發(fā)布時間：2020-06-07 02:53

【摘要】：目的探討S100β基因感染的嗅鞘細胞(OECs)與脫細胞異種神經橋接體(ANX)共培養(yǎng)后對大鼠坐骨神經損傷的修復效果。方法1.使用差速貼壁聯(lián)合胰酶限時消化法培養(yǎng)SD乳鼠嗅球來源的OECs,用表達S100β基因的慢病毒感染OECs并檢測感染細胞的增殖情況。2.用化學萃取法對新西蘭大白兔來源的脛神經支架進行脫細胞處理并檢測脫細胞效果。3.建立完全離斷8mm的SD大鼠坐骨神經缺損模型,分別使用單純ANX、復合了空載體感染的OECs的ANX和復合了S100β感染的OECs的ANX橋接大鼠缺損的坐骨神經兩斷端即ANX組(A組)、GFP-OECs+ANX組(B組)和S100β-OECs+ANX組(C組),并在4w、8w兩個時間點上對修復周圍神經缺損的效果進行評價。結果1.使用差速貼壁聯(lián)合限時胰酶消化法獲得的OECs純度為(96.13±0.01)%。2.經化學萃取法獲得的ANX完全去除了細胞、髓鞘等結構,僅保留了基膜成分。3.術后4w,與A、B組相比,C組坐骨神經功能指數等行為學及脛骨前肌濕重比率上的恢復更好(P0.05),在組織學上,B、C組橋接體內部多為細胞結構但A組多為血管結構;8w時,C組坐骨神經功能指數、爬坡坡度、患肢回縮時間、潛伏期、傳導速度多項指標均優(yōu)于A、B組且有統(tǒng)計學差異(P0.05),脛骨前肌濕重比率、腓腸肌濕重比率優(yōu)于A、B組且僅與A組有統(tǒng)計學差異(P0.05),A、B組間比較,B組各項指標在數值上均優(yōu)于A組但僅在坐骨神經功能指數、患肢回縮時間及腓腸肌濕重比率幾項指標上具有統(tǒng)計學差異(P0.05),在組織學上,與A組相比,B、C兩組的再生髓鞘形態(tài)更為規(guī)則。結論本實驗通過使用S100β慢病毒感染OECs的方法獲得S100β過表達細胞體系,且該細胞體系與ANX之間有良好的相容性;兩者共培養(yǎng)之后可以分泌NGF、BDNF等促進神經再生的因子。本研究結果證實負載了S100β-OECs的ANX可以作為大鼠坐骨神經的損傷與修復實驗的理想材料且其修復效果良好。
【圖文】：

A：原代培養(yǎng) 24h 的 OECs 形態(tài)，B：移植前的 OECs 形態(tài)。BCs 的鑒定及純度計算光顯微鏡下觀察細胞鑒定后的熒光圖片(見圖 2)，圖 2A 是 OECs 的細胞質，由 FITC 染成綠色，2B 是 DAPI 標記的所有，呈藍色，圖 2C 是圖 2A 和圖 2B 疊加后的彩色圖片，，兩者重疊為染的細胞核應為雜質細胞，從細胞鑒定的免疫熒光圖片中隨機進行 p75 標記的陽性細胞及細胞總數的計數，進而計算 OECs度=某一視野 p75NGF 標記的陽性細胞數/DAPI 標記的細胞總統(tǒng)計 結果見表 1，該方法培養(yǎng) 的第三代 OECs 的純 度可 達，可以滿足實驗的移植需要。

545266504927156 54 69 51 52 282 s 的慢病毒感染 MOI=10 的慢病毒感染 P1 代 OECs，24h 后棄含病毒的培培養(yǎng)基 48h 后在倒置熒光顯微鏡下觀察細胞的形態(tài)及感染現 P1 代 OECs 大部分成雙極性生長(見圖 3A、3C)，大部光(見圖 3B、3D)且兩組細胞間的熒光強度相差不大，說明染效果在空載體感染組和 S100β感染組間無明顯差異。
【學位授予單位】：寧夏醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R745

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 游思維;;嗅鞘細胞對中樞神經損傷修復作用的基礎研究進展[J];中華細胞與干細胞雜志(電子版);2012年03期

