【摘要】：目的:探究丁苯酞給藥對(duì)于腦梗死模型鼠腦梗死體積和神經(jīng)功能恢復(fù)的影響。方法:C57BL/6J小鼠分為假手術(shù)組(sham組),生理鹽水組(vehicle組)及丁苯酞給藥組(NBP組)。光化學(xué)腦梗造模前均對(duì)小鼠進(jìn)行為期三天的轉(zhuǎn)棒訓(xùn)練。造模后,vehicle組及NBP組分別給與生理鹽水及2mg/ml的NBP溶液,10ul/g腹腔注射。分別于造模前,造模后1、3、7、14、21、28天用m NSS量表及轉(zhuǎn)棒試驗(yàn)評(píng)估小鼠神經(jīng)功能恢復(fù)情況。第7天采用Nissl染色測定小鼠腦梗死體積。結(jié)果:造模后第14、21及第28天,對(duì)比vehicle組,NBP組小鼠m NSS評(píng)分較低(P0.05);造模后第21、28天,vehicle組轉(zhuǎn)棒潛伏期均低于NBP組(P0.05);第7天時(shí),NBP組平均梗死體積占比小于Vehicle組(P0.05)。結(jié)論:NBP給藥可明顯改善光化學(xué)腦梗兩周后后神經(jīng)功能缺損情況,且可減小造模后一周梗死體積。目的:探究光化學(xué)腦梗后NBP給藥是否能夠促進(jìn)梗死周邊區(qū)神經(jīng)血管再生以及NBP干預(yù)下的腦梗死小鼠神經(jīng)細(xì)胞自噬活性變化。方法:將C57BL/6J小鼠分為四組:sham組、vehicle組、NBP組及NBP+3-MA組。vehicle組于造模后第一天給與生理鹽水,NBP及NBP+3-MA組給與2mg/ml的NBP溶液,均為10ul/g腹腔注射。此外,NPB+3-MA組還需給與自噬抑制劑3-MA。造模后持續(xù)一周Brdu給藥,7天后處死小鼠免疫熒光染色觀察Brdu、DCX、CD31及Neu N陽性細(xì)胞數(shù)目。側(cè)腦室室管膜下區(qū)(SVZ區(qū))Brdu+/DCX+細(xì)胞代表新生未成熟神經(jīng)元;梗死周邊區(qū)Brdu+/CD31+細(xì)胞代表新生血管內(nèi)皮細(xì)胞,Neu N+細(xì)胞可評(píng)估梗死周邊存活神經(jīng)元。梗死后14天取小鼠梗死組織,Western blot檢測自噬相關(guān)蛋白P62、Beclin-1、LC3B表達(dá)情況。結(jié)果:免疫熒光染色結(jié)果顯示,相較vehicle組,NBP組及NBP+3-MA的小鼠SVZ區(qū)DCX+/Brdu+細(xì)胞明顯較多(P0.05),且NBP組DCX+/Brdu+細(xì)胞多于NBP+3-MA組(P0.05)。NBP組相比vehicle組及NBP+3-MA組,其梗死周邊區(qū)Brdu+/CD31+及Neu N+/DAPI+細(xì)胞數(shù)均明顯較多(P0.05),vehicle組與NBP+3-MA組之間則無無明顯差異(P0.05)。WB測定自噬相關(guān)蛋白表達(dá)結(jié)果顯示,對(duì)比vehicle組,NBP組相較vehicle組,其Beclin-1、LC3Ⅱ/Ⅰ表達(dá)量明顯升高,P62明顯降低(P0.05);對(duì)比NBP組,3-MA合并給藥組LC3Ⅱ/Ⅰ表達(dá)量明顯減低,P62表達(dá)量較高(P0.05)。結(jié)論:NBP可能通過促進(jìn)光化學(xué)腦梗死后自噬行為,改善梗死周邊區(qū)神經(jīng)細(xì)胞存活,促進(jìn)梗死后神經(jīng)血管再生情況。此種保護(hù)作用可部分被自噬抑制劑3-MA削弱。目的:為了探究PI3K-Akt-m TOR經(jīng)典信號(hào)通路在NBP對(duì)腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞糖氧剝奪再灌注損傷保護(hù)效應(yīng)中所發(fā)揮的作用。方法:將鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞(BMEC)分為正常對(duì)照組(Control)、糖氧剝奪再灌注組(OGD)、糖氧剝奪再灌注+NBP組(NBP)、糖氧剝奪再灌注+NBP+LY294002組(OGD/NL)四組來研究。不同組BMEC糖氧剝奪造模前分別進(jìn)行不同干預(yù)。NBP及OGD/NL組OGD造模前分別用NBP及NBP+LY294002預(yù)處理12h。MTT實(shí)驗(yàn)觀察OGD后細(xì)胞存活率,WB檢測自噬相關(guān)蛋白及PI3K-Akt-m TOR信號(hào)通路表達(dá)情況。結(jié)果:相較OGD組,不同濃度(1u M、10u M及100u M)NBP預(yù)處理均可以提高OGD后細(xì)胞存活率(P0.05),但NBP和LY294002同時(shí)干預(yù),其存活率顯著低于不同濃度NBP及OGD組(P0.05)。與control組對(duì)比,OGD組及OGD/NL組細(xì)胞表現(xiàn)出了較高的Beclin-1及LC3Ⅱ/Ⅰ表達(dá)量(P0.05)。NBP及OGD/NL組的Beclin-1及LC3Ⅱ/Ⅰ表達(dá)量對(duì)比OGD組明顯降低(P0.05),P62蛋白表達(dá)明顯升高(P0.05)。OGD/NL組對(duì)比NBP組有更低的P62表達(dá)量(P0.05)。NBP組p-m TOR/m TOR、p-Akt/Akt比值均較OGD組高(P0.05)。NBP組與OGD/NL組對(duì)比,除NBP組PI3K表達(dá)量較高外(P0.05),余無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)結(jié)論:糖氧剝奪再灌注損傷可增加細(xì)胞內(nèi)自噬活性,而NBP預(yù)處理可通過激活PI3K-Akt-m TOR通路降低自噬活性,從而對(duì)OGD細(xì)胞起到一定保護(hù)作用。
【圖文】：

法 SPSS 21 分析。計(jì)量資料采用均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。的方差分析，梗死百分比采用獨(dú)立樣本 t 檢驗(yàn)，P義。化學(xué)腦梗后神經(jīng)功能恢復(fù)的影響分造模后第 1，3，7 天，NBP 組及 vehicle 組小鼠 m，造模后第 14、21 及第 28 天，NBP 組小鼠 mNSS 評(píng)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見圖 1。

圖 2 不同時(shí)點(diǎn)三組小鼠轉(zhuǎn)棒試驗(yàn)結(jié)果2. NBP 對(duì)光化學(xué)腦梗后第 7 天梗死體積的影響梗死第 7 天對(duì)各組小鼠取腦進(jìn)行尼氏染色，，Vehicle 組平均梗死體積占比為（3.61±0.64）%，NBP 組平均梗死體積占比（2.72±0.81）%，兩組間的梗死體積占比具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）。
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R743.3

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本文編號(hào)：2668182