【摘要】：目的:腦膠質(zhì)瘤是中樞神經(jīng)系統(tǒng)最常見的原發(fā)惡性腫瘤。雖然經(jīng)過積極的手術(shù)和放療、化療治療,患者的中位生存時間僅為12到15個月,其五年生存率仍小于5%。本研究旨在研究RNA結(jié)合蛋白FXR1和長鏈非編碼RNA MIR17HG能否調(diào)控膠質(zhì)瘤細胞的惡性生物學(xué)行為,進一步深入分析其潛在的分子機制,即FXR1通過增加MIR17HG的穩(wěn)定性下調(diào)miR-346/miR-425-5p促進TAL1的表達,促進膠質(zhì)瘤細胞的惡性生物學(xué)行為。研究方法:首先培養(yǎng)人正常星型膠質(zhì)細胞、人膠質(zhì)瘤細胞U87、U251和人胚腎細胞HEK293T。應(yīng)用Real-time PCR方法檢測MIR17HG、miR-346、miR-425-5p和TAL1,應(yīng)用Western blot方法檢測FXR1、TAL1和DEC1在正常腦組織、膠質(zhì)瘤組織、人正常星型膠質(zhì)細胞、膠質(zhì)瘤細胞中的表達水平。應(yīng)用CCK-8、Transwell、流式細胞儀分別檢測細胞的增殖、遷移侵襲、凋亡能力的改變,通過細胞轉(zhuǎn)染方法構(gòu)建FXR1、MIR17HG、DEC1沉默的細胞系,構(gòu)建TAL1、miR-346、miR-425-5p過表達和表達沉默的細胞系,研究其在膠質(zhì)瘤細胞惡性生物學(xué)行為中的作用。Real-time PCR方法檢測MIR17HG、TAL1的mRNA和miR-346、miR-425-5p的表達變化。Western Blot方法檢測FXR1、TAL1、DEC1蛋白的表達變化。RIP和RNA pull down實驗驗證FXR1和MIR17HG靶向結(jié)合作用。雙熒光素酶基因報告系統(tǒng)檢測MIR17HG和miR-346/miR-425-5p、miR-346/miR-425-5p和TAL1的靶向結(jié)合作用。ChIP實驗分析TAL1分別與DEC1、MIR17HG啟動子區(qū)的直接作用。裸鼠移植瘤實驗檢測FXR1和MIR17HG對裸鼠移植瘤的生長和荷瘤裸鼠生存時間的影響。結(jié)果:本研究發(fā)現(xiàn)FXR1在膠質(zhì)瘤組織和細胞中高表達,沉默F(xiàn)XR1能夠抑制膠質(zhì)瘤細胞的增殖、遷移和侵襲并且促進細胞凋亡。MIR17HG在膠質(zhì)瘤組織和細胞中高表達,沉默MIR17HG能夠抑制U87和U251細胞的增殖、遷移和侵襲并促進細胞凋亡。FXR1通過增加MIR17HG的穩(wěn)定性,上調(diào)其表達發(fā)揮促進膠質(zhì)瘤細胞惡性生物學(xué)行為的作用。沉默F(xiàn)XR1聯(lián)合沉默MIR17HG抑制裸鼠移植瘤的生長并延長荷瘤裸鼠的生存期。MiR-346和miR-425-5p在膠質(zhì)瘤組織和細胞中低表達,過表達miR-346和miR-425-5p能顯著抑制膠質(zhì)瘤細胞的增殖,遷移和侵襲能力,促進細胞凋亡。MIR17HG與miR-346、miR-425-5p存在靶向結(jié)合作用。沉默MIR17HG或過表達miR-346、miR-425-5p降低TAL1的表達。TAL1在膠質(zhì)瘤組織及細胞中高表達,沉默TAL1能夠顯著抑制U87和U251細胞的增殖、遷移和侵襲并促進細胞凋亡。miR-346、miR-425-5p分別與TAL1 mRNA的3,UTR區(qū)結(jié)合。沉默MIR17HG通過負性調(diào)控miR-346、miR-425-5p,降低TAL1的表達,抑制膠質(zhì)瘤細胞的惡性生物學(xué)行為。TAL1與DEC1的啟動子區(qū)結(jié)合,增加其啟動子活性。DEC1在膠質(zhì)瘤組織和細胞中高表達,沉默DEC1顯著抑制膠質(zhì)瘤細胞增殖、遷移、侵襲能力并促進細胞凋亡。過表達miR-346/miR425-5p通過負性調(diào)控TAL1降低DEC1的表達,調(diào)控質(zhì)瘤細胞的惡性生物學(xué)行為。TAL1能夠與MIR17HG的啟動子區(qū)結(jié)合,過表達TAL1能顯著上調(diào)MIR17HG的表達,調(diào)控膠質(zhì)瘤細胞的惡性生物學(xué)行為。結(jié)論:1.FXR1和MIR17HG在膠質(zhì)瘤組織和細胞中高表達,MiR-346和miR-425-5p低表達。沉默F(xiàn)XR1、MIR17HG的表達以及過表達miR-346、miR-425-5p能夠抑制膠質(zhì)瘤細胞的增殖、遷移及侵襲力,促進細胞凋亡。2.FXR1能夠增加MIR17HG的穩(wěn)定性。MIR17HG分別特異性結(jié)合miR-346、miR-425-5p。沉默F(xiàn)XR1的表達,通過降低MIR17HG的穩(wěn)定性,減弱其與miR-346、miR-425-5p的結(jié)合作用,抑制膠質(zhì)瘤細胞的增殖、遷移及侵襲力,促進細胞凋亡。3.TAL1是miR-346、miR-425-5p的靶基因。TAL1與DEC1的啟動子直接結(jié)合,并增強其活性。過表達miR-346、miR-425-5p通過增強miR-346、miR-425-5p對TAL1的負性調(diào)控作用,降低TAL1的表達,抑制DEC1的轉(zhuǎn)錄,抑制膠質(zhì)瘤細胞的增殖、遷移及侵襲力,促進細胞凋亡。4.TAL1與MIR17HG的啟動子區(qū)結(jié)合,增強其活性。5.FXR1-MIR17HG-miR-346/miR-425-5p-TAL1反饋環(huán)路在調(diào)節(jié)膠質(zhì)瘤細胞生物學(xué)行為中發(fā)揮重要作用。
【學(xué)位授予單位】：中國醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R739.41
【圖文】：