2 劉瑞仕;劉衛(wèi)東;;嗅鞘細胞的研究現狀[J];菏澤醫(yī)學�？茖W校學報;2009年02期

3 呂然博,楊天明,惠國幀,吳衛(wèi)江,苗宗寧,王玲;用于臨床移植的不同時期人胚胎嗅鞘細胞的形態(tài)學變化[J];中國臨床康復;2004年02期

4 張華軍;徐天舒;劉新峰;;嗅鞘細胞分泌神經生長因子的檢測分析[J];中國現代神經疾病雜志;2008年06期

5 傅佳峰;諸葛啟釧;;嗅粘膜嗅鞘細胞的特點及研究現狀[J];國際神經病學神經外科學雜志;2006年05期

6 馬元琛;唐勇;沈慧勇;楊志華;吳燕峰;王學文;王鵬;;移植脊髓中嗅鞘細胞的生物學特性(英文)[J];中國臨床康復;2005年42期

7 孫朝暉,修波,左煥琮;嗅鞘細胞聯(lián)合移植干預脊髓損傷的新思考[J];中國臨床康復;2005年09期

8 謝倩,楊敏,布文;嗅鞘細胞移植術的手術配合[J];護理研究;2004年03期

9 呂然博,楊天民;嗅鞘細胞的生物學特性及其在脊髓損傷再生中的應用[J];中國臨床康復;2003年32期

10 黃秋生;陸漢強;周月鵬;賀清華;孫湘蘭;陳謙;龔愛華;姜平;張志堅;;干細胞標志蛋白在成人鼻黏膜嗅鞘細胞的表達[J];中國耳鼻咽喉頭頸外科;2012年12期

相關會議論文 前10條

1 蘇志達;;嗅鞘細胞與中樞神經損傷修復[A];中國生理學會張錫鈞基金會第十屆全國青年優(yōu)秀生理學學術論文綜合摘要[C];2009年

2 黃智慧;王瑩;蘇志達;陳宜張;袁小兵;何成;;嗅鞘細胞導向性遷移及形態(tài)可塑性的分子機制[A];中國生理學會第十一屆張錫鈞基金全國青年優(yōu)秀生理學學術論文交流及評獎會議綜合摘要[C];2011年

3 黃濤;賀西京;;顱內預損傷成年大鼠嗅神經后嗅鞘細胞的培養(yǎng)[A];第一屆全國脊髓損傷治療與康復研討會暨中國康復醫(yī)學會脊柱脊髓損傷專業(yè)委員會脊髓損傷與康復學組成立會論文匯編[C];2009年

4 謝倩;楊敏;布文;;嗅鞘細胞移植術的手術配合[A];全國神經內、外科�？谱o理學術會議論文匯編[C];2002年

5 魯凱伍;閆慧博;金大地;江建明;;大鼠嗅鞘細胞體外培養(yǎng)及免疫組化研究[A];第八屆全國脊柱脊髓損傷學術會議論文匯編[C];2007年

6 劉曾旭;王向東;李耀斌;余慶;劉德明;徐年香;薛國勇;石嘉慶;;微囊化兔嗅鞘細胞懸液移植促進大鼠損傷脊髓修復的實驗研究[A];中國解剖學會2013年年會論文文摘匯編[C];2013年

7 陳剛;馮剛;陳其昕;;大鼠嗅鞘細胞的體外培養(yǎng)、純化和鑒定[A];2005年浙江省骨科學術會議論文匯編[C];2005年

8 李紹波;周雪;朱振東;丁艷;彭謹;章為;;嗅鞘細胞對脊髓半橫斷大鼠骨骼肌的影響[A];2007年中國解剖學會第十屆全國組織學與胚胎學青年學術研討會論文摘要匯編[C];2007年

9 劉彥鋮;陳琳;張峰;張健;郗海濤;林懿珊;吳翠;黃紅云;;嗅鞘細胞移植術對于運動神經元病人的呼吸功能的影響[A];中國醫(yī)師協(xié)會神經外科醫(yī)師分會首屆全國代表大會論文匯編[C];2005年

