【摘要】：研究目的:人腦膠質(zhì)瘤作為最常見的腦內(nèi)原發(fā)性惡性腫瘤,其發(fā)病率、復(fù)發(fā)率、死亡率高和治愈率低,尤其膠質(zhì)母細胞瘤。隨著醫(yī)療診治的發(fā)展,越來越多的研究傾向于分子靶向治療,尋求特異性較強的靶點,制定新的治療方案,將有可能對膠質(zhì)瘤治療獲得突破性進展。近年諸多研究證實,磷酸化應(yīng)激誘導(dǎo)蛋白(STIP1蛋白)參與了多種腫瘤的發(fā)生與發(fā)展過程。本研究檢測STIP1在人腦膠質(zhì)瘤組織標本及非瘤腦組織標本中的表達差異;研究STIP1對膠質(zhì)瘤細胞株增殖、侵襲等功能的影響;探討STIP1和TRAP1、AKT在膠質(zhì)瘤中相互作用的關(guān)系及靶向于AKT抑制膠質(zhì)瘤侵襲作用;為膠質(zhì)瘤進一步診斷和分子靶向治療奠定理論基礎(chǔ)。研究方法:選擇膠質(zhì)瘤標本(液氮中凍存)35例、非瘤腦組織6例(均來自2000年至2016年間蘇州大學附屬第一醫(yī)院神經(jīng)外科手術(shù)切除),提取RNA,運用實時定量PCR(qRT-PCR)技術(shù),檢測STIP1基因在不同級別膠質(zhì)瘤組織和非瘤腦組織標本中表達有無差異;再通過Western Blot、免疫組化方法檢測STIP1蛋白表達水平差異。將慢病毒(STIP1-siRNA)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染到U87、U251膠質(zhì)瘤細胞株中,運用MTT檢測細胞的增殖能力;transwell實驗檢測細胞侵襲能力。Western Blot檢測轉(zhuǎn)染前后STIP1、TRAP1、AKT、p-AKT、MMP2表達情況。結(jié)果:1、STIP1在人腦膠質(zhì)母細胞質(zhì)瘤中基因及蛋白水平明顯高于非瘤腦組織。運用qRT-PCR技術(shù),對35例不同級別的人腦膠質(zhì)瘤組織標本和6例非瘤腦組織標本中STIP1基因表達進行分析。其結(jié)果提示:STIP1的基因在低級別膠質(zhì)瘤與非瘤腦組織見未見明顯差異(P㧐0.05),膠質(zhì)母細胞瘤與非瘤腦組織存在明顯差異(P0.05)。免疫組化及Western Blot檢測示STIP1在膠質(zhì)母細胞瘤中的表達高于非瘤腦組織。2、下調(diào)STIP1表達抑制膠質(zhì)瘤細胞株增殖和侵襲。利用慢病毒穩(wěn)定轉(zhuǎn)染技術(shù),在U87、U251膠質(zhì)瘤細胞株中下調(diào)STIP1表達后,MTT實驗檢測明顯抑制了細胞增殖,Transwell實驗表明,侵襲能力下降。3、下調(diào)STIP1表達后TRAP1,p-AKT,MMP2蛋白表達下降。慢病毒轉(zhuǎn)染U87,U251細胞下調(diào)STIP1表達,Western Blot結(jié)果顯示TRAP1蛋白表達下降,腫瘤侵襲性相關(guān)性蛋白p-AKT、MMP2表達下降。結(jié)論:(1)STIP1在人腦膠質(zhì)母細胞瘤中表達水平明顯高于非瘤腦組織。(2)下調(diào)STIP1的表達能夠抑制膠質(zhì)瘤細胞株增殖和侵襲。(3)STIP1通過TRAP1-AKT通路調(diào)控膠質(zhì)瘤細胞侵襲作用。
【圖文】：

圖 2：STIP1 在膠質(zhì)母細胞瘤中表達明顯高于非瘤腦組織非瘤腦組織與不同級別膠質(zhì)瘤中 STIP1 基因的表達。B、C、D：Western blot、免疫組化、疫熒光結(jié)果提示膠質(zhì)母細胞瘤中 STIP1 蛋白表達明顯高于非瘤腦組織。討 論腫瘤的發(fā)生是一群失控的同質(zhì)性的腫瘤細胞所組成，每個腫瘤細胞都具有獨立殖的能力，并且可通過轉(zhuǎn)移侵入其他機體組織造成腫瘤細胞的擴散[1]。傳統(tǒng)意腫瘤治療包括手術(shù)切除、化療和放療，，針對性并不強，惡性腫瘤的預(yù)后較差，存率不高， 復(fù)發(fā)的可能性也較大[2, 3]。膠質(zhì)母細胞瘤被 WHO 組織認定為第形膠質(zhì)瘤，即使通過外科手術(shù)切除，放療和化療的方式來抑制膠質(zhì)母細胞瘤的然而其治療效果并不明顯[4]。早期研究證實[5]，膠質(zhì)母細胞瘤樣干細胞對傳統(tǒng)放療都有一定的抵抗特性。因此，聯(lián)合靶向療法為腫瘤治療提供了新的途徑。分子靶向治療主要針對瘤體組織或瘤體細胞上的某些特殊傳導(dǎo)通路上的特異

24圖 2-1 示 siRNA 序列的篩選A：將 siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3 三條序列慢病毒分別轉(zhuǎn)入 U87 和 U251 細胞中，同時設(shè)置空白和陰性對照組，結(jié)果顯示 siRNA 干擾效果最理想。B：將三條序列分別轉(zhuǎn)染 U87 和 U251細胞后，免疫熒光檢測轉(zhuǎn)染效率提示均達 90%以上。C、D：分別在 U87 和 U251 細胞中，免疫熒光和 Western blot 技術(shù)檢測 STIP1-siRNA 組中 STIP1 蛋白表達明顯低于空白組、陰性對照組。4、細胞增殖試驗（MTT）結(jié)果提示下調(diào) STIP1 組中的細胞增殖能力較空白組和陰性對照組明顯下降（**P＜0.01）。細胞侵襲實驗（Transwell）結(jié)果提示下調(diào) STIP1組中的細胞侵襲能力明顯下降（*P＜0.05）如圖 2-2。
【學位授予單位】：蘇州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R739.4

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前5條

1 王海峰;付雙林;宋繼丹;別黎;;膠質(zhì)瘤的標志基因研究進展[J];中華神經(jīng)醫(yī)學雜志;2014年04期

2 馬瑞瓊;程洪艷;葉雪;陳軍;崔恒;魏麗惠;昌曉紅;;腫瘤壞死因子受體相關(guān)蛋白1在上皮性卵巢癌組織中的表達及意義[J];北京大學學報(醫(yī)學版);2014年01期

3 周亮;韓兆東;何慧嬋;鄧軍洪;陳佳鴻;楊盛幫;鐘惟德;;腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子1蛋白在前列腺癌組織中的表達及意義[J];實用醫(yī)學雜志;2013年19期

4 王影;孫靜;李艷艷;于士柱;孫翠云;程德剛;王虔;石翠娟;安同嶺;溫艷軍;;miR-29a對膠質(zhì)瘤細胞CDC42表達及遷移和侵襲的影響[J];中國腫瘤臨床;2013年11期

5 費帆;何永生;;腦膠質(zhì)瘤分子靶向與優(yōu)化治療[J];實用醫(yī)院臨床雜志;2011年02期

本文編號：2698950