本文關(guān)鍵詞：硫化氫通過上調(diào)瘦素信號通路拮抗甲醛誘導(dǎo)的HT22細胞衰老，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：【研究背景與目的】大量研究證實甲醛(Formaldehyde,FA)對中樞神經(jīng)系統(tǒng)具有毒性作用。硫化氫(Hydrogen sulfide,H2S),作為一種神經(jīng)保護劑,我們發(fā)現(xiàn)其可以抑制FA誘導(dǎo)的神經(jīng)細胞凋亡、細胞毒性及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激,表明H2S具有抗FA神經(jīng)毒性的作用,但其具體機制有待進一步研究。神經(jīng)細胞衰老在神經(jīng)退行性疾病的病理生理機制中具有重要地位,我們推測細胞衰老在FA神經(jīng)毒性中具有重要價值。瘦素(leptin)具有中樞神經(jīng)系統(tǒng)保護作用,我們既往發(fā)現(xiàn)H2S可以通過上調(diào)leptin信號通路拮抗檳榔堿引起的PC12細胞凋亡、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激從而發(fā)揮神經(jīng)保護作用。因此,在本研究中,我們擬探討細胞衰老是否參與了FA導(dǎo)致的神經(jīng)毒性?H2S可否拮抗FA誘導(dǎo)的HT22細胞衰老?以及l(fā)eptin信號通路可否介導(dǎo)H2S的這一作用?【方法】細胞計數(shù)試劑盒(Cell counting Kit-8,CCK8)法檢測細胞活力;β-半乳糖苷酶染色(Senescence Associated acidic-β-Galactosidas,SA-β-Gal)法檢測衰老細胞;臺盼藍計數(shù)法檢測細胞生長情況并繪制細胞生長曲線;蛋白免疫印跡(Western Blot)法檢測leptin、lepRb以及細胞衰老相關(guān)蛋白p16INK4a和p21CIPl的表達;ELISA法檢測HT22細胞培養(yǎng)上清液中l(wèi)eptin的含量�！窘Y(jié)果】1.FA(100,200μM)處理HT22細胞48 h可顯著降低HT22細胞的細胞活力,在HT22細胞上驗證了FA的神經(jīng)細胞毒性。2.FA(50,100,200μM,48 h)能明顯增加HT22細胞SA-β-Gal染色陽性率、上調(diào)細胞衰老相關(guān)蛋白(p16INK4a和p21CIPL)的表達、抑制HT22細胞生長,表明FA可誘導(dǎo)HT22細胞衰老。3.預(yù)處理NaHS(H2S的供體,400μM,30 min)可明顯抑制FA誘導(dǎo)的HT22細胞活力下降,在HT22細胞上驗證了H2S的抗FA神經(jīng)細胞毒性作用。4.NaHS(400μM,30 min)預(yù)處理能明顯逆轉(zhuǎn)FA(100μM,48 h)誘導(dǎo)的HT22細胞SA-β-Gal染色陽性率增加、p16INK4a及p21CIP1蛋白表達增加、細胞生長抑制,表明H2S可拮抗FA誘導(dǎo)的HT22細胞衰老。5.FA(50,100,200μM,48 h)可濃度依賴性地下調(diào)HT22細胞中l(wèi)eptin及l(fā)epRb蛋白表達、降低細胞培養(yǎng)上清液中l(wèi)eptin的含量,提示FA的神經(jīng)毒性與其抑制leptin信號通路有關(guān)。6.NaHS(100,200,400μM,48 h)可濃度依賴性的增加HT22細胞leptin、lepRb表達及培養(yǎng)上清液中l(wèi)eptin的含量,且預(yù)處理NaHS(400μM,30 min)可明顯逆轉(zhuǎn)FA對leptin信號通路的下調(diào),提示H2S抗神經(jīng)細胞衰老可能與其上調(diào)leptin信號通路有關(guān)。7.預(yù)處理leptin tA(leptin信號通路抑制劑,50 nM)能取消NaHS對FA誘導(dǎo)HT22細胞活力下降以及細胞衰老的拮抗作用,表明leptin信號通路介導(dǎo)了H2S抗FA誘導(dǎo)的HT22細胞衰老。【結(jié)論】1.FA可以誘導(dǎo)HT22細胞衰老;2.H2S可拮抗FA誘導(dǎo)的HT22細胞衰老;3.leptin信號通路介導(dǎo)H2S抗FA誘導(dǎo)的HT22細胞衰老。
【關(guān)鍵詞】：硫化氫 甲醛 細胞衰老 leptin信號通路
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R741
【目錄】：

• 摘要5-7
• Abstract7-12
• 第一章 緒論12-16
• 第二章 材料與方法16-22
• 1. 主要儀器和試劑16-18
• 2. 藥品與試劑的配制18-19
• 3. 實驗方法19-22
• 第三章 結(jié)果22-34
• 1. 甲醛 (Formaldehyde, FA) 可降低HT22細胞活力22
• 2. FA可誘導(dǎo)HT22細胞衰老22-24
• 3. H_2S可抑制FA降低的HT22細胞活力下降24
• 4. H_2S拮抗FA誘導(dǎo)的HT22細胞衰老24-26
• 5. H_2S上調(diào)HT22細胞leptin信號通路26-29
• 6. 阻斷l(xiāng)eptin信號通路可逆轉(zhuǎn)H_2S對FA誘導(dǎo)HT22細胞衰老的拮抗作用29-34
• 第四章 討論34-38
• 第五章 實驗結(jié)論38-40
• 參考文獻40-44
• 文獻綜述 瘦素與阿爾茲海默病44-52
• 參考文獻47-52
• 碩士期間發(fā)表的論文52-54
• 致謝54

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本文編號：271329