【摘要】：目的:隨著現(xiàn)代社會(huì)的進(jìn)步和人口老齡化趨勢(shì),腦卒中的發(fā)病率不斷升高,成為全球?qū)е滤劳龊蜌埣驳闹匾?據(jù)統(tǒng)計(jì),大約65%-80%的卒中患者為缺血性卒中(Ischemic Stroke,IS)。根據(jù)TOAST分型,大動(dòng)脈粥樣硬化型(Large artery atherosclerosis,LAA)腦梗死被認(rèn)為是缺血性卒中的最為常見(jiàn)的發(fā)病類(lèi)型,這種類(lèi)型卒中發(fā)病的主要原因?yàn)閯?dòng)脈粥樣硬化(atherosclerosis,AS)。目前有較多研究發(fā)現(xiàn),炎癥貫穿于動(dòng)脈粥樣硬化的始終,NLRP3(Nucleotide-binding domain-like receptor protein 3)炎癥小體參與到動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中。斑塊處的炎癥反應(yīng)與其纖維帽的破裂有較大的相關(guān)性,來(lái)源于不穩(wěn)定斑塊破裂處的栓子阻塞遠(yuǎn)端血管導(dǎo)致了腦組織缺血,進(jìn)而導(dǎo)致梗死的發(fā)生,利用經(jīng)顱多普勒超聲(Transcranial Doppler,TCD)監(jiān)測(cè)到微栓子信號(hào)(Microembolic signals,MES)的出現(xiàn)高度提示腦梗死的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn),本研究旨在探討中國(guó)北方漢族人群中NLRP3基因多態(tài)性對(duì)LAA型腦梗死易感性影響及該位點(diǎn)基因多態(tài)性與微栓子信號(hào)的相關(guān)性。方法:在本研究中,病例組選擇293例診斷為L(zhǎng)AA型腦梗死的患者,平均年齡為62.89±12.58歲,對(duì)照組選擇265例同時(shí)期健康查體者,平均年齡為61.27±10.32歲,采用經(jīng)顱多普勒超聲(TCD)對(duì)所有病例組患者在入院后72小時(shí)內(nèi)進(jìn)行微栓子監(jiān)測(cè),監(jiān)測(cè)時(shí)間為60分鐘,并根據(jù)監(jiān)測(cè)的結(jié)果將病例組患者分為MES陽(yáng)性組和MES陰性組。應(yīng)用問(wèn)卷調(diào)查法收集所有研究對(duì)象的一般臨床資料,抽取入組者空腹肘靜脈血,應(yīng)用DNA提取試劑盒進(jìn)行全血基因組DNA的提取,選取NLRP3基因3個(gè)常見(jiàn)單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)rs4612666、rs10754558、rs7512998,應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性(Polymerase Chain Reaction-Restriction Fragment Length Polymorphism,PCR-RFLP)以及直接進(jìn)行基因測(cè)序的方法來(lái)明確基因分型。采用SHEsis在線(xiàn)軟件進(jìn)行基因分析及單倍型分析。用SPSS20.0軟件對(duì)所有結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,P0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果:病例組中微栓子陽(yáng)性患者共76例,陽(yáng)性率為25.94%。經(jīng)Logistic回歸分析校正相關(guān)危險(xiǎn)因素后,結(jié)果發(fā)現(xiàn)對(duì)于rs4612666多態(tài)性位點(diǎn),病例組中TT基因型頻率高于對(duì)照組(校正P=0.001),MES陽(yáng)性組中TT基因型頻率高于MES陰性組(校正P=0.015);病例組中T等位基因頻率高于對(duì)照組(P=0.001),MES陽(yáng)性組中T等位基因頻率高于MES陰性組(P=0.015)。rs4612666、rs10754558、rs7512998的3個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)之間存在不完全連鎖不平衡,CCC單倍型在對(duì)照組分布高于病例組(P=0.009),TGT單倍型在對(duì)照組分布低于病例組(P=0.019)。rs10754558和rs7512998基因型及等位基因頻率在病例組和對(duì)照組及MES陽(yáng)性組和陰性組之間比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。結(jié)論:NLRP3 rs4612666位點(diǎn)基因多態(tài)性可能與中國(guó)漢族北方人群LAA型腦梗死易感性相關(guān),TT基因型及T等位基因可能增加患病風(fēng)險(xiǎn)。CCC單倍型可能降低發(fā)病風(fēng)險(xiǎn),TGT單倍型可能增加發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。NLRP3 rs4612666位點(diǎn)多態(tài)性與MES相關(guān),TT及T等位基因可能增加MES發(fā)生率。提示NLRP3基因rs4612666位點(diǎn)多態(tài)性可能通過(guò)影響斑塊處的炎癥反應(yīng)來(lái)影響斑塊的穩(wěn)定性,進(jìn)而影響LAA型腦梗死的發(fā)生。
【圖文】：

圖 1 基因組 DNA 提取步驟酸蛋白分析儀檢測(cè) DNA 質(zhì)量用核酸蛋白分析儀測(cè) OD260/OD280 值，測(cè)定值在 1.8-2.0 間視為 DNA合格，無(wú) RNA 和蛋白質(zhì)污染，將合格的 DNA 保存于-20℃冰箱中用來(lái)進(jìn)行型鑒定。物設(shè)計(jì)、合成及稀釋?zhuān)?）引物的設(shè)計(jì)合成：rs4612666、rs10754558 采用 PCR-RFLP 方法進(jìn)行基鑒定，rs7512998 采用直接測(cè)序法。北京睿博興科生物科技有限公司設(shè)計(jì)、本實(shí)驗(yàn)引物，并且通過(guò)仔細(xì)閱讀相關(guān)文獻(xiàn)及查閱 NCBI 基因庫(kù)等資料，證明序列符合要求。序列：rs4612666：F:TGCTTAAGGCCATTAATTGTGR:CTCCACCATGGACAAGGAAGrs10754558：F:CCGGGCATGGTGGCTCA

結(jié)果結(jié)果因型結(jié)果判讀s4612666 基因型結(jié)果PCR 擴(kuò)增后產(chǎn)生長(zhǎng)度為 260bp 的片段，TT 基因型產(chǎn)物沒(méi)有 BbsI 酶切夠被酶切，經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳后在 260bp 處顯示條帶；TC 基因型產(chǎn)物bsI 酶切，，在 260，102，158bp 處顯示條帶；CC 基因型產(chǎn)物被 BbsI 酶158bp 處顯示片段。
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類(lèi)號(hào)】：R743.3

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本文編號(hào)：2668552