【摘要】：目的:觀察經(jīng)由局部神經(jīng)營養(yǎng)因子持續(xù)高表達作用所致腹外側中腦水管周圍灰質(the ventrolateral Periaqueductal Gray,vPAG)的神經(jīng)保護對癲癇發(fā)作的影響。方法:8~10周齡健康雄性SD大鼠80只隨機分成3組:攜帶BDNF基因病毒組(32只)、未攜帶BDNF基因病毒組(24只)、生理鹽水組(24只)。利用腦立體定位注射技術,分別向3組SD大鼠腦內(nèi)vPAG區(qū)域注射攜帶BDNF及GFP基因的腺相關病毒載體、未攜帶BDNF基因的同源腺相關病毒載體及生理鹽水。注射后48 h,取8只攜帶BDNF基因病毒組的大鼠的vPAG腦組織做冰凍切片,并在熒光鏡下拍照,應用GFP標記腺相關病毒載體檢測注射部位的準確性。在注射后的第3天、6天、10天、15天每組每個時間點取6只大鼠vPAG活體組織,應用western blot從蛋白水平檢測基因導入后各時間節(jié)點vPAG局部BDNF的表達量變化。另選擇8~10周健康雄性SD大鼠120只分成3組:攜帶BDNF基因病毒組(40只)、未攜帶BDNF基因組(40只)、生理鹽水組(40只)。利用腦立體定位注射技術,分別向3組大鼠腦內(nèi)vPAG區(qū)域注射攜帶BDNF基因的腺相關病毒載體,未攜帶BDNF基因的同源腺相關病毒載體,生理鹽水�；驅�7天后每組取SD大鼠20只予以匹羅卡品腹腔注射致急性癲癇發(fā)作,通過行為學記錄方法觀察BDNF基因導入vPAG對大鼠急性癲癇發(fā)作的影響�；驅�3天后每組取SD大鼠20只予以氯化鋰-匹羅卡品腹腔注射致癲癇持續(xù)狀態(tài)(Status Epilepticus,SE),通過錄像行為記錄方法觀察BDNF基因導入vPAG對大鼠癲癇持續(xù)狀態(tài)后不同時間點癲癇自發(fā)性發(fā)作的影響(癲癇持續(xù)狀態(tài)后第10~50天)。結果:顯微熒光鏡下GFP在vPAG區(qū)域發(fā)出綠色熒光。在立體定位注射后的第3天、6天、10天、15天不同時間點上,與未攜帶BDNF基因病毒組、生理鹽水組比較,攜帶BDNF基因病毒組vPAG的BDNF在western blot表達明顯增高(P均0.05)。且攜帶BDNF基因病毒組的BDNF在3天、6天、10天的表達量逐漸增高~1,第15天較第10天無明顯統(tǒng)計學差異。匹羅卡品所致急性癲癇模型中,攜帶基因病毒組較未攜帶基因病毒組、生理鹽水組、空白對照組的大鼠發(fā)作持續(xù)時間及發(fā)作強度上均有顯著性差異(P均0.01)。氯化鋰-匹羅卡品致癲癇持續(xù)狀態(tài)模型中,攜帶基因病毒組較未攜帶基因病毒組、生理鹽水組、空白對照組在癲癇持續(xù)狀態(tài)后10~50天大鼠自發(fā)性癇性發(fā)作頻率、持續(xù)時間及嚴重程度上均有顯著性差異(P均0.01)。結論:vPAG局部腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子持續(xù)高表達可抑制癲癇的發(fā)展。
【圖文】：

“*”代表實驗組與對照組比較，P＜0.05；“**”代表實驗組與對照組比較，P＜0.01

“*”代表實驗組與對照組比較，，P＜0.05；“**”代表實驗組與對照組比較，P＜0.01
【學位授予單位】：安徽醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R742.1

【參考文獻】

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1 Naoki Adachi;Tadahiro Numakawa;Misty Richards;Shingo Nakajima;Hiroshi Kunugi;;New insight in expression, transport, and secretion of brain-derived neurotrophic factor: Implications in brainrelated diseases[J];World Journal of Biological Chemistry;2014年04期

本文編號：2688215