【摘要】：目的:顱內(nèi)動(dòng)脈瘤的病因還不十分清楚。目前認(rèn)為血流動(dòng)力學(xué)變化所引發(fā)的內(nèi)皮細(xì)胞損傷、血管炎癥和管壁重構(gòu)是顱內(nèi)動(dòng)脈瘤形成和破裂的可能原因。本研究通過(guò)模擬血管分叉處血流動(dòng)力學(xué)的體外T型流動(dòng)系統(tǒng)作用于人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC),探究血流動(dòng)力學(xué)對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài)的影響及內(nèi)皮細(xì)胞受損的相關(guān)機(jī)制。方法:體外培養(yǎng)HUVEC及運(yùn)用RNAi kaiso重組慢病毒轉(zhuǎn)染HUVEC。將兩種細(xì)胞種植于無(wú)菌載玻片上,細(xì)胞完全融合后,將載玻片置入T型流動(dòng)系統(tǒng)。加載500ml/min流量的的沖擊流0、3、6、12小時(shí)。運(yùn)用免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)、Western Blot和免疫共沉淀技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化及kaiso相關(guān)蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果:(1)正常HUVEC在沖擊流場(chǎng)的作用下的形態(tài)學(xué)變化:a.普通倒置顯微鏡下觀察:1區(qū)細(xì)胞基本不變;2區(qū)細(xì)胞密度明顯下降,細(xì)胞連接分離,細(xì)胞間隙拉大,并發(fā)生與流體方向平行的軸樣性拉長(zhǎng);3區(qū)細(xì)胞密度增大,細(xì)胞變圓;b.免疫細(xì)胞化學(xué)結(jié)果顯示:在沖擊流場(chǎng)的作用下,細(xì)胞骨架2區(qū)出現(xiàn)了與沖擊流方向平行一致軸樣性分布,而1區(qū)和3區(qū)無(wú)明顯變化。(2)正常HUVEC的Western Blot結(jié)果顯示:隨著沖擊時(shí)間延長(zhǎng),HUVEC內(nèi)mmp-2、mmp-9、kaiso的表達(dá)上升,timp-2、timp-1表達(dá)下降,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),而P120的表達(dá)無(wú)明顯變化(P0.05);正常HUVEC的免疫共沉淀結(jié)果顯示:隨著沖擊時(shí)間延長(zhǎng),kaiso和p120在HUVEC內(nèi)的結(jié)合量明顯上升。(3)運(yùn)用RNAi kaiso慢病毒轉(zhuǎn)染的HUVEC,其Western Blot結(jié)果顯示:mmp-2、mmp-9、timp-1的表達(dá)下降,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),timp-2和p120表達(dá)變化不大(P0.05)。結(jié)論:在沖擊流場(chǎng)的作用下,高WSS和高WSSG區(qū)域的細(xì)胞密度明顯下降,細(xì)胞連接分離,細(xì)胞間隙拉大,并發(fā)生與流體方向平行的軸樣性拉長(zhǎng),p120與kaiso的結(jié)合增加,從而促進(jìn)了炎癥因子mmp-2、mmp-9的表達(dá),引發(fā)血管壁炎癥反應(yīng),造成內(nèi)皮細(xì)胞損傷,促進(jìn)顱內(nèi)動(dòng)脈瘤的形成。
【圖文】：

圖一圖 1 示沖擊 12h 后不同區(qū)域內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài)差異 A）1 區(qū)，，細(xì)胞密度基本無(wú)變化，細(xì)胞維持融合狀態(tài)，但形態(tài)仍為多邊形；B）2 區(qū)，細(xì)胞密度下降明顯，細(xì)胞間連接有分離，細(xì)胞間隙拉大，被拉長(zhǎng)，且有一個(gè)軸樣性分布并與流體方向平行一致；C）3 區(qū)，細(xì)胞密度增加，形態(tài)與沖之前相比更圓。沖擊流為水平方向。圖二圖2 示在倒置熒光顯微鏡下多個(gè)視野合并成的沖擊12h后不同區(qū)域內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài)差異圖片。3.2 免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)沖擊流場(chǎng)作用下內(nèi)皮細(xì)胞 VE-Cadherin 和細(xì)胞骨架 F-actin 的變化情況

形態(tài)與沖之前相比更圓。沖擊流為水平方向。圖二圖2 示在倒置熒光顯微鏡下多個(gè)視野合并成的沖擊12h后不同區(qū)域內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài)差異圖片。3.2 免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)沖擊流場(chǎng)作用下內(nèi)皮細(xì)胞 VE-Cadherin 和細(xì)胞骨架 F-actin 的變化情況加載 500ml/min 流量的沖擊流場(chǎng)作用下，對(duì)載玻片上的正常細(xì)胞給予 12h的沖擊后，對(duì)膜蛋白 VE-Cadherin 進(jìn)行間接熒光染色，對(duì)細(xì)胞骨架 F-actin 用鬼筆環(huán)肽進(jìn)行直接熒光染色，探索不同剪切力和剪切力梯度區(qū)域細(xì)胞對(duì)沖擊流場(chǎng)
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R739.41

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本文編號(hào)：2667603