【摘要】：目的:通過測定中樞性眩暈患者及正常健康查體人群血液中兩種游離單糖的結(jié)果,并測定降解后單糖的峰面積,進(jìn)行分析比較,以觀察和分析血清中單糖的水平與中樞性眩暈患者之間的相關(guān)性,從而期望為中樞性眩暈患者的臨床診斷提供一種新的血清生物標(biāo)志物。方法:選取2016年12月至2017年12月在棗莊市中醫(yī)醫(yī)院住院或者就診的患者,年齡在40歲至80歲之間;臨床就診或者住院時,其主訴為眩暈;臨床診斷均根據(jù)2010年的《眩暈診治專家共識》中的,關(guān)于中樞性眩暈的臨床診斷;其他的需要符合文中的納入本研究的標(biāo)準(zhǔn),同時患者本人及其家屬均同意本研究的內(nèi)容,并且簽署了相關(guān)的知情同意書。根據(jù)上述,共有125名眩暈的病人被納入到本研究中,組成為患者組,另外,以青醫(yī)附院健康查體人群共89例,組成了健康組。首先根據(jù)單糖標(biāo)準(zhǔn)品的HPLC分析的結(jié)果,繪制出兩種游離單糖的標(biāo)準(zhǔn)曲線,從而得到回歸方程。然后對血清樣本進(jìn)行水解、衍生及HPLC分析,并得到樣本的液相色譜圖,計算出樣本中游離單糖的濃度,用方差分析及相關(guān)性分析的統(tǒng)計學(xué)方法比較各組的游離單糖濃度,并通過ROC曲線評估游離單糖對中樞性眩暈患者的診斷價值。再通過高效液相色譜法測定降解后單糖的峰面積,建立降解單糖與眩暈患者之間的聯(lián)系,并通過各種降解單糖的ROC曲線評估降解單糖對中樞性眩暈患者的診斷價值。結(jié)果:(1)通過測定兩種游離單糖,患者組和健康體檢組血液中的甘露糖含量分別為91.62μmol/L和73.50μmol/L,ROC曲線顯示甘露糖具有更高的敏感度,為96%,特異性為44%,曲線下面積為0.72,葡萄糖的含量分別為5679μmol/L和6071μmol/L,上述組間的差異均被視為具有統(tǒng)計學(xué)的意義(P0.05)。(2)在比較血清游離單糖的實(shí)驗(yàn)結(jié)果時本論文引入了葡萄糖比甘露糖(G/M),利用Graphpad prism6.0繪制ROC曲線,通過計算ROC曲線下面積,G/M有較強(qiáng)的敏感度和特異性,分別為79%和87%,曲線下面積為0.89,分析結(jié)果具有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.0001)。(3)通過高效液相色譜法測定降解后單糖的峰面積,患者組和健康體檢組血液中的降解后甘露糖峰面積分別為1.473和3.420,ROC曲線顯示敏感性91%,特異性74%,降解后葡萄糖峰面積分別為8.379和15.29,ROC曲線顯示敏感性86%,特異性72%,降解后半乳糖峰面積分別為2.571和3.905,ROC曲線顯示敏感性87%,特異性63%,降解后半乳糖胺峰面積分別為1.589和1.138,ROC曲線顯示敏感性57%,特異性85%,降解后葡萄糖胺峰面積分別為17.39和17.13,降解后巖藻糖峰面積分別為0.6549和0.2734,上述組間的差異均被視為具有統(tǒng)計學(xué)的意義(P0.05)。結(jié)論:中樞性眩暈患者單糖水平與健康正常人不同,游離單糖中以甘露糖對中樞性眩暈患者的診斷價值較高,降解單糖中以甘露糖、葡萄糖、半乳糖的診斷價值較高,因此檢測血清中的單糖水平有助于對中樞性眩暈患者的診斷,有望能夠?yàn)橹袠行匝灮颊叩呐R床診斷提供一種新的血清生物標(biāo)志物。
【圖文】：

獲得了該樣品中 2 種單糖的峰面積數(shù)據(jù)，通過統(tǒng)計學(xué)分析計算每一種單糖的 RSD值。3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果3.1 血清樣品水解條件的優(yōu)化實(shí)驗(yàn)過程中通過向血清樣品中加入標(biāo)準(zhǔn)品溶液，經(jīng)過水解衍生后上樣，考察水解過程中 2 種單糖在三氟乙酸和血清環(huán)境處理過程中的損失率，實(shí)驗(yàn)測得甘露糖、葡萄糖的損失率依次為 15.4 %和 22.0 %。本論文通過烘箱和離心濃縮儀對水解后的血清樣品進(jìn)行干燥，干燥溫度設(shè)定為50 ℃，反應(yīng)時間均為 10h�？疾煺婵斩鹊母叩蛯ρ鍢悠匪膺^程的影響。圖 1-1表明通過烘箱進(jìn)行干燥的樣品，甘露糖、葡萄糖峰面積約為離心濃縮儀組峰面積的20 %，從而表明真空度對干燥過程非常重要，在離心濃縮過程中真空泵的效率及穩(wěn)定性、管路連接的密封性會使儀器的的真空度產(chǎn)生差異或波動，從而導(dǎo)致樣品的峰面積產(chǎn)生巨大的差距，因此在離心濃縮過程中通過真空表嚴(yán)格控制真空度，對保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性有著很重要的意義。

第一部分 單糖的 HPLC 分析方法峰面積最大，且各種單糖的峰面積差距最小均在 30000 左右，，但是各種單糖進(jìn)行高效液相檢測時峰型及分離度較差，且在單糖濃度在 0.5 mg/mL 時已經(jīng)超過了色譜柱柱容量，出現(xiàn)了平頂峰（見圖 1-2 A）。通過氫氧化鈉進(jìn)行衍生后用鹽酸調(diào)節(jié) pH 至中性后萃取檢測，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，甘露糖、葡萄糖的峰面積要比氨水衍生時峰面積要小 50 %，約為 15000 左右，但氫氧化鈉中性組的峰型明顯優(yōu)于氨水組，且無平頂峰（見圖 1-2 B）。因此我們選擇氫氧化鈉作為 PMP 衍生化過程中的堿性創(chuàng)建試劑。表 1-1 0.5 mg/mL 2 種游離單糖不同堿性創(chuàng)建試劑的峰面積0.5 mg/mL 單糖標(biāo)準(zhǔn)品 氨水組峰面積 氫氧化鈉中性組峰面積Man 30093.1 15932.9Glc 40923.8 13131.1
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R741

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本文編號：2685958