【摘要】：背景:神經膠質瘤是顱內最常見的惡性腫瘤,約占原發(fā)性腦和中樞神經系統(tǒng)惡性腫瘤的80%。具有高侵襲性,易復發(fā),高死亡率等特性。雖然近年來顯微外科技術、神經影像技術以及放化療治療方案等方面均取得了長足的進步,但對于膠質瘤患者,尤其是高級別的膠質瘤患者,預后仍然不佳。因此,需要進一步深入了解膠質瘤發(fā)生發(fā)展機制,探索新的膠質瘤分子及靶向治療方法。隨著近年來對miRNA研究的深入,其在包括膠質瘤在內的多種腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用日益凸顯。miR-218-5p在多種癌癥中表達下調,并與臨床分期、預后和轉移相關。miR-218-5p在膠質瘤發(fā)生發(fā)展中的作用及其分子機制仍需進一步研究。目的:1.通過分析膠質瘤中差異表達miRNA選取miR-218-5p為研究對象,分析miR-218-5p在膠質瘤組織中的表達及與膠質瘤患者預后之間的關系。2.通過以U251細胞為研究對象研究miR-218-5p對膠質瘤細胞增殖、侵襲、遷移及凋亡的影響。3.預測并驗證miR-218-5p的靶基因為HMGB1,研究miR-218-5p抑制膠質瘤生長的分子機制。通過動物實驗驗證miR-218-5p在體內對膠質瘤生長的影響及miR-218-5p與HMGB1的靶向關系。方法:1.利用生物信息學方法篩選膠質瘤中差異表達miRNA,通過實時熒光定量PCR法檢測miR-218-5p在膠質瘤中的表達。分析膠質瘤中miR-218-5p表達水平與臨床預后之間的關系。2.以U251為研究對象,通過轉染miR-218-5p mimic過表達miR-218-5p,利用CCK-8實驗、細胞劃痕愈合實驗、Transwell小室實驗、流式細胞術分別檢測miR-218-5p對U251細胞增殖、侵襲、遷移和凋亡的影響。3.利用生物信息學方法預測并篩選出miR-218-5p的靶基因HMGB1。通過qRT-PCR法檢測HMGB1在膠質瘤組織及細胞中的表達。利用雙熒光素酶靶基因報告實驗驗證miR-218-5p與HMGB1的靶向關系。4.構建裸鼠皮下膠質瘤移植模型及Wistar大鼠顱內原位膠質瘤模型,通過瘤內注射agomir-218-5p過表達miR-218-5p,通過頭顱能譜CT掃描觀察腫瘤大小,HE染色觀察病理學改變,Western Blot和免疫組化檢測HMGB1以及增殖相關蛋白的表達。結果:1.通過GEO數(shù)據篩選出目的miRNA為miR-218-5p,通過QRT-PCR分析結果顯示miR-218-5p在膠質瘤及正常腦組織中差異表達,在膠質瘤中表達下調。膠質瘤中miR-218-5p的表達水平與膠質瘤患者預后相關,miR-218-5p低表達提示膠質瘤患者預后不良。2.CCK-8細胞增殖實驗顯示miR-218-5p能夠抑制膠質瘤細胞的增殖。3.細胞劃痕愈合實驗及Transwell小室實驗結果顯示miR-218-5p能夠抑制膠質瘤細胞侵襲及遷移。4.流式細胞儀檢測細胞凋亡結果顯示miR-218-5p能誘導膠質瘤細胞凋亡。5.預測表明HMGB1可能是miR-218-5p的靶基因,HMGB1在膠質瘤中明顯上調表達。雙熒光素酶靶基因驗證實驗結果顯示,miR-218-5p可能通過與HMGB1 mRNA 3'UTR上的位點結合調控基因的表達。6.動物體內實驗結果顯示miR-218-5p在體內靶向抑制HMGB1的表達抑制裸鼠皮下膠質瘤的生長。結論:miR-218-5p在膠質瘤組織中表達下調,通過靶向調控HMGB1的表達抑制膠質瘤細胞的增殖、侵襲及遷移,并誘導其凋亡。在體內miR-218-5p靶向調控HMGB1抑制膠質瘤生長。
【圖文】：

miR-218-5p 靶向調控 HMGB1蘭州大學碩士學位論文 對膠質瘤的抑制作用及機制研究進行數(shù)據分析，使用 GraphPad Prism 7 軟件作圖。數(shù)據用平均值±標準差形式表示。兩組間差異比較用獨立樣本 t 檢驗，患者生存曲線使用 Kaplan-Meier 法繪制，使用對數(shù)秩檢驗進行統(tǒng)計分析。P<0.05 表示存在統(tǒng)計學差異。1.4 實驗結果1.4.1 生物信息學篩選膠質瘤中差異表達 miRNA通過對 NCBI 膠質瘤 GEO 數(shù)據分析，選取在正常腦組織及不同級別膠質瘤中具有差異表達的 miRNA,進行熱圖聚類后的結果如圖（圖 1-1）所示。結果顯示，miR-218-5p 在膠質瘤組織和正常腦組織中的表達具有明顯差異，在膠質瘤組織中呈下調表達，并隨著膠質瘤級別的增加其表達量逐漸減低。

圖 1-2 miR-218-5p 在正常腦組織和膠質瘤中的表達1.4.3 miR-218-5p 的表達水平與膠質瘤患者預后相關對納入研究的 66 例患者進行電話隨訪，術后隨訪時間在 9~69 個月之間，，平均隨訪時間（22.4±6.7 月）。通過繪制患者的生存曲線（Kaplan-Meier 法）顯示，miR-218-5p 低表達的患者的總生存期顯著低于高表達的患者。同樣，miR-218-5p低表達患者的無進展生存期顯著低于高表達的患者。表明 miR-218-5p 在膠質瘤組織中的表達水平與膠質瘤患者的預后顯著相關（P <0.001；圖 1-3）。
【學位授予單位】：蘭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R739.41

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本文編號：2673557