發(fā)布時間：2020-05-26 06:34

【摘要】：缺血性腦卒中(Ischemicstroke,IS)是常見的腦部疾病,常用神經保護劑進行治療。然而,由于血管阻塞的病理狀態(tài)和血腦屏障(Bloodbrain barrier,BBB)的存在,使得藥物難以入腦,極大的限制了其治療效果。因此,實現(xiàn)藥物在缺血部位的富集是IS治療的關鍵。本論文為實現(xiàn)腦卒中治療藥物的腦缺血部位的靶向遞送,從6種人參皂苷中選出治療IS藥效最佳的人參皂苷作為模型藥物;在此基礎上,根據缺血再灌注(Ischemia/Reperfusion,I/R)后白細胞在缺血炎癥部位聚集的特性,利用白細胞介導的方式遞送藥物入腦。通過制備人參皂苷脂質體,并在脂質體表面修飾PGP靶頭,介導中性粒細胞內吞脂質體,并攜帶其跨越BBB,到達腦內炎癥區(qū)域;最后,中性粒細胞將脂質體轉移入病變神經元細胞內,緩慢釋放藥物,達到藥物在病變部位富集、發(fā)揮治療作用的目的。1.人參皂苷對IS的神經保護作用比較及機制研究通過建立CoCl2誘導PC12細胞損傷模擬I/R損傷模型和大鼠大腦中動脈閉合術(Middle cerebral artery occlusion,MCAO)再灌注模型,比較6種人參皂苷對IS的體內外藥效。結果表明,人參皂苷Rb1和Rg3對IS的體內外藥效最為顯著,并且Rb1和Rg3同屬人參二醇A型,說明人參皂苷對IS的治療效果可能與其分子結構有關。對人參皂苷治療IS的藥效作用機制研究結果表明,MCAO模型大鼠給予人參皂苷干預后,大鼠腦半暗帶內的TNF-α、IL-1β、IL-6釋放量和TLR4、NF-κBP65、MyD88的表達量減少,SIRT1的表達量升高。說明人參皂苷可通過抑制TLR4/MyD88信號通路和/或激活SIRT1/NF-κB信號通路來干預炎癥因子表達,發(fā)揮對IS的治療作用。2.PGP修飾腦靶向脂質體的制備與腦靶向作用研究首先成功合成PGP肽作為靶頭,并篩選出PGP靶頭最佳修飾比例為3%。采用薄膜分散法制備人參皂苷脂質體Rb1-Lp、Rg3-Lp、PGP-Rb1-Lp和PGP-Rg3-Lp,并對脂質體進行表征。結果表明4種脂質體平均粒徑均小于11Onm,PDI均小于0.3,人參皂苷包封率均在80%以上。透射電鏡觀察脂質體大小均一、形態(tài)圓整、輪廓清晰,符合實驗要求。采用體內外試驗對脂質體進行了腦靶向性的評價。Transwell實驗結果驗證了中性粒細胞攜帶脂質體跨越BBB的過程。小動物活體成像結果表明,人參皂苷Rb1、Rg3和PGP靶頭均能顯著增加脂質體在腦部的聚積,并且人參皂苷和PGP靶頭具有協(xié)同靶向效果,可有效延長脂質體在腦部的滯留時間。與其他組相比,PGP-Rb1-Lp和PGP-Rg3-Lp組能夠明顯增加藥物在腦缺血部位的聚積,具有顯著的二級腦靶向性。3.PGP-Rb1-Lp和PGP-Rg3-Lp的藥效學評價和機制研究TTC染色和MRI結果表明,PGP-Rb1-Lp和PGP-Rg3-Lp較人參皂苷游離藥能夠明顯較少腦梗死面積和腦水腫程度,顯著提高IS的治療效果。對其進行機制研究,結果表明,MCAO大鼠給予PGP-Rb1-Lp和PGP-Rg3-Lp干預后,腦缺血區(qū)HMGB1、p65、TNF-α、iNOS、NO、IL-6的釋放量和caspase-3、caspase-9的蛋白表達量明顯降低,說明人參皂苷可能通過抑制炎癥反應和減少細胞凋亡的途徑治療腦缺血損傷。綜上所述,本論文比較6種人參皂苷對IS的藥效,確定了人參皂苷Rb1和Rg3的治療效果最佳,并進行了作用機制研究。然后成功構建了 PGP修飾的載人參皂苷脂質體腦靶向遞藥系統(tǒng),并且驗證了該給藥系統(tǒng)的多級腦靶向性,最后對PGP-Rb1-Lp和PGP-Rg3-Lp進行藥效學評價和機制研究。結果顯示所制備的PGP修飾人參皂苷脂質體具有顯著的腦靶向性,可有效提高對IS的治療效果,研究結果為新型腦卒中治療藥物的開發(fā)和改善藥物的腦靶向遞藥提供了基礎和思路。
【學位授予單位】：中央民族大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R743.3

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本文編號：2681427