【摘要】：目的:為了研究交感神經(jīng)對硝酸甘油(nitroglycerin,NTG)致慢性偏頭痛模型大鼠疼痛行為學(xué)和三叉神經(jīng)節(jié)(trigeinal ganglion,TG)內(nèi)炎性因子腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)表達(dá)的影響,進(jìn)而探討交感神經(jīng)對偏頭痛的作用機理,為偏頭痛的治療提供理論依據(jù)。方法:1、將24只雄性SD大鼠隨機分為偏頭痛模型組(n=8)、空白對照組(n=8)和生理鹽水對照組(n=8),模型組大鼠予頸背部皮下注射NTG(10mg/Kg,每周1次,共4周),生理鹽水組予注射0.9%的生理鹽水(用法用量同模型組),空白對照組不做任何處理;觀察并記錄各組大鼠每次給藥30min內(nèi)疼痛行為學(xué)癥狀,第4周給藥4h后取材進(jìn)行免疫熒光染色實驗,研究各組大鼠TG內(nèi)TNF-α表達(dá)情況。2、將40只雄性SD大鼠隨機分為生理鹽水對照組(n=10)、偏頭痛模型組(n=10)、交感神經(jīng)切斷組(n=10)和假手術(shù)組(n=10),首次給藥造模24~48h后,交感神經(jīng)切斷組大鼠行頸交感神經(jīng)切斷術(shù),假手術(shù)組大鼠按照同樣步驟行假手術(shù)但不切斷頸交感神經(jīng);觀察并記錄第2周給藥30min內(nèi)疼痛行為學(xué)癥狀,第4周給藥4h后取材進(jìn)行免疫熒光染色和Western-blot實驗,研究交感神經(jīng)切斷對大鼠疼痛行為學(xué)和TG內(nèi)TNF-α表達(dá)水平的影響。結(jié)果:1、硝酸甘油致慢性偏頭痛模型大鼠的疼痛行為學(xué)評分顯著高于兩個對照組(P0.01)。TNF-α在模型組大鼠TG中呈強陽性表達(dá),而在空白對照組和生理鹽水對照組大鼠TG中TNF-α呈弱陽性表達(dá);通過測平均熒光強度進(jìn)行分析可見,模型組與空白對照組或生理鹽水對照組相比,平均熒光強度顯著增高(P0.01),而兩個對照組之間未見明顯統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。2、交感神經(jīng)切斷組大鼠疼痛行為學(xué)評分較模型組降低(P0.01),但仍比對照組評分高(P0.01),而假手術(shù)組大鼠疼痛行為學(xué)評分與模型組無明顯差異(P0.05)。免疫熒光染色及Western-blot實驗結(jié)果均顯示,交感神經(jīng)切斷組大鼠三叉神經(jīng)節(jié)內(nèi)TNF-α表達(dá)水平較模型組是顯著降低的(P0.01),與對照組相比則偏高(P0.05)。假手術(shù)組大鼠三叉神經(jīng)節(jié)內(nèi)TNF-α表達(dá)量與模型組之間無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。結(jié)論:1、NTG致偏頭痛大鼠的疼痛行為學(xué)評分明顯升高,提示該模型能較好地模擬偏頭痛發(fā)作及慢性化的過程。TNF-α在偏頭痛大鼠TG內(nèi)表達(dá)顯著增多,進(jìn)一步支持神經(jīng)源性炎癥參與了偏頭痛的致病過程。2、頸交感神經(jīng)切斷可緩解NTG致慢性偏頭痛模型大鼠的疼痛行為,同時降低偏頭痛大鼠三叉神經(jīng)節(jié)內(nèi)TNF-α的表達(dá)量,說明交感神經(jīng)可通過調(diào)控偏頭痛大鼠的TNF-α表達(dá)水平,進(jìn)而影響偏頭痛。
【學(xué)位授予單位】：廣東藥科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R747.2
【圖文】：

Figure 2-1. Experimental technical routes.圖 2-1 實驗技術(shù)路線2.2.2 偏頭痛模型的建立及疼痛行為學(xué)評估本研究按 Tassorelli 法[36]在大鼠頸背部注射硝酸甘油（10mg/Kg，即 2ml/Kg，每周 1 次，共 4 周），建立慢性偏頭痛模型，此為模型組。生理鹽水對照組按照同樣的劑量和方法注射生理鹽水，空白對照組不做任何處理。給藥后觀察各組大鼠行為學(xué)變化情況，記錄每次給藥后 30min 內(nèi)大鼠是否有耳紅現(xiàn)象，撓頭、爬籠次數(shù)等。行為學(xué)評分標(biāo)準(zhǔn)[37]如下： 撓頭：達(dá) 10 次計 1 分，此后每出現(xiàn) 1 次累計 0.1 分； 爬籠：達(dá) 3 次計 I 分，此后出現(xiàn) 1 次，累計 1 分； 籠內(nèi)打轉(zhuǎn)：達(dá) 2 次計 1 分，此后每出現(xiàn) 1 次累計 1 分；④往返運動：每次計 1 分；⑤咬尾：每次計 1 分；⑥耳朵發(fā)紅：出現(xiàn)計 1 分。潛伏期 5min 后疼痛評分累計≥6 分的大鼠可視為造模成功。2.2.3 心臟灌注及取材 麻醉：第四周給藥 4h 后，給大鼠腹腔注射 10%的水合氯醛溶液（4ml/Kg），

廣東藥科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文肌等，小心地分離右側(cè)氣管和頸動脈鞘，避免損傷血管，在頸動脈鞘后間隙的肌肉表面橫向剪斷交感神經(jīng)干，逐層縫合切口、消毒皮膚，將大鼠單獨放置于清潔且溫暖的籠子里，待其自然清醒。觀察大鼠清醒后情況，若出現(xiàn)右側(cè)眼瞼下垂，即 Horner 征，說明手術(shù)成功，只有出現(xiàn)右側(cè)眼瞼下垂的大鼠才納入后續(xù)的實驗。sham 組大鼠按照同樣的手術(shù)步驟，分離右側(cè)氣管和頸動脈鞘，但不切斷交感神經(jīng)干。手術(shù)過程中所有器械均經(jīng)過嚴(yán)格的高溫高壓滅菌消毒處理，按照實驗動物倫理規(guī)范進(jìn)行操作。Step 3 疼痛行為學(xué)評估：繼續(xù)按計劃給藥，觀察各組大鼠行為學(xué)變化情況，記錄每次給藥后 30min 內(nèi)大鼠是否有耳紅現(xiàn)象，撓頭、爬籠次數(shù)等。行為學(xué)評分標(biāo)準(zhǔn)[45]如下： 撓頭：達(dá) 10 次計 1 分，此后每出現(xiàn) 1 次累計 0.1 分； 爬籠：達(dá) 3 次計 1 分，此后出現(xiàn) 1 次，累計 1 分； 籠內(nèi)打轉(zhuǎn)：達(dá) 2 次計 1 分，此后每出現(xiàn) 1 次累計 1 分；④往返運動：每次計 1 分；⑤咬尾：每次計 1 分；⑥耳朵發(fā)紅：出現(xiàn)計 1 分。潛伏期 5min 后疼痛評分累計≥6 分的大鼠可視為造模成功。

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2720944