10 葉超群;孫天勝;秦聰聰;張志成;劉彥;;嗅鞘細胞和雪旺氏細胞共移植結合步行訓練促進大鼠脊髓損傷修復[A];第一屆全國脊髓損傷治療與康復研討會暨中國康復醫(yī)學會脊柱脊髓損傷專業(yè)委員會脊髓損傷與康復學組成立會論文匯編[C];2009年

相關重要報紙文章 前4條

1 常麗君;科學家發(fā)現嗅鞘細胞新起源[N];科技日報;2010年

2 本報記者 唐先武 特約記者 王宇曉 吉爾;他試著讓輪椅人站起來[N];科技日報;2002年

3 本報記者 黨朝暉 車喜韻 實習生 易雅晨;交大二附院：一個創(chuàng)造奇跡的團隊[N];陜西日報;2014年

4 健康時報記者 馮麗安;傷脊髓可免于癱瘓[N];健康時報;2008年

相關博士學位論文 前10條

1 劉勁松;骨髓基質細胞和嗅鞘細胞聯(lián)合移植治療脊髓全橫斷損傷的實驗研究[D];昆明醫(yī)學院;2006年

2 趙楠;嗅鞘細胞及其表達的NGF和BDNF對神經干細胞增殖分化的影響[D];昆明醫(yī)學院;2007年

3 武明媚;嗅鞘細胞移植和鋰劑對損傷視網膜節(jié)細胞的修復作用[D];第四軍醫(yī)大學;2012年

4 黃智慧;Slit-2在嗅鞘細胞遷移中的作用及其機制研究[D];浙江大學;2009年

5 朱澍;新型攜氧微球改善外周神經損傷后局部缺氧微環(huán)境的實驗研究[D];第四軍醫(yī)大學;2017年

6 王干;應用組織工程學方法修復脊髓損傷基本問題的研究[D];清華大學;2010年

7 黃鎮(zhèn);神經干細胞和嗅粘膜嗅鞘細胞共培養(yǎng)及移植治療切割海馬傘大鼠的研究[D];蘇州大學;2012年

8 王濤;嗅鞘細胞和支鏈氨基酸對視神經損傷的修復作用[D];第四軍醫(yī)大學;2012年

9 禹曉東;嗅鞘細胞的培養(yǎng)及其生物學特性的實驗研究[D];第四軍醫(yī)大學;2010年

10 范志海;絲素蛋白仿生支架調控嗅鞘細胞生物學行為[D];蘇州大學;2014年

相關碩士學位論文 前10條

1 段f ;S100β基因修飾的嗅鞘細胞與ANX共培養(yǎng)后修復周圍神經缺損的研究[D];寧夏醫(yī)科大學;2019年

2 喬小飛;小鼠嗅鞘細胞的免疫組化和分類鑒定[D];東北師范大學;2010年

3 陳靜;纖維蛋白支架對成人鼻粘膜嗅鞘細胞生物學特性的影響[D];江蘇大學;2009年

4 徐澤;S100β基因修飾的嗅鞘細胞在炎性環(huán)境中的作用[D];寧夏醫(yī)科大學;2017年

5 韓鵬;大鼠嗅鞘細胞與人臍帶間充質干細胞混合培養(yǎng)的研究[D];泰山醫(yī)學院;2014年

6 劉志元;嗅鞘細胞對活化以及損傷的星形膠質細胞的作用[D];南京醫(yī)科大學;2010年

7 王濤;嗅鞘細胞體外存活及其條件培養(yǎng)液的神經保護作用[D];第四軍醫(yī)大學;2009年

8 殷義霞;嗅鞘細胞原代培養(yǎng)及其與脊髓損傷修復材料的作用研究[D];武漢理工大學;2007年

9 朱海濤;嗅鞘細胞移植對大鼠脊髓損傷后硫酸軟骨素蛋白聚糖類分子表達的影響[D];中國醫(yī)科大學;2005年

10 張志存;嗅鞘細胞促損傷大鼠耳蝸螺旋神經節(jié)細胞保護和修復作用的實驗研究[D];復旦大學;2011年

本文編號：2700723