10圖 1 FXR1 表達水平及對膠質(zhì)瘤細胞生物學(xué)行為的影響（a）在非腫瘤性腦組織（NBTs）、低級別膠質(zhì)瘤組織（WHOI-II）和高級別膠質(zhì)瘤組織（WHOIII-IV）中的 FXR1 蛋白的表達水平。數(shù)據(jù)以平均值±標準差表示（n=3）。與 NBTs 組比較，*P<0.05，**P<0.01；與低級別膠質(zhì)瘤組織組比較，##P<0.01。（b）在正常人星形膠質(zhì)細胞（NHA）、U87和 U251 細胞中的 FXR1 蛋白的表達水平。數(shù)據(jù)以平均值±標準差表示（n=3）。與 NHA 組比較，

12圖 2 MIR17HG 的表達水平及對膠質(zhì)瘤細胞生物學(xué)行為的影響（a）在NBT和不同級別膠質(zhì)瘤組織中MIR17HG的表達水平。數(shù)據(jù)以平均值±標準差表示（n=7）。與 NBTs 組比較，*P<0.05， **P<0.01；與 I 級膠質(zhì)瘤組比較，#P<0.05，##P<0.01；與 II 級膠質(zhì)瘤組比較，△△P<0.01；與 III 級膠質(zhì)瘤組比較，ΨΨP<0.01。（b）NHA 和膠質(zhì)瘤細胞系（U87 和U251）中 MIR17HG 的表達水平。數(shù)據(jù)表示為平均值±標準差表示（n=3）；與 NHA 組比較，

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