【摘要】：本實(shí)驗(yàn)以S100A9蛋白和星形膠質(zhì)細(xì)胞為原材料,采用CCK-8法檢測不同濃度S100A9對星形膠質(zhì)細(xì)胞的增殖抑制效應(yīng)以及檢測FPS-ZM1、TAK-242對S100A9作用于星形膠質(zhì)細(xì)胞后的保護(hù)作用;應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡變化;采用ELISA法檢測S100A9作用于細(xì)胞后上清液中IL-1、IL-6和TNF-α的水平;使用Western blotting檢測細(xì)胞表達(dá)JNK、P38-MAPK、Bcl-2蛋白濃度水平的變化。研究發(fā)現(xiàn),與對照組相比,0.5mg/m LS100A9作用24h后,星形膠質(zhì)細(xì)胞出現(xiàn)顯著的增殖抑制效應(yīng),且凋亡率顯著增高(p0.01)。S100A9+TAK-242組、S100A9+FPS-ZM1+TAK-242組作用24 h后細(xì)胞增殖抑制顯著降低且凋亡率顯著降低(p0.01),S100A9+FPS-ZM1組作用后凋亡率與S100A9組無顯著差異(p0.05)。與對照組相比,S100A9單獨(dú)作用24h后星形膠質(zhì)細(xì)胞分泌IL-1、IL-6和TNF-α顯著增加(p0.01),S100A9+FPS-ZM1組、S100A9+TAK-242組、S100A9+FPS-ZM1+TAK-242組,上述因子無明顯變化。與對照組相比,S100A9組JNK、P38-MAPK蛋白濃度升高,而Bcl-2蛋白濃度降低;S100A9+TAK-242組、S100A9+FPS-ZM1+TAK-242組JNK、P38-MAPK蛋白濃度均降低,Bcl-2蛋白濃度升高(p0.05);S100A9+FPS-ZM1組3種蛋白濃度變化與S100A9組無明顯差異。綜上表明,S100A9可能通過上調(diào)JNK、P38-MAPK及下調(diào)Bcl-2蛋白表達(dá)導(dǎo)致細(xì)胞凋亡從而抑制其增殖。TLR-4受體的特異性抑制劑TAK-242減輕了S100A9促凋亡作用,表明S100A9可能通過結(jié)合星形膠質(zhì)細(xì)胞膜上TLR-4受體促進(jìn)凋亡作用。S100A9通過結(jié)合細(xì)胞膜上TLR-4受體和RAGE受體刺激細(xì)胞炎性因子產(chǎn)生增多。
【圖文】：

<0.01)(圖4)。圖2GFAP免疫熒光鑒定星形膠質(zhì)細(xì)胞注:A,B,C:GFAP免疫熒光實(shí)驗(yàn)組;A:DAPI染核;B:GFAP抗體染胞質(zhì);C:AB的組合;D,E,F:PBS對照組;D:DAPI染核;E:PBS染胞質(zhì);F:D,E的組合(100滋m)Figure2IdentificationofastrocytesbyGFAPimmunofluorescenceNote:A,B,C:GFAPimmunofluorescenceassaygroup;A:DAPIstaining;B:GFAPantibodiesstainedcytoplasm;C:CombinatorialgraphsofAandB;D,E,F:PBScontrolgroup;D:DAPIstaining;E:PBSstainedcytoplasm;F:CombinatorialgraphsofDandE(100滋m)圖3S100A9對星形膠質(zhì)細(xì)胞抑制率的測定注:0,0.1mg/mL,0.5mg/mLS100A9分別作用星形膠質(zhì)細(xì)胞12h,24h,48h;*:p<0.05,**:p<0.01Figure3DeterminationofastrocyteinhibitionratebyS100A9Note:0,0.1mg/mLand0.5mg/mLS100A9actedonastrocytesfor12hours,24hoursand48hoursrespectively;*:p<0.05,**:p<0.01圖4FPS-ZM1,TAK-242與S100A9共同作用對星形膠質(zhì)細(xì)胞抑制率測定注:*:對照組與S100A9組相比,#:S100A9垣FPS-ZM1組,S100A9垣TAK-242組,S100A9垣FPS-ZM1垣TAK-242組與S100A9組對比;**:p<0.01,##:p<0.01Figure4DeterminationofastrocyteinhibitionbyFPS-ZM1,TAK-242andS100A9Note:*:OnbehalfofthecontrolgroupcomparedwiththeS100A9group,#:OnbehalfoftheS100A9垣FPS-ZM1group,S100A9垣TAK-242group,S100A9垣FPS-ZM1垣TAK-242group-comparedwiththeS100A9group;**:p<0.01,##:p<0.01圖1重組pET28a-S100A9測序峰Figure1RecombinantpET28a-S100A9sequencingpeakmap3654

staining;B:GFAPantibodiesstainedcytoplasm;C:CombinatorialgraphsofAandB;D,E,F:PBScontrolgroup;D:DAPIstaining;E:PBSstainedcytoplasm;F:CombinatorialgraphsofDandE(100滋m)圖3S100A9對星形膠質(zhì)細(xì)胞抑制率的測定注:0,0.1mg/mL,0.5mg/mLS100A9分別作用星形膠質(zhì)細(xì)胞12h,24h,48h;*:p<0.05,**:p<0.01Figure3DeterminationofastrocyteinhibitionratebyS100A9Note:0,0.1mg/mLand0.5mg/mLS100A9actedonastrocytesfor12hours,24hoursand48hoursrespectively;*:p<0.05,**:p<0.01圖4FPS-ZM1,TAK-242與S100A9共同作用對星形膠質(zhì)細(xì)胞抑制率測定注:*:對照組與S100A9組相比,#:S100A9垣FPS-ZM1組,S100A9垣TAK-242組,S100A9垣FPS-ZM1垣TAK-242組與S100A9組對比;**:p<0.01,##:p<0.01Figure4DeterminationofastrocyteinhibitionbyFPS-ZM1,TAK-242andS100A9Note:*:OnbehalfofthecontrolgroupcomparedwiththeS100A9group,#:OnbehalfoftheS100A9垣FPS-ZM1group,S100A9垣TAK-242group,S100A9垣FPS-ZM1垣TAK-242group-comparedwiththeS100A9group;**:p<0.01,##:p<0.01圖1重組pET28a-S100A9測序峰Figure1RecombinantpET28a-S100A9sequencingpeakmap3654

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