【摘要】：目的探討神經(jīng)母細(xì)胞瘤不同病理類型組織中Asef的表達(dá)情況并分析與不同病理分型之間的關(guān)系;然后進(jìn)一步在神經(jīng)母細(xì)胞瘤SH-SY-5Y細(xì)胞系中,通過調(diào)控Asef蛋白并檢測β-catenin隨之變化的情況,從而為明確神經(jīng)母細(xì)胞瘤的發(fā)生和轉(zhuǎn)移機(jī)制的探索做出支持。方法回顧性分析2012~2017年青島大學(xué)附屬醫(yī)院手術(shù)切除54例NB及11例節(jié)細(xì)胞神經(jīng)瘤(ganglion cells neuroma,GN)標(biāo)本,其中選取15例NB瘤旁正常組織為對照組,年齡在4個(gè)月~9歲,平均為3歲9個(gè)月,其中男30例,女35例。采用免疫組織化學(xué)染色SP法比較NB組與瘤旁組織、GN組Asef表達(dá)情況,并進(jìn)一步分析Asef的表達(dá)與NB組Shimada分型情況的關(guān)系。在NB細(xì)胞系SH-SY-5Y中通過慢病毒轉(zhuǎn)染后分成空白(A組)、Asef過表達(dá)(B組)和抑制組(C組),qRT-PCR檢測轉(zhuǎn)染后Asef在細(xì)胞系中的表達(dá),再通過Western Blot分別測定A、B、C組中β-catenin變化情況進(jìn)而分析Asef表達(dá)與β-catenin之間的聯(lián)系。結(jié)果50例NB、3例瘤旁組織和5例GN標(biāo)本有Asef表達(dá),主要的表達(dá)部分為瘤細(xì)胞的胞漿內(nèi),少量顯示于胞核中,在3組中Asef的陽性表達(dá)率分別為92.6%(NB),20%(瘤旁)和45.5%(GN),NB組和瘤旁、GN組之間差異分別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。NB預(yù)后良好型(FH)與預(yù)后差型(UFH)Asef表達(dá)的陽性率分別為74.1%,89.5%,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。SH-SY-5Y細(xì)胞系建立穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株后,通過qRT-PCR檢測A、B、C三組Asef/GAPDH表達(dá)量變化分別為0.997±0.028、1.443±0.066、0.773±0.035,三者間存在顯著差異(P0.05);對轉(zhuǎn)染后的SH-SY-5Y細(xì)胞進(jìn)行Western Blot檢測A、B、C組間Asef/GAPDH的表達(dá)分別為1.099±0.101、1.474±0.251、0.601±0.062,3組間存在顯著差異(P0.05),同時(shí)對β-catenin進(jìn)行檢測,A、B、C組β-catenin/GAPDH表達(dá)情況分別為1.129±0.023、1.511±0.170、0.543±0.007,3組間同樣存在明顯表達(dá)差異(P0.05)。在SH-SY-5Y細(xì)胞中,調(diào)控Asef的表達(dá)β-catenin蛋白也隨之變化,二者間成線性相關(guān)(r=0.948,P0.05)。結(jié)論NB組織與對照組,良、惡性腫瘤間Asef的表達(dá)強(qiáng)度均存在明顯差異,在NB細(xì)胞株SH-SY-5Y中,胞質(zhì)中β-catenin的表達(dá)量與Asef成正相關(guān),因此Asef的表達(dá)對NB的病理診斷分型具有一定的參考意義,同時(shí)也推測Asef可能存在通過調(diào)節(jié)β-catenin的表達(dá)情況來調(diào)控NB的生物學(xué)活性。意義本實(shí)驗(yàn)研究通過檢測NB不同病理組織中Asef的表達(dá),發(fā)現(xiàn)惡性程度高的腫瘤中Asef的表達(dá)情況較高,這將可能成為臨床判斷NB惡性程度的一個(gè)參考因素。同時(shí)通過構(gòu)建慢病毒轉(zhuǎn)染后的NB細(xì)胞系,調(diào)控Asef在細(xì)胞中的表達(dá)后,發(fā)現(xiàn)下游β-catenin在胞質(zhì)中的堆積量與之成正相關(guān)。根據(jù)此項(xiàng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以推斷Asef可能通過調(diào)控β-catenin來影響NB的發(fā)展,這可能將Asef蛋白與Wnt信號通路建立聯(lián)系,為以后NB發(fā)生機(jī)制的研究提供線索。
【圖文】：

慢病毒轉(zhuǎn)染后Asef在細(xì)胞中的表達(dá)情況

圖 3.慢病毒轉(zhuǎn)染后 Asef 蛋白在細(xì)胞中的表達(dá)情況2. 在 SH-SY-5Y 細(xì)胞中，，Asef 與 β-catenin 之間的關(guān)系在 SH-SY-5Y 細(xì)胞調(diào)節(jié) Asef 的表達(dá)后，觀察其胞質(zhì)中的 β-catenin表達(dá)量也發(fā)生化，Western blot 得出的結(jié)果顯示 A、B、C 組轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞中，Asef/GADPH 表
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R739.4

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本文編號：2688861