【摘要】：目的:建立大鼠缺血性腦卒中動物模型,觀察曲克蘆丁腦蛋白水解物對大腦中動脈栓塞后大鼠神經(jīng)血管單元的作用,探討其可能的作用機(jī)制。方法:120只雄性SD大鼠,采用隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分成3組:假手術(shù)組(SHAM組,n=40)、大腦中動脈栓塞組(MCAO組,n=40)、MCAO+曲克蘆丁給藥組(n=40)。MCAO組參照何敏等改良法制備大鼠大腦中動脈栓塞永久模型,即將硅膠栓線通過頸總動脈,經(jīng)過頸內(nèi)動脈到達(dá)大腦中動脈開口處。MCAO+曲克蘆丁給藥組在MCAO術(shù)后立即腹腔注射曲克蘆丁腦蛋白水解物注射液3ml/kg,3次/日,連用3 d,MCAO組給予相同劑量的生理鹽水。分別于MCAO后1d、3d、7d、14d,每組各取10只大鼠,采用改良神經(jīng)功能缺損評分(m NSS)評價神經(jīng)功能的損傷程度。MCAO后3d,每組各取5只大鼠,進(jìn)行7.0 T高分辨率核磁掃描,分別用T2序列和ASL序列表示梗死體積和梗死區(qū)域血流變化;每組各取10只大鼠,進(jìn)行尼氏染色及免疫熒光染色,評價神經(jīng)元的存活率、形態(tài)改變及小膠質(zhì)細(xì)胞、星形膠質(zhì)細(xì)胞、小膠質(zhì)細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞及血腦屏障緊密連接的表達(dá);每組各取10只大鼠,采用Western blot法檢測神經(jīng)型一氧化氮合酶(n NOS)、誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(i NOS)、內(nèi)皮型一氧化氮合酶(e NOS)及3-硝基酪氨酸(3-NT)的表達(dá);上述腦組織,余下部分用于酶聯(lián)免疫吸附劑測定(ELISA),采用ELISA法檢測腦組織中一氧化氮(NO)的含量;每組各取5只大鼠,取半暗帶部位腦組織,透射電鏡觀察血腦屏障緊密連接。結(jié)果:MCAO后3d、7d、14d出現(xiàn)嚴(yán)重的神經(jīng)功能缺損,而MCAO+曲克蘆丁給藥組較MCAO組m NSS評分均顯著降低;MCAO后3d,大腦中動脈供血區(qū)在磁共振成像T2序列上呈高信號,在ASL序列上顯示血流信號減低,曲克蘆丁治療組與MCAO組相比,T2序列顯示梗死體積顯著下降,ASL序列顯示血流信號顯著增加;尼氏染色結(jié)果顯示MCAO后神經(jīng)元數(shù)量減少,細(xì)胞皺縮變形,曲克蘆丁治療組上述改變顯著減輕;免疫熒光染色顯示MCAO后半暗帶小膠質(zhì)細(xì)胞及星形膠質(zhì)細(xì)胞增多,內(nèi)皮細(xì)胞及血腦屏障的標(biāo)記分子減少,曲克蘆丁治療組上述改變減少;透射電鏡結(jié)果顯示,MCAO后血腦屏障緊密連接破壞,微血管內(nèi)皮細(xì)胞間出現(xiàn)明顯空隙,曲克蘆丁治療組內(nèi)皮細(xì)胞間空隙明顯變小;蛋白電泳結(jié)果顯示,MCAO后n NOS、i NOS、e NOS單體及3-NT均增多,曲克蘆丁治療組較MCAO組上述物質(zhì)顯著減少;ELISA結(jié)果顯示,MCAO后NO含量明顯下降,曲克蘆丁治療組NO含量顯著增加。結(jié)論:曲克蘆丁腦蛋白水解物可以通過減少n NOS、i NOS、e NOS單體的表達(dá),增加NO而減少3-NT的產(chǎn)生,對大腦中動脈栓塞后大鼠神經(jīng)血管單元產(chǎn)生保護(hù)作用。
【學(xué)位授予單位】：陜西中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R743.3

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2679806