【摘要】：目的觀察雌激素對KM小鼠大腦中動脈阻塞(MCAO)后各缺血時間點(diǎn)神經(jīng)功能評分、腦梗死體積及海馬區(qū)神經(jīng)元變化的影響;分析雌激素對KM小鼠MCAO后海馬星形膠質(zhì)細(xì)胞(AS)形態(tài)及數(shù)量的改變;探討雌激素對小鼠腦缺血后海馬AS上NF-κB p65、Bcl-2、Bax及Bcl-xl表達(dá)的影響。方法1選取171只健康成年雄性KM小鼠,按體重依次進(jìn)行編碼,依據(jù)數(shù)據(jù)隨機(jī)表隨機(jī)分為雌激素組(54只)、生理鹽水組(54只)、假手術(shù)組(54只)及正常組(9只)。雌激素組術(shù)前7d每日定時腹腔注射17β-雌二醇溶液,生理鹽水組術(shù)前7d每日注射0.9%生理鹽水,之后兩組均采用新式線栓法制作急性永久性右側(cè)MCAO動物模型;假手術(shù)組僅結(jié)扎右側(cè)頸總動脈(CCA);正常組不予特殊處理。處死前對各小鼠進(jìn)行神經(jīng)功能評分。2從各組術(shù)后各時間點(diǎn)取3只KM小鼠用于2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)染色,觀察各組術(shù)后不同時間點(diǎn)腦缺血部位及體積改變。3除用于TTC染色的小鼠外,余小鼠麻醉后用4%多聚甲醛進(jìn)行心臟灌注,取腦,切取前囟后-4.6mm至-2.6mm,即海馬所在區(qū)域的腦片,制成蠟塊后切片。4采用HE染色法觀察并分析雌激素對小鼠各缺血時間點(diǎn)海馬神經(jīng)元細(xì)胞形態(tài)變化的影響。5采用免疫組織化學(xué)法觀察分析雌激素對腦缺血后海馬膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)表達(dá)的影響。6采用免疫組織熒光標(biāo)記法觀察分析雌激素對海馬AS表達(dá)上NF-κB P65、Bcl-2、Bax與Bcl-xl的影響。6統(tǒng)計學(xué)方法:應(yīng)用SPSS 21.0統(tǒng)計軟件對實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析,計量資料以錯誤!未找到引用源。s表示,采用單因素方差分析,以P0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果1假手術(shù)組及正常組在指定時間內(nèi)未出現(xiàn)神經(jīng)功能缺損;雌激素組與生理鹽水組小鼠隨著缺血時間的延長,神經(jīng)功能評分越高(F_E=36.217,P_E0.001;F_(NS)=20.429,P_(NS)0.001),缺血6h與12h時雌激素組神經(jīng)功能評分與生理鹽水組比較均有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。2正常組與假手術(shù)組術(shù)后各時間點(diǎn)小鼠TTC染色未見灰白色梗死灶;雌激素組與生理鹽水組隨著腦缺血時間的延長,梗死體積逐漸增大(F_E=634.108,P_E0.001;F_(NS)=56.367,P_(NS)0.001);相同缺血時間時,雌激素組腦梗死體積均小于生理鹽水組(均P0.05)。3 HE染色結(jié)果顯示生理鹽水組比雌激素組海馬區(qū)神經(jīng)元較早出現(xiàn)不可逆損傷。4免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示正常組與假手術(shù)組各缺血時間點(diǎn)海馬區(qū)GFAP陽性細(xì)胞數(shù)量均無明顯差異(P0.05)。雌激素組及生理鹽水組,隨缺血時間的延長,缺血側(cè)海馬區(qū)GFAP的表達(dá)水平呈增長趨勢(F_E=36.217,P_E0.001;F_(NS)=20.429,P_(NS)0.001);腦缺血72 h內(nèi),除腦缺血48h和72h海馬DG區(qū)外,相同缺血時間點(diǎn),雌激素組缺血側(cè)海馬區(qū)GFAP陽性細(xì)胞個數(shù)均高于同側(cè)生理鹽水組(P均0.05),且雌激素組突起更長,小分支較多。5相同缺血時間時,雌激素組GFAP與NF-κB P65共表達(dá)的細(xì)胞數(shù)量均少于生理鹽水組,其中僅海馬CA1區(qū)缺血24h、CA2區(qū)缺血12h及72h具有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05);相同缺血時間時,除缺血48h與72h時DG區(qū)外GFAP與Bcl-2共表達(dá)的細(xì)胞數(shù)量,雌激素組缺血側(cè)海馬各區(qū)共表達(dá)細(xì)胞數(shù)均高于生理鹽水組(P0.05),且兩組同時表達(dá)GFAP與Bcl-2陽性的細(xì)胞個數(shù)隨著缺血時間的延長而增多(均P0.05);相同缺血時間時,比較兩組GFAP與Bax共表達(dá)陽性的細(xì)胞數(shù)量,雌激素組僅海馬CA1區(qū)缺血72h及CA2區(qū)缺血24h、72h低于同側(cè)生理鹽水組(P0.05);雌激素組與生理鹽水組小鼠海馬區(qū)Bcl-xl與GFAP同時陽性表達(dá)的細(xì)胞隨著缺血時間的延長而增多(P均0.05),且相同缺血時間時,雌激素組海馬CA1區(qū)缺血12h及CA3區(qū)和DG區(qū)缺血6h至72h共表達(dá)細(xì)胞數(shù)量均高于同側(cè)生理鹽水組(P0.05)。結(jié)論雌激素對小鼠MCAO有神經(jīng)保護(hù)作用,可一定程度上減輕神經(jīng)缺損癥狀,縮小腦梗死體積,延緩神經(jīng)元不可逆損傷的發(fā)生;雌激素可促進(jìn)小鼠MCAO后海馬AS上GFAP的表達(dá),促進(jìn)突起的延長;雌激素可促進(jìn)小鼠MCAO后海馬區(qū)AS抗凋亡蛋白Bcl-2與Bcl-xl的表達(dá),減輕腦損傷。
【圖文】：

-G 依次代表正常組、假手術(shù)組術(shù)后 3h、假手術(shù)組術(shù)后 6h、假手術(shù)組術(shù)后 12h、假手術(shù)組術(shù)后 2術(shù)后 48h、假手術(shù)組術(shù)后 72h。圖 1 正常組與假手術(shù)組小鼠 MCAO 后腦片 TTC 染色Fig.1 TTC staining of Mice brain in normal group and shame group after MCAO-F 依次表示雌激素組缺血 3h、6h、12h、24h、48h、72h；a-f 依次表示生理鹽水組缺血 3h、6h、48h、72h。圖 2 雌激素組與生理鹽水組小鼠 MCAO 后腦片 TTC 染色Fig.2 TTC staining of Mice brain in estrgen group and saline group after MCAOA a CB bc D d Ee F

附錄 A 圖片注：A-G 依次代表正常組、假手術(shù)組術(shù)后 3h、假手術(shù)組術(shù)后 6h、假手術(shù)組術(shù)后 12h、假手術(shù)組術(shù)后 24h、假手術(shù)組術(shù)后 48h、假手術(shù)組術(shù)后 72h。圖 1 正常組與假手術(shù)組小鼠 MCAO 后腦片 TTC 染色Fig.1 TTC staining of Mice brain in normal group and shame group after MCAOA B C DEFG
【學(xué)位授予單位】：華北理工大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R743

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2702171