定位儀將內(nèi)皮素(ET-1)注射到大鼠大腦三位點制作大鼠局灶性腦缺血模型,SHAM組在相同的位點注射等量的生理鹽水。ISC+CIMT組大鼠在局灶性腦缺血后1周通過使用石膏繃帶將大鼠大腦梗死灶同側(cè)上肢同軀干固定以限制健側(cè)肢體的使用制作CIMT模型,并持續(xù)3周。腦缺血術(shù)后30-32天采用水迷宮行為學(xué)測試檢測大鼠腦缺血后認(rèn)知水平的改變以及CIMT對腦血后大鼠認(rèn)知功能的影響,連續(xù)進(jìn)行3天。行為學(xué)測試結(jié)束后,在大鼠腦缺血術(shù)后33天殺鼠取腦固定、脫水、包埋后制作冰凍腦切片。應(yīng)用免疫熒光染色方法以及用激光共聚焦顯微鏡及其成像系統(tǒng)觀測各組大鼠海馬DG、CA1及CA3區(qū)SIRT1和BDNF的表達(dá)情況。結(jié)果:各組大鼠水迷宮定位航行試驗的逃避潛伏期具有顯著的組間差異[F(2,21)=11.80,P0.01],ISC組大鼠的逃避潛伏期較SHAM組明顯增加(P0.01),ISC+CIMT組大鼠的逃避潛伏期較ISC組明顯減低(P0.05)。水迷宮空間探索試驗的結(jié)果提示ISC組大鼠在60秒內(nèi)穿越平臺所在位置的次數(shù)較SHAM組大鼠明顯減少(P0.01),ISC+CIMT組大鼠穿越平臺所在位置的次數(shù)較ISC組顯著增加(P0.01)。免疫熒光染色結(jié)果提示CIMT顯著增加了SIRT1在腦缺血后大鼠海馬DG區(qū)(P0.01)和CA1區(qū)(P0.05)的表達(dá)。SIRT1在腦缺血后大鼠海馬CA3區(qū)的表達(dá)以及BDNF在海馬各區(qū)的表達(dá)在各組大鼠間無顯著統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。結(jié)論:CIMT能夠顯著促進(jìn)腦缺血后大鼠的認(rèn)知功能恢復(fù)。CIMT可能是通過增加腦缺血后大鼠海馬區(qū)域SIRT1的表達(dá),但并非通過SIRT1-BDNF這一通路來改善腦缺血后大鼠的認(rèn)知功能。
【學(xué)位授予單位】：中國醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R743
【圖文】：

根據(jù)大鼠狀態(tài)調(diào)節(jié)異氟烷給藥濃度，維持其濃度范圍 0.5-1%。大鼠頭部備消毒，沿中線剪開皮膚，剝?nèi)テは陆M織露出顱骨，在注藥點用鉆頭直徑為 電鉆鉆開顱骨和硬腦膜以暴露腦表面。參考之前的實驗[30]，采用無菌鹽水T-1 稀釋成 0.5ug/ul，使用微量注射器將 ET-1 以 0.5ul/min 的速度注入以下三點, （AP 表明以前囟為中心向前方，ML 表明以前囟為中心向側(cè)方，DV以前囟為中心向下方）①AP=+0.7 mm，ML=+2.2 mm，DV=-2.0mm；②+2.3mm ， ML=+2.5mm ， DV=-2.3mm ； ③ AP=+0.7mm ， ML=+3.8mm ，=-5.8mm，制作大腦運動皮層及紋狀體區(qū)域的局灶性腦梗死。每點注藥 2μl，共 6μl。每注藥 1ul 后中間停留 1min。當(dāng)每點藥物注射結(jié)束時，需將注藥針留在大腦針道內(nèi) 3min，之后再將針頭緩慢拔出。注藥完畢后再次碘伏消毒縫合切口。ET-1 注射結(jié)束后約 3h 大鼠基本已清醒。將大鼠提尾倒懸，若其右側(cè)上肢向胸前屈曲或是大鼠行走時軀體向右側(cè)傾倒或者向右側(cè)轉(zhuǎn)圈，并且癥狀超過 24 小時，則可判定大鼠腦缺血模型制作成功[30]。

立體定位法向大鼠顱內(nèi)注射 ET-1 制備腦缺血模型。3.2 大鼠腦缺血后 CIMT 模型參照以往實驗[30]，腦缺血術(shù)后1周開始將大鼠上部軀干及梗死病灶同側(cè)前靠胸骨置于自然回縮姿勢，采用石膏繃帶進(jìn)行固定，以此來限制大鼠健側(cè)前活動，建立CIMT模型，持續(xù)3周。CIMT組的大鼠強(qiáng)制性地通過受損的肢體進(jìn)食、行走等自由活動而不進(jìn)行日常訓(xùn)練活動。每天檢查大鼠石膏繃帶以及肢體狀態(tài)。若繃帶脫落，在大鼠吸入異氟烷麻醉狀態(tài)下再次重新綁定。若大體由于繃帶過緊導(dǎo)致肢體壓迫水腫，應(yīng)立即將繃帶解除24小時，待水腫消除次綁定。所有的石膏繃帶在行為學(xué)測試前48小時摘除，以使大鼠在測試前得復(fù)。3.3 水迷宮實驗

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本文編號：2724685