【摘要】：目的:建立一種高效篩選特異性殺傷膠質(zhì)瘤干細(xì)胞(glioma stem cell,GSC)的藥物方法,篩選特異性殺傷膠質(zhì)瘤干細(xì)胞的藥物,為促進(jìn)腦膠質(zhì)母細(xì)胞瘤(Glioblastoma,GBM)治療藥物發(fā)現(xiàn)提供策略。方法:將臨床病人的膠質(zhì)瘤干細(xì)胞T387GSC穩(wěn)定轉(zhuǎn)染綠色熒光蛋白,以熒光讀值為指示,建立高通量藥物篩選方法;篩選60個(gè)腫瘤干細(xì)胞凋亡相關(guān)信號(hào)通路抑制劑,優(yōu)選強(qiáng)活性藥物用D456GSC重復(fù)驗(yàn)證化合物的效果并測(cè)試其人神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞(normal human microglia,NHA)及人小膠質(zhì)細(xì)胞(human microglia,HM)的細(xì)胞毒性,考察化合物的選擇性,發(fā)現(xiàn)SN38對(duì)膠質(zhì)瘤干細(xì)胞具有選擇性的殺傷作用。采用體內(nèi)移植瘤模型評(píng)價(jià)SN38的體內(nèi)抗腫瘤活性研究,考察其對(duì)原位瘤小鼠生存期的影響,并通過(guò)腦切片HE染色評(píng)價(jià)SN38對(duì)腫瘤增殖的抑制作用。組織病理學(xué)水平檢測(cè)SN38對(duì)GSC的殺傷效果及誘導(dǎo)GSC的凋亡情況。并采用流式細(xì)胞術(shù)及蛋白印跡技術(shù)檢測(cè)候選化合物誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡情況,通過(guò)誘導(dǎo)敲除的方法驗(yàn)證SN38在GSC中的作用靶點(diǎn)。結(jié)果:建立了一種高通量膠質(zhì)瘤干細(xì)胞選擇性殺傷藥物的篩選方法;發(fā)現(xiàn)化合物SN38對(duì)膠質(zhì)瘤干細(xì)胞細(xì)胞毒性最強(qiáng)。實(shí)驗(yàn)證明SN38選擇性殺傷膠質(zhì)瘤干細(xì)胞,對(duì)各株膠質(zhì)瘤干細(xì)胞IC_(50)均小于10nM。而對(duì)正常人神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞和人小膠質(zhì)細(xì)胞IC_(50)均大于100nM。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明給予化合物SN38明顯延長(zhǎng)荷瘤小鼠生存期,腫瘤增長(zhǎng)減慢,腫瘤細(xì)胞凋亡增加,腫瘤干細(xì)胞比例降低。細(xì)胞免疫熒光實(shí)驗(yàn)證明SN38通過(guò)誘導(dǎo)膠質(zhì)瘤干細(xì)胞凋亡,減慢腫瘤干細(xì)胞增殖。Western-blot結(jié)果顯示SN38處理膠質(zhì)瘤干細(xì)胞引起拓?fù)洚悩?gòu)酶I蛋白降解,誘導(dǎo)敲低拓?fù)洚悩?gòu)酶I后,膠質(zhì)瘤干細(xì)胞對(duì)SN38敏感性下降。結(jié)論:以細(xì)胞熒光強(qiáng)度為指示的高通量篩選方法能夠高效準(zhǔn)確地篩選抗腦膠質(zhì)母細(xì)胞瘤藥物。化合物SN38在膠質(zhì)瘤干細(xì)胞的作用靶點(diǎn)是TOPI,通過(guò)促進(jìn)膠質(zhì)瘤干細(xì)胞凋亡,抑制增殖來(lái)發(fā)揮抗腫瘤效果。
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類(lèi)號(hào)】：R739.41
【圖文】：

第 4 章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果第 4 章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果選結(jié)果熒光細(xì)胞構(gòu)建DH-GFP 載體慢病毒包裝后，收病毒感染 T387GSC 三天處理細(xì)胞，將細(xì)胞按照綠色熒光強(qiáng)度進(jìn)行分選后在激光 波長(zhǎng)將發(fā)光照射細(xì)胞，觀察細(xì)胞發(fā)光情況并拍照。如出明亮的黃綠色熒光。說(shuō)明細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)綠色熒光蛋

化合物高通量篩選結(jié)果代表圖（40×）

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本文編號(hào)：2719858