【摘要】：帕金森病(Parkinson’s disease,PD)是繼阿爾茨海默病之后第二常見(jiàn)的神經(jīng)退化性性疾病,中老年人多發(fā)。PD與年齡因素相關(guān),發(fā)病率隨著人的年齡增長(zhǎng)而升高。流行病學(xué)調(diào)查研究顯示,PD全球患病率約為0.3%,65歲以上患病率約為2%,85歲以上老年人群患病率約為5%。在PD的患病人群中,按照其致病機(jī)制,可分為遺傳性和散發(fā)性,遺傳性PD只占5%—10%,非遺傳性PD即散發(fā)性PD達(dá)90%的,至今PD的病因尚不明確。PD典型臨床癥狀包括靜止性震顫、肌僵直、運(yùn)動(dòng)遲緩和姿勢(shì)平衡障礙等。PD給患者家庭及社會(huì)帶來(lái)很大負(fù)擔(dān),目前現(xiàn)有藥物和手術(shù)治療非常有限,只能部分改善臨床癥狀,不能延緩PD疾病的進(jìn)展,PD癥狀會(huì)隨逐漸加重,直至喪失運(yùn)動(dòng)功能,患者生活不能自理,嚴(yán)重影響了生活質(zhì)量,最終患者會(huì)因諸多并發(fā)癥而離世。隨著社會(huì)老齡化人口的增高,帕金森病的發(fā)病率也逐年增高,將成為21世紀(jì)威脅人類生命的最嚴(yán)重疾病之一。PD的經(jīng)典病理改變主要是中腦黑質(zhì)致密部含有黑色素的多巴胺能神經(jīng)元(dopaminergic neurons,DN)選擇性變性、缺失以及殘存的神經(jīng)元內(nèi)以α-突觸核蛋白(α-Synuclein,α-Syn)為主要成分的路易小體(Lewy bodies,LB)形成。魚藤酮是一種常見(jiàn)的線粒體復(fù)合物I抑制劑,被廣泛應(yīng)用于制備環(huán)境毒素PD模型。目前認(rèn)為α-Syn寡聚體的細(xì)胞毒性作用是導(dǎo)致DN變性、缺失的重要原因,但其中具體生物學(xué)機(jī)制尚不完全清楚。本研究準(zhǔn)備經(jīng)低劑量魚藤酮持續(xù)灌胃構(gòu)建PD小鼠模型,以期能進(jìn)一步研究α-Syn寡聚體導(dǎo)致DN變性丟失的可能生物學(xué)機(jī)制。目的:通過(guò)魚藤酮持續(xù)灌胃處理構(gòu)建出帕金森病小鼠模型,以此研究α-突觸核蛋白寡聚體的毒性作用機(jī)制。方法:將48只老年雄性C57小鼠隨機(jī)分為魚藤酮組和對(duì)照組,每組24只,魚藤酮組灌注0.01 mL/g魚藤酮氯仿混合溶液,對(duì)照組灌注同體積的氯仿混合溶液,均連續(xù)灌胃12周。于灌胃前、后取小鼠中腦,透射電鏡觀察中腦黑質(zhì)神經(jīng)元超微結(jié)構(gòu),免疫組化染色觀察黑質(zhì)部位酪氨酸羥化酶(tyrosine hydroxylase,TH)陽(yáng)性細(xì)胞密度,行蛋白質(zhì)印跡實(shí)驗(yàn)檢測(cè)α-Syn表達(dá)水平,檢測(cè)腦組織中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-PX)和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量。結(jié)果:灌胃12周后,透射電鏡顯示魚藤酮組小鼠黑質(zhì)部可見(jiàn)線粒體、高爾基體不規(guī)則腫脹。免疫組化染色顯示魚藤酮組中TH陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量較對(duì)照組明顯減少(P0.05)。Western blot顯示魚藤酮組中腦α-Syn的表達(dá)較對(duì)照組明顯增多(P0.05)。魚藤酮組SOD、GSH-PX含量較對(duì)照組明顯下降(P0.05),MDA含量較對(duì)照組顯著增多(P0.05)。結(jié)論:小劑量魚藤酮持續(xù)灌胃可在腦內(nèi)誘發(fā)形成α-Syn寡聚體,α-Syn寡聚體可能經(jīng)氧化應(yīng)激途徑導(dǎo)致多巴胺神經(jīng)元損傷。
【學(xué)位授予單位】：長(zhǎng)江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R742.5
【圖文】：

應(yīng)時(shí)間 5 min，待測(cè)樣本蛋白濃度 mgprot/L）。析7.0 軟件處理數(shù)據(jù)。符合正態(tài)分布以及方差齊性的比較采用獨(dú)立樣本均數(shù) t 檢驗(yàn)；P＜0.05 為差異有3 結(jié)果小鼠行為異常鼠在灌胃7周左右時(shí)，開(kāi)始出現(xiàn)震顫、爬行緩慢、自外界刺激反應(yīng)遲鈍等癥狀。直至魚藤酮灌胃12周數(shù)量隨著時(shí)間延長(zhǎng)不斷增加，且癥狀更明顯。而小鼠黑質(zhì)病變示，灌胃 12 周后對(duì)照組黑質(zhì)部胞內(nèi)細(xì)胞器未見(jiàn)腫的線粒體、高爾基體均可見(jiàn)明顯不規(guī)則腫脹，見(jiàn)圖

第二章 研究報(bào)告酮導(dǎo)致多巴胺能神經(jīng)元變性缺失組織化學(xué)染色顯示，灌胃前，魚藤酮組和對(duì)照組小鼠中腦黑別為 25.15±1.63、24.70±1.69，兩者并無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P=，魚藤酮組和對(duì)照組小鼠中腦黑質(zhì)處 TH 陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)分別為 2.17，魚藤酮組較對(duì)照組明顯減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P =0.00

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