發(fā)布時(shí)間：2020-05-26 22:34

【摘要】：目的:卒中后抑郁(Post-stroke depression)是一組發(fā)病率很高的卒中并發(fā)癥,其起病隱匿并對患者生活質(zhì)量造成了極大影響。本研究中我們通過研究對卒中后抑郁小鼠腦中白介素-18(interleukin-18,IL-18)含量是否增高;IL-18是否能夠誘導(dǎo)小鼠卒中后抑郁的產(chǎn)生等一系列研究,來探索IL-18在小鼠卒中后抑郁發(fā)病過程中所起的相關(guān)機(jī)制,并給予干預(yù)為臨床卒中后抑郁患者的治療提供指導(dǎo)。方法:選用體重28-30g的雄性ICR小鼠,隨機(jī)分為假手術(shù)(Sham)組、假手術(shù)+應(yīng)激(Stress)組、缺血再灌注(I/R)組、缺血再灌注+應(yīng)激(SIR)組,建立卒中后抑郁小鼠模型。我們首先利用行為學(xué)實(shí)驗(yàn)評估模型建立情況,然后取缺血側(cè)腦組織,并采取Western blot方法檢測各組標(biāo)本中IL-18蛋白表達(dá)量的改變;采用免疫組織化學(xué)(DAB)染色評估卒中后抑郁小鼠腦中IL-18蛋白的分布情況;免疫熒光染色用來定位腦中IL-18由何種細(xì)胞分泌釋放;采用立體定位注射方法向小鼠不同腦區(qū)微量注射小鼠重組IL-18蛋白,使用懸尾實(shí)驗(yàn)(TST)和強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)(FST)評估小鼠是否被誘導(dǎo)出抑郁樣行為產(chǎn)生;采用立體定位注射IL-18結(jié)合蛋白(IL-18BP)觀察其對卒中后抑郁小鼠的治療情況;采用NKCC1受體拮抗劑布美他尼,評估布美他尼對立體定位注射IL-18誘導(dǎo)的抑郁樣小鼠的治療情況,采用免疫共沉淀(CO-IP)方法檢測IL-18R和NKCC1之間有無相互作用。結(jié)果:和Sham組相比,SIR組中IL-18蛋白含量在造模1天時(shí)即開始升高,并且在3天和7天達(dá)到高峰,于第14天開始下降;免疫熒光染色顯示IL-18與小膠質(zhì)細(xì)胞在腦中存在共定位關(guān)系,免疫組織化學(xué)染色顯示IL-18存在于SIR鼠缺血半腦的皮層、紋狀體、杏仁核部位;立體定位注射重組IL-18至不同腦區(qū),海馬、紋狀體、杏仁核,發(fā)現(xiàn)只有杏仁核區(qū)域能顯著誘導(dǎo)小鼠抑郁樣行為產(chǎn)生;SIR小鼠給予IL-18BP則能夠明顯改善小鼠卒中后抑郁行為;免疫共沉淀顯示NKCC1蛋白和IL-18R之間存在相互作用,并且給予NKCC1抑制劑布美他尼后,對由IL-18誘導(dǎo)的小鼠抑郁樣行為起到很好的逆轉(zhuǎn)。結(jié)論:本研究證明了IL-18在卒中后抑郁模型小鼠腦中的含量增加,在卒中后抑郁的發(fā)生發(fā)展中起了重要作用;卒中后抑郁鼠腦中IL-18蛋白含量在一周左右達(dá)到高峰,伴隨小鼠抑郁樣行為產(chǎn)生;注射重組IL-18到小鼠杏仁核區(qū)域可以誘導(dǎo)小鼠抑郁樣行為的產(chǎn)生;給予布美他尼阻斷NKCC1受體的生物學(xué)效應(yīng),能夠顯著改善小鼠因IL-18誘導(dǎo)的抑郁樣行為,這提示我們IL-18可能是卒中后抑郁治療的潛在靶點(diǎn),為卒中后抑郁的治療提供了新的思路。
【圖文】：

認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié) 果1 給予小鼠缺血-再灌注和空間行為限制后小鼠表現(xiàn)出抑郁樣表型。首先為了確保模型的穩(wěn)定可靠，參照本實(shí)驗(yàn)室之前發(fā)表文章的方法[31]，建立卒中后抑郁模型，并在造模后第 7 天和第 14 天分別通過 TST、FST 行為學(xué)實(shí)驗(yàn)顯示：相對于 IR 組，SIR 組小鼠在第一周就顯示出抑郁樣行為，在 2 周時(shí)其差異更加明顯，說明卒中后抑郁模型造模成功。（圖 1）A B

-18 蛋白在 PSD 不同造模時(shí)間點(diǎn)的含量：（A）缺血后 1、3、7、含量的變化；（B）各個(gè)時(shí)間點(diǎn) IL-18 表達(dá)量相對于內(nèi)參 β-Tubuli結(jié)果。N=3-4，*P < 0.05。小鼠腦組織 IL-18 表達(dá)分布進(jìn)一步驗(yàn)證 SIR 造模小鼠腦中 IL-18 分布情況，首先我們選取多的時(shí)間點(diǎn)，也就是造模三天后的小鼠，，選取實(shí)驗(yàn)組和對照組。IR3 天的小鼠腦冠狀面冰凍切片免疫組化染色可以看出，小鼠缺缺血側(cè)皮層，IL-18 在 SIR 組小鼠梗死側(cè)含量增高，主要在皮層部位增多，而在非梗死側(cè)含量未增高；IR 組小鼠梗死側(cè)和非梗不增高。（圖 3）
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R743.3;R749.4

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本文編號：2682500